ข้อแตกต่างที่สำคัญของ FPLC และ HPLC คือ FPLC เป็นโครมาโตกราฟีของเหลวชนิดหนึ่งที่ทำให้ชีวโมเลกุลขนาดใหญ่บริสุทธิ์ เช่น โปรตีน นิวคลีโอไทด์ และเปปไทด์ ในขณะที่ HPLC เป็นประเภทของโครมาโตกราฟีของเหลวที่แยกสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลขนาดเล็ก
โครมาโตกราฟีของเหลวเป็นเทคนิคที่ใช้ในการแยกตัวอย่างออกเป็นส่วนประกอบแต่ละส่วน การแยกนี้เกิดขึ้นเนื่องจากการทำงานร่วมกันของตัวอย่างเฉพาะกับเฟสเคลื่อนที่และอยู่กับที่ ส่วนประกอบภายในตัวอย่างจะถูกแยกตามความสัมพันธ์ของแต่ละส่วนประกอบสำหรับเฟสเคลื่อนที่ในโครมาโตกราฟีของเหลว เมื่อเฟสเคลื่อนที่และตัวอย่างเคลื่อนผ่านคอลัมน์ ส่วนประกอบของตัวอย่างจะเริ่มแยกออกเป็นแถบที่สามารถตรวจพบได้ด้วยเครื่องสเปกโตรสโคปี UV-VISดังนั้น FPLC และ HPLC จึงเป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีของเหลวสองประเภท
FPLC คืออะไร
FPLC คือโครมาโตกราฟีของเหลวชนิดหนึ่งที่ทำให้ชีวโมเลกุลขนาดใหญ่บริสุทธิ์ เช่น โปรตีน นิวคลีโอไทด์ และเปปไทด์ โครมาโตกราฟีของเหลวโปรตีนเร็ว (FPLC) ได้รับการพัฒนาและทำการตลาดครั้งแรกในสวีเดนโดยบริษัท Pharmacia ในปี 1982 มักใช้ในการวิเคราะห์หรือทำให้ส่วนผสมของโปรตีนบริสุทธิ์ สิ่งนี้เกิดขึ้นตามหลักการของความสัมพันธ์ของส่วนประกอบตัวอย่างสำหรับของไหลเคลื่อนที่ (เฟสเคลื่อนที่) และวัสดุที่เป็นของแข็งที่มีรูพรุน (เฟสคงที่) ใน FPLC เฟสเคลื่อนที่คือบัฟเฟอร์ และเฟสที่อยู่นิ่งคือเรซินที่ประกอบด้วยเม็ดบีด มันมักจะประกอบด้วย agarose แบบเชื่อมขวางที่บรรจุในแก้วทรงกระบอกหรือเสาพลาสติก
รูปที่ 01: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) Apparatus
ในกลยุทธ์ FLPC ส่วนใหญ่จะใช้เรซินแลกเปลี่ยนไอออน ดังนั้นโปรตีนที่สนใจจะจับกับเรซินโดยปฏิกิริยาของประจุ เทคนิค FLPC ยังใช้บัฟเฟอร์สองตัว: บัฟเฟอร์ 1 (บัฟเฟอร์ที่ทำงานอยู่) และ บัฟเฟอร์ 2 (บัฟเฟอร์สำหรับชะ) เริ่มแรก เมื่อรันบัฟเฟอร์และของผสมตัวอย่างวิ่งผ่านคอลัมน์ โปรตีนที่น่าสนใจในของผสมจะจับกับเรซินโดยอันตรกิริยาของประจุ แต่โปรตีนที่สนใจจะแยกออกจากกันและกลับสู่สารละลายในบัฟเฟอร์สำหรับตัวชะเมื่อบัฟเฟอร์สำหรับตัวชะไหลผ่านคอลัมน์เมื่อสิ้นสุดกระบวนการ ต่อมา สารละลาย (สารชะที่มีโปรตีนที่น่าสนใจ) จะผ่านเครื่องตรวจจับสองตัว ซึ่งวัดความเข้มข้นของเกลือและความเข้มข้นของโปรตีน เมื่อโปรตีนแต่ละชนิดถูกชะออกไป จะปรากฏเป็น "จุดสูงสุด" ระหว่างการตรวจจับและสามารถเก็บสะสมเพื่อใช้ต่อไปได้
HPLC คืออะไร
HPLC เป็นโครมาโตกราฟีของเหลวชนิดหนึ่งซึ่งแยกสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลขนาดเล็ก ในปี 1969 HPLC เครื่องแรกผลิตในเชิงพาณิชย์โดย Waters Corporation ประเทศสหรัฐอเมริกาในโครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) ของผสมตัวอย่าง (สารวิเคราะห์) ในตัวทำละลาย (เฟสเคลื่อนที่) จะถูกสูบผ่านคอลัมน์ที่มีวัสดุบรรจุภัณฑ์แบบโครมาโตกราฟี (เฟสคงที่) ที่ความดันสูง ส่วนผสมของตัวอย่างถูกลำเลียงโดยกระแสก๊าซตัวพาเคลื่อนที่ของฮีเลียมหรือไนโตรเจน
