ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง RP HPLC และ HIC คือ RP HPLC ใช้เฟสเคลื่อนที่แบบมีขั้วมากกว่าและเฟสอยู่กับที่ที่มีขั้วน้อยกว่า ในขณะที่ HIC ใช้เฟสคงที่ที่ไม่ชอบน้ำซึ่งช่วยให้โมเลกุลที่ไม่ชอบน้ำสามารถยึดติดกับมันได้
โครมาโตกราฟีเป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่ช่วยแยกส่วนผสมออกเป็นส่วนประกอบ ขั้นแรก เราต้องละลายตัวอย่างเพื่อแยกเป็นสารละลาย ส่วนผสมของสารละลายและสารนี้เรียกว่าเฟสเคลื่อนที่ จากนั้นเฟสเคลื่อนที่จะถูกส่งผ่านวัสดุอื่นที่เรียกว่าเฟสนิ่ง เฟสคงที่เป็นตัวกำหนดการแยกส่วนประกอบ การแยกตัวเกิดขึ้นเนื่องจากการแบ่งส่วนของวัสดุระหว่างเฟสเคลื่อนที่และเฟสอยู่กับที่
RP HPLC คืออะไร
คำว่า RP HPLC ย่อมาจาก Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography มันเกี่ยวข้องกับการแยกส่วนประกอบในส่วนผสมตามความชอบน้ำ ส่วนประกอบที่ไม่ชอบน้ำในเฟสเคลื่อนที่จะเชื่อมโยงกับลิแกนด์ที่ไม่ชอบน้ำที่ถูกตรึงบนเฟสที่อยู่นิ่ง ในขณะที่ส่วนประกอบที่ชอบน้ำจะชะผ่านเฟสที่อยู่กับที่โดยไม่ยึดติดกับพื้นผิวของเฟสที่อยู่กับที่
รูปที่ 01: เครื่องมือ HPLC
นอกจากนี้ วิธีการนี้มีความสามารถในการทำซ้ำได้มากกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเทคนิคโครมาโตกราฟีอื่นๆ และแสดงให้เห็นการนำไปใช้ในวงกว้างเช่นกัน ดังนั้นเราจึงใช้วิธีนี้ในห้องปฏิบัติการมากกว่า 75% ของวิธี HPLC ทั้งหมด โดยส่วนใหญ่ เราใช้น้ำที่ผสมน้ำกับตัวทำละลายอินทรีย์ที่มีขั้วผสมกันเป็นเฟสเคลื่อนที่ดังนั้นมันจะช่วยให้การยึดติดของส่วนประกอบที่ไม่ชอบน้ำในสารละลายกับพื้นผิวของเฟสที่อยู่กับที่
HIC คืออะไร
คำว่า HIC ย่อมาจาก Hydrophobic Interaction Chromatography เป็นประเภทของ HPLC แบบย้อนกลับ และวิธีนี้ใช้เป็นหลักสำหรับการแยกสารชีวโมเลกุลขนาดใหญ่ เช่น โปรตีน ในวิธีนี้ เราจำเป็นต้องใช้ตัวกลางที่เป็นน้ำเพื่อทำตัวอย่างชีวโมเลกุล เป็นเพราะตัวทำละลายอินทรีย์สามารถทำให้เกิดการเสื่อมสภาพของโปรตีนได้ นอกจากนี้ เทคนิคนี้ใช้ปฏิสัมพันธ์ระหว่างโมเลกุลขนาดใหญ่ที่มีพื้นผิวที่ไม่เข้ากับน้ำเล็กน้อยของเฟสที่อยู่กับที่ นอกจากนี้ เราต้องใช้เกลือที่มีความเข้มข้นสูงในตัวอย่างเพราะจะกระตุ้นให้เก็บโปรตีนไว้บนบรรจุภัณฑ์ กระบวนการนี้เรียกว่าการทำเกลือออก โดยการลดความเข้มข้นของเกลือทีละน้อย เราสามารถทำให้สารชีวโมเลกุลแยกจากกันตามความไม่ชอบน้ำของพวกมัน
โดยปกติ วิธีนี้ใช้เงื่อนไขตรงข้ามกับโครมาโตกราฟีการแลกเปลี่ยนไอออนในเทคนิคนี้ ก่อนอื่น เราต้องส่งสารละลายบัฟเฟอร์ผ่านคอลัมน์เพื่อลดการละลายของตัวถูกละลายในตัวอย่าง ทำให้บริเวณที่ไม่ชอบน้ำของโปรตีนเปิดเผย อย่างไรก็ตาม เมื่อโมเลกุลไม่ชอบน้ำมากขึ้น เกลือก็จำเป็นน้อยลงเพื่อส่งเสริมการผูกมัด ที่นี่ ตัวละลายที่ไม่ชอบน้ำน้อยกว่าจะถูกชะก่อน และตามการเปลี่ยนแปลงของความเข้มข้นของเกลือ ตัวถูกละลายที่ไม่ชอบน้ำมากขึ้นจะถูกชะออกไปสุดท้าย
ความแตกต่างระหว่าง RP HPLC และ HIC คืออะไร
โครมาโตกราฟีเป็นเทคนิคการวิเคราะห์สำหรับการแยกส่วนประกอบในส่วนผสม RP HPLC และ HIC เป็นเทคนิคพิเศษเกี่ยวกับโครมาโตกราฟีสองแบบ ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง RP HPLC และ HIC คือ RP HPLC ใช้เฟสเคลื่อนที่ที่มีขั้วมากกว่าและเฟสอยู่กับที่น้อยกว่า ในขณะที่ HIC ใช้เฟสคงที่ที่ไม่ชอบน้ำ ซึ่งช่วยให้โมเลกุลที่ไม่ชอบน้ำสามารถเกาะติดได้
อินโฟกราฟิกด้านล่างสรุปความแตกต่างระหว่าง RP HPLC และ HIC
สรุป – RP HPLC กับ HIC
โครมาโตกราฟีเป็นเทคนิคการวิเคราะห์สำหรับการแยกส่วนประกอบในส่วนผสม RP HPLC และ HIC เป็นเทคนิคพิเศษเกี่ยวกับโครมาโตกราฟีสองแบบ ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง RP HPLC และ HIC คือ RP HPLC ใช้เฟสเคลื่อนที่แบบมีขั้วมากกว่าและเฟสอยู่กับที่น้อยกว่า ในขณะที่ HIC ใช้เฟสคงที่ที่ไม่ชอบน้ำ ซึ่งช่วยให้โมเลกุลที่ไม่ชอบน้ำสามารถเกาะติดได้
