ความแตกต่างที่สำคัญ – คราบแกรม vs กรดเร็ว
แบคทีเรียเป็นจุลินทรีย์ที่มีขนาดเล็กมาก มีความโปร่งใส และการตรวจจับได้ยากภายใต้สภาพความเป็นอยู่และไม่มีคราบสกปรก ดังนั้นจึงมีการพัฒนาวิธีการย้อมสีต่างๆ เพื่ออำนวยความสะดวกในการตรวจจับแบคทีเรีย เทคนิคการย้อมสีมีสามประเภทหลัก: การย้อมสีแบบง่าย การย้อมสีเชิงอนุพันธ์ และการย้อมสีเชิงโครงสร้าง การย้อมสีดิฟเฟอเรนเชียลเป็นเทคนิคที่ใช้มากกว่าหนึ่งรอยแยกเพื่อแยกความแตกต่างของแบคทีเรีย คราบแกรมและคราบกรดอย่างรวดเร็วเป็นที่รู้จักกันแพร่หลายมากที่สุดว่าเป็นคราบที่แตกต่างกัน การย้อมสีแกรมเป็นเทคนิคการย้อมแบบดิฟเฟอเรนเชียล ซึ่งแยกแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่มที่เรียกว่าแบคทีเรียแกรมบวกและแบคทีเรียแกรมลบคราบกรดอย่างรวดเร็วเป็นคราบที่แตกต่างกันที่ใช้ในการระบุสิ่งมีชีวิตที่เป็นกรดอย่างรวดเร็วเช่น Mycobacterium จากสิ่งมีชีวิตที่ไม่เป็นกรดอย่างรวดเร็ว นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างคราบแกรมและคราบกรดอย่างรวดเร็ว
แกรมสเตนคืออะไร
แกรมสเตนเป็นเทคนิคการย้อมสีที่แตกต่างกันที่สำคัญซึ่งใช้สำหรับการระบุแบคทีเรียในจุลชีววิทยา เทคนิคนี้แนะนำโดย Hans Christian Gram นักแบคทีเรียวิทยาชาวเดนมาร์กในปี พ.ศ. 2427 การย้อมสีแกรมแบ่งแบคทีเรียออกเป็น 2 กลุ่มใหญ่ๆ คือ แกรมบวก และแกรมลบ ซึ่งมีความสำคัญมากในการจำแนกและจำแนกแบคทีเรีย นักจุลชีววิทยาทำการย้อมแกรมเป็นขั้นตอนเริ่มต้นในการจำแนกลักษณะแบคทีเรียในระหว่างการศึกษา
แบคทีเรียถูกจัดกลุ่มตามความแตกต่างในผนังเซลล์ของพวกมัน แบคทีเรียแกรมบวกประกอบด้วยชั้น peptidoglycan หนาในผนังเซลล์ในขณะที่แบคทีเรียแกรมลบประกอบด้วยชั้น peptidoglycan บาง ๆ ในผนังเซลล์ ผลของการย้อมสีกรัมจะขึ้นอยู่กับความแตกต่างของความหนาของชั้นเปปติโดไกลแคนของผนังเซลล์
การย้อมสีกรัมดำเนินการโดยใช้รีเอเจนต์สี่แบบ ได้แก่; คราบปฐมภูมิ, มอร์แดนท์, สารลดสีและคราบเคาน์เตอร์ คริสตัลไวโอเลตและซาฟรานินถูกใช้เป็นคราบหลักและคราบเคาน์เตอร์ ตามลำดับ ในขณะที่ไอโอดีนกรัมและแอลกอฮอล์ 95% ใช้เป็นสีย้อมและสารขจัดสีตามลำดับ ขั้นตอนพื้นฐานของคราบกรัมมีดังนี้
- เตรียมป้ายแบคทีเรียบนสไลด์แก้วที่สะอาด ตรึงความร้อนและเย็น
- เปื้อนด้วยคริสตัลไวโอเล็ตเป็นเวลา 1 – 2 นาที
- ล้างคราบด้วยน้ำประปาที่ไหลช้าเพื่อขจัดคราบส่วนเกิน
- ฉีดไอโอดีนกรัมเป็นเวลา 1 นาที
- ล้างคราบด้วยน้ำก๊อกที่ไหลช้าๆ
- ละเลงด้วยแอลกอฮอล์ 95% เป็นเวลา 2 – 5 วินาที แล้วล้างออกด้วยน้ำประปาที่ไหลช้าๆ