รูปที่ 02: HPLC (โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง)
ส่วนประกอบในส่วนผสมตัวอย่างที่มีจำนวนการโต้ตอบน้อยที่สุดกับเฟสที่อยู่นิ่งหรือจำนวนการโต้ตอบกับเฟสเคลื่อนที่มากที่สุดจะออกจากคอลัมน์เร็วขึ้น ในทางกลับกัน ส่วนประกอบในสารผสมตัวอย่างที่มีจำนวนการโต้ตอบมากที่สุดกับเฟสที่อยู่นิ่งหรือจำนวนการโต้ตอบน้อยที่สุดกับเฟสเคลื่อนที่จะออกจากคอลัมน์ช้าลง ตามหลักการปฏิสัมพันธ์ข้างต้น ส่วนประกอบของสารผสมตัวอย่างสามารถแยกออกได้นอกจากนี้ เครื่องตรวจจับเครื่องมือยังระบุส่วนประกอบแต่ละส่วนของส่วนผสมของตัวอย่างที่ออกจากคอลัมน์ HPLC ถูกใช้เพื่อตรวจสอบตัวอย่างสิ่งแวดล้อมและชีวภาพสำหรับการมีหรือไม่มีสารประกอบที่เป็นที่รู้จัก เช่น ยา สารพิษ หรือยาฆ่าแมลง ใช้ในอุตสาหกรรมต่างๆ เช่น เภสัชกรรม สิ่งแวดล้อม นิติเวช และเคมีภัณฑ์
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง FPLC และ HPLC คืออะไร
- FPLC และ HPLC เป็นประเภทของโครมาโตกราฟีของเหลว
- ทั้งสองใช้เพื่อแยกและระบุตัวอย่างทางชีวภาพ
- พวกเขามีเฟสเคลื่อนที่เหลวและเฟสนิ่งนิ่ง
- ทั้งสองเทคนิคใช้คอลัมน์เพื่อผ่านตัวอย่าง
- เทคนิคเหล่านี้ใช้ปั๊ม เครื่องตรวจจับ วาล์ว และซอฟต์แวร์สำหรับการแยกและตรวจจับตัวอย่าง
ความแตกต่างระหว่าง FPLC และ HPLC คืออะไร
FPLC คือโครมาโตกราฟีของเหลวชนิดหนึ่งที่ใช้เพื่อทำให้ชีวโมเลกุลขนาดใหญ่บริสุทธิ์ เช่น โปรตีน นิวคลีโอไทด์ และเปปไทด์HPLC เป็นโครมาโตกราฟีของเหลวชนิดหนึ่งที่ใช้ในการแยกสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลขนาดเล็ก นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง FPLC และ HPLC นอกจากนี้ FPLC ยังใช้เครื่องวัดค่า pH และค่าการนำไฟฟ้า ตลอดจนตัวสะสมเศษส่วน ในทางตรงกันข้าม HPLC ไม่ได้ใช้เครื่องวัดค่า pH การนำไฟฟ้า และตัวสะสมเศษส่วน
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงความแตกต่างเพิ่มเติมระหว่าง FPLC และ HPLC ในรูปแบบตาราง
สรุป – FPLC vs HPLC
โครมาโตกราฟีเป็นเทคนิคการวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการที่ใช้สำหรับการแยกส่วนประกอบออกจากของผสม แบ่งออกเป็นหลายประเภท เช่น โครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์, แก๊สโครมาโตกราฟี, โครมาโตกราฟีของเหลว, โครมาโตกราฟีการแลกเปลี่ยนไอออน เป็นต้น FPLC และ HPLC เป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีของเหลวสองประเภท FPLC คือโครมาโตกราฟีของเหลวชนิดหนึ่งที่ใช้เพื่อทำให้ชีวโมเลกุลขนาดใหญ่บริสุทธิ์ เช่น โปรตีน นิวคลีโอไทด์ และเปปไทด์ ในทางกลับกัน HPLC เป็นโครมาโตกราฟีของเหลวชนิดหนึ่งที่ใช้ในการแยกสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลขนาดเล็กดังนั้น นี่คือบทสรุปของความแตกต่างระหว่าง FPLC และ HPLC
