ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างเฟสย้อนกลับและเฟสปกติ HPLC คือ HPLC เฟสย้อนกลับใช้เฟสนิ่งที่ไม่มีขั้วและเฟสเคลื่อนที่แบบมีขั้วในขณะที่ HPLC เฟสปกติใช้เฟสอยู่กับที่และเฟสเคลื่อนที่ที่มีขั้วน้อยกว่า
HPLC ระยะปกติเป็นเทคนิคที่เก่าแก่ที่สุดของ HPLC ที่ Tswett ใช้ในการแยกสารสกัดจากพืช เขาใช้ชอล์คในเสาแก้ว นี่เป็นโหมดคลาสสิกของโครมาโตกราฟีที่นำไปสู่การตั้งชื่อเป็นเทคนิค "ปกติ" ในทางกลับกัน HPLC เฟสกลับตรงกันข้ามกับเทคนิคปกติซึ่งนักวิทยาศาสตร์ได้พัฒนาขึ้นเมื่อเร็ว ๆ นี้
HPLC แบบย้อนกลับคืออะไร
ย้อนกลับ HPLC เป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีที่เราใช้เฟสอยู่กับที่ไม่ชอบน้ำ ในบรรดาวิธี HPLC ทั้งหมด เราใช้วิธีนี้ประมาณ 70% เนื่องจากการบังคับใช้ในวงกว้างและการทำซ้ำได้ เฟสคงที่ไม่มีขั้วและเฟสเคลื่อนที่มีขั้ว
โดยส่วนใหญ่ นักวิทยาศาสตร์ใช้น้ำที่ผสมน้ำกับตัวทำละลายอินทรีย์ที่มีขั้วที่ผสมกันได้ เช่น อะซิโตไนไทรล์หรือเมทานอลเป็นเฟสเคลื่อนที่ ดังนั้น ตัววิเคราะห์จะโต้ตอบกับเฟสนิ่งที่ไม่มีขั้ว
HPLC เฟสปกติคืออะไร
HPLC เฟสปกติเป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีที่เราใช้เฟสอยู่กับที่ที่ชอบน้ำ เป็นวิธีการดั้งเดิมของ HPLC แม้ว่าเราจะไม่ได้ใช้มันมากนัก เฟสที่อยู่กับที่เป็นแบบมีขั้ว และเฟสเคลื่อนที่เป็นแบบไม่มีขั้ว ที่สำคัญกว่านั้น ขั้นตอนมือถือของเทคนิคนี้เป็นแบบออร์แกนิก 100% หมายความว่าไม่มีการใช้น้ำสำหรับสิ่งนี้
รูปที่ 01: ตัวอย่างโปรไฟล์สำหรับโครมาโตแกรม HPLC เฟสปกติและเฟสย้อนกลับตามขั้วของส่วนประกอบในการวิเคราะห์
โดยปกติ เฟสอยู่กับที่ประกอบด้วยซิลิกา ไซยาโน ไดออล พันธะอะมิโน เป็นต้น เฟสเคลื่อนที่รวมถึงตัวทำละลายอินทรีย์ เช่น เฮกเซน เอทิล อะซิเตต เป็นต้น เทคนิคนี้มีพื้นฐานอยู่บนการกักเก็บโมเลกุลของตัวทำละลายหรือวิเคราะห์ไว้บน เฟสอยู่กับที่
HPLC เฟสย้อนกลับและเฟสปกติต่างกันอย่างไร
ย้อนกลับ HPLC เป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีที่เราใช้เฟสอยู่กับที่ไม่ชอบน้ำ ระยะนิ่งของเทคนิคนี้ไม่มีขั้วในขณะที่ระยะเคลื่อนที่เป็นขั้ว นอกจากนี้ นักวิทยาศาสตร์ยังใช้ส่วนผสมที่เป็นน้ำกับตัวทำละลายอินทรีย์แบบมีขั้วที่ผสมกันได้ เช่น อะซีโตไนไตรล์หรือเมทานอลเป็นเฟสเคลื่อนที่ใน HPLC แบบรีเวอร์สเฟสในทางตรงกันข้าม HPLC เฟสปกติเป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีซึ่งเราใช้เฟสอยู่กับที่ที่ชอบน้ำ เฟสที่อยู่กับที่ของเทคนิคนี้มีขั้วในขณะที่เฟสเคลื่อนที่นั้นไม่มีขั้ว นอกจากนั้น นักวิทยาศาสตร์ยังใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ เช่น เฮกเซน เอทิลอะซิเตต เป็นต้น เป็นเฟสเคลื่อนที่ของ HPLC เฟสปกติ อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงความแตกต่างระหว่างเฟสย้อนกลับและเฟสปกติ HPLC ในรูปแบบตาราง
สรุป – ระยะย้อนกลับเทียบกับระยะปกติ HPLC
เทคนิค HPLC แบบย้อนกลับและเฟสปกติเป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีของเหลวสองแบบ ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างเฟสย้อนกลับและเฟสปกติ HPLC คือเฟสย้อนกลับ HPLC ใช้เฟสอยู่กับที่แบบไม่มีขั้วและเฟสเคลื่อนที่แบบมีขั้วในขณะที่ HPLC เฟสปกติใช้เฟสอยู่กับที่และเฟสเคลื่อนที่แบบมีขั้วน้อยกว่า