- ป้ายหน้าเปื้อนซาฟรานิน 1 นาที
- ล้างคราบด้วยน้ำประปาที่ไหลช้าๆ ตากให้แห้งและสังเกตใต้กล้องจุลทรรศน์
ที่จุดสิ้นสุดของคราบแกรม แบคทีเรียแกรมลบจะถูกสังเกตเป็นสีชมพู ในขณะที่กรัมบวกจะสังเกตเห็นเป็นสีม่วง
รูปที่ 01: แบคทีเรียแกรมลบและแกรมบวก
ผลลัพธ์ของคราบกรัมจะขึ้นอยู่กับความหนาของชั้นเปปติโดไกลแคนในผนังเซลล์ ในขั้นตอนการกำจัดสี คราบปฐมภูมิและสารกันบูดจะถูกลบออกจากแบคทีเรียแกรมลบอย่างง่ายดาย และไม่มีสีเนื่องจากมีชั้น peptidoglycan บางๆ คราบหลักยังคงอยู่ในแบคทีเรียแกรมบวกเนื่องจากมีชั้นเปปติโดไกลแคนหนา คราบเคาน์เตอร์จะไม่ได้ผลสำหรับแบคทีเรียแกรมบวกเนื่องจากการคงอยู่ของคราบหลัก ดังนั้นกรัมบวกแบคทีเรียจะมองเห็นได้ในสีย้อมปฐมภูมินั่นคือสีม่วงคราบที่เคาน์เตอร์จะเปื้อนแบคทีเรียแกรมลบ และจะมองเห็นได้ในสีหยิบ ซึ่งเป็นสีซาฟรานิน ดังนั้นจึงง่ายที่จะจำแนกแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่มตามคราบแกรม และมีประโยชน์ในการแยกแยะและจำแนกแบคทีเรีย
กรดเร็วคืออะไร
ความคงทนต่อกรดเป็นคุณสมบัติทางกายภาพของแบคทีเรียบางชนิด โดยเฉพาะการต้านทานต่อการทำให้สีตกด้วยกรดในระหว่างขั้นตอนการย้อมสี เมื่อย้อมสีแล้ว สิ่งมีชีวิตเหล่านี้จะต้านทานกรดเจือจางและหรือกระบวนการลดสีที่มีเอธานอลเป็นพื้นฐานซึ่งพบได้ทั่วไปในโปรโตคอลการย้อมสีหลายแบบ ดังนั้นชื่อ 'acid fast' จึงถูกกำหนดให้กับสิ่งมีชีวิตเหล่านั้น แสดงคุณสมบัตินี้เนื่องจากมีสารคล้ายขี้ผึ้ง (กรดไมโคลิก) ในผนังเซลล์สูง การทดสอบนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียม ทูเบอร์คูโลซิส
รูปที่ 2: เชื้อมัยโคแบคทีเรียที่ออกฤทธิ์เร็ว
รอยเปื้อนที่เป็นกรดนี้ได้รับการพัฒนาโดย Paul Ehrlich ในปี 1882 เทคนิคการทำให้เป็นกรดอย่างรวดเร็วของ Ehrlich ได้รับการแก้ไขโดย Ziehl-Neelsen และตอนนี้มีการใช้บ่อยขึ้น ขั้นตอนการย้อมสีอย่างรวดเร็วด้วยกรดนั้นเกี่ยวข้องกับรีเอเจนต์สามแบบที่แตกต่างกัน Carbol fuschin ใช้เป็นคราบหลัก กรดแอลกอฮอล์ใช้เป็นสารลดสี เมทิลีนบลูใช้เป็นเคาน์เตอร์สเตน ขั้นตอนการย้อมสีทำได้ดังนี้
- คราบหลัก (คาร์โบล ฟูชซิน) ถูกนำไปใช้กับตัวอย่างที่ตายตัวบนสไลด์ (ทุกเซลล์จะถูกย้อมด้วยสีแดง)
- สไลด์ถูกทำให้ร้อนโดยการนึ่งเป็นเวลา 5 นาที ซึ่งจะขับคราบเข้าไปในเซลล์อย่างถูกต้อง
- จากนั้นก็เติมน้ำยาขจัดสี (จะเป็นการเอาสีย้อมสีแดงออกจากเซลล์ทั้งหมด ยกเว้นแบคทีเรียที่เป็นกรดอย่างรวดเร็ว)
- เมทิลีนบลูเพิ่มเป็นคราบเคาน์เตอร์ (ทำให้เซลล์แบคทีเรียเปลี่ยนสีทั้งหมด)
