ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ UPLC คือ HPLC อนุญาตให้ทำการวิเคราะห์อนุภาคที่มีขนาดประมาณ 5 ไมโครเมตร ในขณะที่ UPLC อนุญาตให้มีอนุภาคขนาดเล็กกว่ามากประมาณ 2 ไมโครเมตร
HPLC และ UPLC เป็นทั้งเทคนิค Liquid Chromatographic ที่มีประโยชน์ในการแยกส่วนประกอบของสารประกอบ หากต้องการทราบความแตกต่างระหว่าง HPLC และ UPLC ก่อนอื่นเราต้องรู้ว่า HPLC คืออะไร นี่เป็นเพราะว่า UPLC เป็นเวอร์ชันพิเศษของ HPLC และเราเข้าใจได้ง่ายหากเรารู้ว่า HPLC คืออะไร
HPLC คืออะไร
คำว่า HPLC ย่อมาจาก High Performance Liquid Chromatographyเป็นเทคนิคที่เราสามารถใช้แยกองค์ประกอบต่างๆ ของสารประกอบได้ นอกจากนี้ยังเป็นเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการระบุ หาปริมาณ และแยกส่วนประกอบของส่วนผสม นอกจากนี้ เทคนิคนี้ใช้แรงดันสูงเพื่อดันตัวทำละลายผ่านคอลัมน์ นอกจากนี้ การใช้งานที่สำคัญของ HPLC ยังอยู่ในชีวเคมีสำหรับการวิเคราะห์องค์ประกอบของสารประกอบ เป็นวิธีที่เหมาะสำหรับการแยกและระบุกรดอะมิโน กรดนิวคลีอิก โปรตีน ไฮโดรคาร์บอน ยาฆ่าแมลง คาร์โบไฮเดรต ยาปฏิชีวนะ สเตียรอยด์ และสารอนินทรีย์อื่นๆ อีกนับไม่ถ้วน
รูปที่ 01: ระบบ HPLC ในห้องปฏิบัติการ
โดยย่อ วิธีการทำงานของเทคนิค HPLC มีดังนี้ ประการแรก เราควรแนะนำตัวอย่างในสตรีมของเฟสเคลื่อนที่โดยใช้ปั๊มในปริมาณเล็กน้อยโดยไม่ต่อเนื่องควรรักษาแรงดันปั๊มไว้ที่ 40 MPa จากนั้น กระแสของเฟสเคลื่อนที่นี้จะแทรกซึมผ่านคอลัมน์ของ HPLC นอกจากนี้ ส่วนประกอบในตัวอย่างจะผ่านคอลัมน์ด้วย อย่างไรก็ตาม ความเร็วในการเคลื่อนที่ของพวกมันนั้นแตกต่างกัน ความแตกต่างนี้เกิดขึ้นเนื่องจากความแตกต่างในปฏิกิริยาระหว่างส่วนประกอบตัวอย่างและตัวดูดซับภายในคอลัมน์ เราเรียกตัวดูดซับนี้ว่าเป็นเฟสคงที่เพราะมันอยู่ภายในคอลัมน์ (ไม่เคลื่อนที่) ประการที่สอง ที่ส่วนท้ายของคอลัมน์ เราสามารถเก็บตัวอย่างที่แยกออกจากคอลัมน์ได้ เราสามารถระบุความแตกต่างของเวลาเก็บรักษาสำหรับแต่ละส่วนประกอบในตัวอย่างได้
UPLC คืออะไร
คำว่า UPLC ย่อมาจาก Ultra High-Performance Liquid Chromatography เป็นรูปแบบของ HPLC แต่วิธีการใช้งานเหมือนกัน อย่างไรก็ตาม วิธีนี้แตกต่างจาก HPLC ตรงที่อนุญาตให้วิเคราะห์อนุภาคขนาดเล็กมาก เช่น อนุภาคขนาดเล็ก 2 ไมโครเมตร
รูปที่ 02: อุปกรณ์ UPLC
นอกจากนี้ยังมีการวิเคราะห์ที่เร็วขึ้น ในเทคนิคนี้ เราใช้แรงดันปั๊ม 100 MPa สำหรับการใส่ตัวอย่างลงในคอลัมน์ ดังนั้น ความกดอากาศสูงนี้เป็นการยืนยันว่าตัวอย่างทั้งหมดถูกนำเข้าไปในคอลัมน์ ดังนั้น นี่จึงมีประสิทธิภาพมากเมื่อเทียบกับ HPLC
HPLC กับ UPLC ต่างกันอย่างไร
คำว่า HPLC ย่อมาจาก High Performance Liquid Chromatography ในขณะที่คำว่า UPLC ย่อมาจาก Ultra High Performance Liquid Chromatography ดังนั้นเทคนิค UPLC จึงเป็นเวอร์ชันที่พัฒนาแล้วของ HPLC ดังนั้นวิธีการใช้งานทั้งสองวิธีจึงเหมือนกัน อย่างไรก็ตาม UPLC มีประสิทธิภาพมากกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับ HPLC เนื่องจากใช้แรงดันปั๊มสูง แรงดันปั๊มสำหรับ HPLC คือ 40 MPA ในขณะที่แรงดันปั๊มสำหรับ UPLC คือ 100 MPa ดังนั้น นี่คือความแตกต่างระหว่าง HPLC และ UPLCเหนือสิ่งอื่นใด ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ UPLC คือ HPLC ช่วยให้สามารถวิเคราะห์อนุภาคที่มีขนาดประมาณ 5 ไมโครเมตร ในขณะที่ UPLC อนุญาตให้มีอนุภาคขนาดเล็กกว่ามากประมาณ 2 ไมโครเมตร
สรุป – HPLC กับ UPLC
UPLC เป็นรูปแบบหนึ่งของ HPLC ดังนั้นวิธีการดำเนินการจึงเหมือนกัน แต่เราสามารถพบคุณลักษณะที่ปรับปรุงแล้วใน UPLC เมื่อเทียบกับ HPLC ดังนั้นจึงมีความแตกต่างระหว่าง HPLC และ UPLC อย่างไรก็ตาม ข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ UPLC คือ HPLC อนุญาตให้ทำการวิเคราะห์อนุภาคที่มีขนาดประมาณ 5 ไมโครเมตร ในขณะที่ UPLC อนุญาตให้มีอนุภาคขนาดเล็กกว่ามากประมาณ 2 ไมโครเมตร
