ความแตกต่างที่สำคัญ – หน้า SDS กับ Western Blot
Western blotting เป็นเทคนิคที่ตรวจจับโปรตีนจำเพาะจากตัวอย่างโปรตีน เทคนิคนี้ดำเนินการผ่านขั้นตอนสำคัญหลายประการ ได้แก่ เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส การซับซับ และการผสมข้ามพันธุ์ Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) เป็นเทคนิคเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสชนิดหนึ่งซึ่งใช้ในการแยกโปรตีนตามขนาด (น้ำหนักโมเลกุล) Western blot เป็นแผ่นพิเศษของเยื่อกระดาษซับมันซึ่งใช้ในการถ่ายโอนโปรตีนในรูปแบบเดียวกันในหน้า SDS ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง SDS Page และ western blot คือ SDS Page อนุญาตให้แยกโปรตีนในส่วนผสม ในขณะที่ western blot ช่วยให้สามารถตรวจจับและหาปริมาณโปรตีนจำเพาะจากส่วนผสมทั้งสองมีประโยชน์ในการศึกษาวิเคราะห์โปรตีน
หน้า SDS คืออะไร
SDS Page เป็นเทคนิคเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสที่ใช้สำหรับการแยกโปรตีน มักใช้ในชีวเคมี พันธุศาสตร์ นิติเวช และอณูชีววิทยา เมื่อแยกโปรตีนออกจากตัวอย่างแล้ว พวกมันจะถูกเรียกใช้บนเจลที่ประกอบด้วย SDS และโพลีอะคริลาไมด์ SDS คือสารซักฟอกที่มีประจุลบซึ่งใช้ในการทำให้โปรตีนเป็นเส้นตรง (โปรตีนที่ทำให้เสียสภาพ) และให้ประจุลบกับโปรตีนเชิงเส้นตามสัดส่วนกับมวลโมเลกุลของพวกมัน โพลีอะคริลาไมด์กลายเป็นส่วนรองรับเจล โปรตีนที่แปลงสภาพซึ่งมีประจุลบจะย้ายไปยังปลายด้านบวกของอุปกรณ์ผ่านทางเจล ตามขนาดของโปรตีน ความเร็วในการโยกย้ายแตกต่างกันไปตามโปรตีนและการแยกตัวเกิดขึ้น ดังนั้น หน้า SDS จึงมีประโยชน์สำหรับการแยกโปรตีนแต่ละชนิดตามขนาด
การเตรียมเจลโพลีอะคริลาไมด์สำหรับการแยกโปรตีนเป็นขั้นตอนสำคัญในหน้า SDSความเข้มข้นที่ถูกต้องของโพลีอะคริลาไมด์และชนิดของสารเชื่อมขวางที่ใช้ส่งผลกระทบอย่างมากต่อคุณสมบัติทางกายภาพของเจล ซึ่งทำให้การแยกโปรตีนที่แตกต่างกันออกไปอย่างแท้จริง ควรมีการจัดการขนาดรูพรุนของเจลอย่างเหมาะสมเพื่อการแยกสารที่มีประสิทธิภาพ อย่างไรก็ตาม SDS Page ถือเป็นเทคนิคการแยกโปรตีนที่มีความละเอียดสูง
เทคนิค SDS Page มีข้อจำกัดที่สำคัญในการวิเคราะห์โปรตีน เนื่องจาก SDS ทำลายโปรตีนก่อนการแยกตัว จึงไม่อนุญาตการตรวจจับกิจกรรมของเอนไซม์ ปฏิกิริยาการจับกับโปรตีน ปัจจัยร่วมของโปรตีน ฯลฯ
รูปที่ 01: เพจ SDS
Western Blot คืออะไร
เทคนิคการซับแบบตะวันตกช่วยให้สามารถตรวจจับโปรตีนจำเพาะจากส่วนผสมของโปรตีนและการวัดปริมาณและน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนWestern blot เป็นเมมเบรนที่ใช้ระหว่างขั้นตอนการซับเพื่อให้ได้ภาพสะท้อนของรูปแบบโปรตีนในเจล SDS-polyacrylamide เมมเบรนที่ใช้สำหรับการซับแบบตะวันตกนั้นส่วนใหญ่ประกอบด้วยไนโตรเซลลูโลสหรือโพลีไวนิลลิดีนไดฟลูออไรด์ (PVDF) เมมเบรนที่มีโปรตีนที่ถ่ายโอนสามารถใช้เพื่อระบุโปรตีนที่ต้องการได้ ต้องใช้แอนติบอดีคุณภาพสูงในการตรวจหาโปรตีนที่ต้องการโดยการผสมข้ามพันธุ์ แอนติบอดีจับกับแอนติเจนจำเพาะของมันและเผยให้เห็นการมีอยู่ของแอนติเจนที่ต้องการซึ่งเป็นโปรตีน
การถ่ายโอนโปรตีนจากเจล SDS polyacrylamide ไปยัง Western blot ดำเนินการโดย electroblotting เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพและรวดเร็วซึ่งทำให้โปรตีนอิเล็กโตรโฟเรสออกจากเจลและส่งผ่านไปยังเยื่อหุ้มไนโตรเซลลูโลส (western blot)
รูปที่ 02: Western Blot
หน้า SDS กับ Western Blot ต่างกันอย่างไร
หน้า SDS กับ Western Blot |
|
| SDS เพจเป็นเทคนิคเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส | Western blot เป็นเทคนิคที่ทำบนเมมเบรนเพื่อตรวจหาโปรตีนจำเพาะจากส่วนผสม |
| ใช้ | |
| หน้า SDS ช่วยให้แยกโปรตีนตามขนาดได้ | Western blot อนุญาตให้ถ่ายโอนโปรตีนบนเจลหน้า SDS โดยไม่เปลี่ยนรูปแบบ & ช่วยให้เกิดการผสมพันธุ์กับแอนติบอดีจำเพาะ |
| ข้อเสีย | |
| โปรตีนเสียสภาพ ต้นทุนสูง และสารเคมีที่เป็นพิษต่อระบบประสาทเป็นข้อเสียของเทคนิคนี้ | เทคนิคนี้ใช้เวลานานและต้องมีเงื่อนไขส่วนบุคคลและการควบคุมเฉพาะที่มีประสบการณ์ |
สรุป – SDS Page vs Western Blot
SDS page และ western blot เป็นสองวิธีที่เกี่ยวข้องกับการวิเคราะห์โปรตีน SDS Page ช่วยให้แยกโปรตีนบนเจลได้ง่ายตามน้ำหนักโมเลกุล Western blot ช่วยยืนยันการมีอยู่และปริมาณของโปรตีนจำเพาะผ่านการผสมพันธุ์กับแอนติบอดีจำเพาะ นี่คือข้อแตกต่างระหว่าง SDS Page และ western blot