- แบคทีเรียที่เป็นกรดเร็วยังคงเป็นสีแดงในขณะที่แบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดจะย้อมเป็นสีน้ำเงิน
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง Gram Stain และ Acid Fast คืออะไร
- Gram stain และ Acid fast เป็นสองเทคนิคการย้อมที่แตกต่างกัน
- ทั้งสองเทคนิคแบ่งแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่ม
- เทคนิคทั้งสองใช้สองคราบและหนึ่งสี
แกรมสเตนกับกรดเร็วต่างกันอย่างไร
คราบแกรมเทียบกับกรดเร็ว |
|
| การย้อมแกรมเป็นเทคนิคการย้อมแบบดิฟเฟอเรนเชียล ซึ่งแยกแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่ม แบคทีเรียแกรมบวกและแบคทีเรียแกรมลบ | Acid Fast stain เป็นคราบที่แตกต่างกันซึ่งใช้เพื่อระบุสิ่งมีชีวิตที่เป็นกรดจากสิ่งมีชีวิตที่ไม่เป็นกรดได้อย่างรวดเร็ว |
| คราบหลัก | |
| คริสตัลไวโอเลตเป็นสีย้อมหลักที่ใช้กันทั่วไปในการย้อมสีกรัม | Carbol fuchsin เป็นคราบหลักที่ใช้ในกรดอย่างรวดเร็ว |
| สารลดสี | |
| แอลกอฮอล์ 95% ใช้เป็นสารลดสีในคราบกรัม | กรดแอลกอฮอล์ใช้เป็นสารลดสีในกรดอย่างรวดเร็ว |
| คราบเคาน์เตอร์ | |
| แกรมสเตนใช้ซาฟรานินเป็นเคาเตอร์สเตน | คราบกรดอย่างรวดเร็วใช้เมทิลีนบลูเป็นคราบเคาน์เตอร์ |
| การสังเกต | |
| ตรวจพบแบคทีเรียแกรมลบในสีที่เลือก และกรัมบวกตรวจพบแบคทีเรียในสีม่วง | แบคทีเรียที่เป็นกรดเร็วจะสังเกตได้เป็นสีแดงและสังเกตแบคทีเรียที่ไม่เร็วเป็นกรดเป็นสีน้ำเงิน |
สรุป – คราบแกรม vs กรดเร็ว
การมองเห็นของจุลินทรีย์ในสภาพมีชีวิตเป็นเรื่องยาก ดังนั้นจึงใช้คราบชีวภาพและขั้นตอนการย้อมสีอย่างกว้างขวางเพื่อศึกษาคุณสมบัติของคราบเหล่านั้น การย้อมสีแบบดิฟเฟอเรนเชียลเป็นเทคนิคการย้อมสีประเภทหนึ่งที่ใช้ในการแยกความแตกต่างของแบคทีเรีย คราบแกรมและคราบกรดอย่างรวดเร็วเป็นสองเทคนิคการย้อมสีแบบดิฟเฟอเรนเชียล การย้อมสีแกรมแยกความแตกต่างของแบคทีเรียแกรมลบและแบคทีเรียแกรมบวกโดยพิจารณาจากความหนาของผนังเซลล์ การย้อมสีด้วยกรดอย่างรวดเร็วช่วยแยกแยะแบคทีเรียที่เป็นกรดได้อย่างรวดเร็วจากแบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดอย่างรวดเร็ว โดยพิจารณาจากปริมาณกรดไมโคลิกในผนังเซลล์ นี่คือข้อแตกต่างระหว่าง acid fast และ gram stain
ดาวน์โหลดเวอร์ชัน PDF ของ Gram Stain vs Acid Fast
คุณสามารถดาวน์โหลดไฟล์ PDF ของบทความนี้และใช้เพื่อวัตถุประสงค์ออฟไลน์ตามหมายเหตุอ้างอิง โปรดดาวน์โหลดเวอร์ชัน PDF ที่นี่ ความแตกต่างระหว่าง Gram Stain และ Acid Fast