ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ HPLC แบบเร็วคือแรงดันปั๊มที่เราใช้สำหรับ HPLC อยู่ที่ประมาณ 40 MPa ในขณะที่แรงดันปั๊มสำหรับ HPLC แบบเร็วอยู่ที่ประมาณ 3-5 MPa
เทคนิคทั่วไปที่เราใช้ในการแยกส่วนประกอบของส่วนผสมคือ “โครมาโตกราฟีของเหลว” มีเทคนิคหลายอย่างในการบรรลุจุดประสงค์นี้ ซึ่ง HPLC ได้รับความนิยมอย่างมาก HPLC ย่อมาจาก High Performance Liquid Chromatography ที่ระบุ ปริมาณ และแยกส่วนประกอบของของผสมของเหลวในลักษณะที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพ Fast HPLC เป็นแอปพลิเคชั่นพิเศษของ HPLC ซึ่งได้รับความสนใจจากผู้ที่เกี่ยวข้องในการศึกษาวิธีแก้ปัญหาในช่วงปลายปี
HPLC คืออะไร
HPLC คือโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง มันใช้แรงดันสูงเพื่อดันตัวทำละลายให้ผ่านเข้าไปในคอลัมน์ นอกจากนี้ยังเป็นวิธีที่เหมาะในการแยกและศึกษาสารประกอบต่างๆ เช่น กรดอะมิโน กรดนิวคลีอิก คาร์โบไฮเดรต สเตียรอยด์ ยาปฏิชีวนะ และไฮโดรคาร์บอน HPLC มีข้อได้เปรียบมากมายเหนือวิธีการแยกอื่นๆ ของสารผสม เช่น ความละเอียดที่สูงขึ้นและการวิเคราะห์ที่เร็วขึ้น ขจัดความจำเป็นในการบรรจุซ้ำและการสร้างใหม่ และให้การควบคุมพารามิเตอร์ที่ดีขึ้น ดังนั้นจึงเป็นการเพิ่มประสิทธิภาพของการแยกสาร ตามหลักการแล้ว HPLC เหมาะสมสำหรับการใช้งานขนาดใหญ่ เนื่องจากสามารถแยกอนุภาคขนาดเล็กมาก และอนุญาตให้ใช้แรงดันสูงที่ทำให้ตัวทำละลายไหลได้ง่าย
รูปที่ 01: คอลัมน์ HPLC
โดยย่อ วิธีการทำงานของเทคนิค HPLC มีดังนี้ อันดับแรก เราควรแนะนำตัวอย่างในสตรีมของเฟสเคลื่อนที่โดยใช้ปั๊มแยกในปริมาณเล็กน้อย ควรรักษาแรงดันปั๊มไว้ที่ 40 MPa กระแสของเฟสเคลื่อนที่นี้แทรกซึมผ่านคอลัมน์ของ HPLC จากนั้น ส่วนประกอบในตัวอย่างก็จะผ่านคอลัมน์ด้วย อย่างไรก็ตาม ความเร็วของการเคลื่อนที่ต่างกันเนื่องจากปฏิกิริยาระหว่างส่วนประกอบตัวอย่างและตัวดูดซับภายในคอลัมน์ต่างกัน เราเรียกตัวดูดซับนี้ว่าเป็นเฟสคงที่เพราะมันอยู่ภายในคอลัมน์ (ไม่เคลื่อนที่) จากนั้น ที่ส่วนท้ายของคอลัมน์ เราสามารถเก็บตัวอย่างที่ชะออกจากคอลัมน์ ดังนั้นเราจึงสามารถรวบรวมส่วนประกอบในตัวอย่างที่แยกต่างหากได้
HPLC เร็วคืออะไร
เมื่อเร็วๆ นี้ นักวิทยาศาสตร์ด้านการวิจัยที่สถาบันวิจัยเชริง โพลว์ ได้พัฒนาเทคนิค HPLC อย่างรวดเร็วซึ่งเป็น HPLC เวอร์ชันขั้นสูง เนื่องจากช่วยให้แยกสารประกอบออกจากส่วนผสมได้เร็วยิ่งขึ้นหรือที่เรียกว่า HPLC แบบเร็ว เทคนิคนี้ใช้อนุภาคซิลิกาแกนกลางที่หลอมละลาย 2.7um ซึ่งทำขึ้นโดยการหลอมซิลิกาที่มีรูพรุน 0.5um เหนืออนุภาคซิลิกาที่เป็นของแข็ง อนุภาคที่สร้างขึ้นอย่างมีเอกลักษณ์เหล่านี้ทำให้ขั้นตอนการแยกเป็นไปอย่างรวดเร็วและที่แรงดันย้อนกลับต่ำกว่าที่เราใช้ใน HPLC เช่นกัน
รูปที่ 02: เครื่องมือ FPLC
HPLC แบบเร็วให้ผลลัพธ์เทียบเท่ากับ UPLC แต่นักวิทยาศาสตร์คิดว่าเทคนิคนี้เหนือกว่าเพราะไม่ต้องใช้อุปกรณ์แรงดันสูงพิเศษที่มีราคาแพงมาก สิ่งที่ยอดเยี่ยมคือ HPLC ที่รวดเร็วไม่ต้องใช้โปรโตคอลห้องปฏิบัติการใหม่ใดๆ
HPLC กับ HPLC เร็วต่างกันอย่างไร
HPLC เป็นโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง และ HPLC ที่รวดเร็วคือรูปแบบขั้นสูงของโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ HPLC แบบเร็วคือแรงดันปั๊มที่เราใช้สำหรับ HPLC อยู่ที่ประมาณ 40 MPa ในขณะที่แรงดันปั๊มสำหรับ HPLC ที่รวดเร็วจะอยู่ที่ประมาณ 3-5 MPa นอกจากนี้ เราสามารถแยกสารประกอบต่างๆ เช่น กรดอะมิโน กรดนิวคลีอิก คาร์โบไฮเดรต สเตียรอยด์ ยาปฏิชีวนะ และไฮโดรคาร์บอนโดยใช้เทคนิค HPLC ในขณะที่เทคนิค HPLC แบบเร็วส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการแยกโปรตีน
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับความแตกต่างระหว่าง HPLC และ HPLC ที่รวดเร็ว
สรุป – HPLC vs Fast HPLC
HPLC เป็นเทคนิคของโครมาโตกราฟีของเหลวที่ได้รับความนิยมอย่างมากทั่วโลก Fast HPLC คือ HPLC เวอร์ชันใหม่ โดยนักวิทยาศาสตร์วิจัยของ Schering Plough Institute ได้พัฒนาเทคนิคใหม่นี้ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ HPLC แบบเร็วนั้นขึ้นอยู่กับแรงดันปั๊มที่เราใช้สำหรับการแยก นั่นคือ; แรงดันปั๊มที่เราใช้สำหรับ HPLC อยู่ที่ประมาณ 40 MPa แต่แรงดันปั๊มสำหรับ HPLC ที่รวดเร็วนั้นอยู่ที่ประมาณ 3-5 MPa
