ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการทดสอบ PCR แบบซ้อนทั่วไปและแบบเรียลไทม์คือ PCR แบบธรรมดาเป็นเทคนิคที่พัฒนาขึ้นเพื่อขยายลำดับเฉพาะของ DNA และ PCR ที่ซ้อนกันเป็นการดัดแปลงของ PCR ทั่วไปที่ประกอบด้วยปฏิกิริยาการขยายสัญญาณแบบต่อเนื่องสองแบบ ในขณะที่จริง -time PCR เป็นตัวแปรของ PCR ทั่วไปที่สามารถหาจำนวนผลิตภัณฑ์ที่ขยายได้
PCR เป็นเทคนิคทางวิทยาศาสตร์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยและการแพทย์เพื่อตรวจหา DNA การทดสอบ PCR ใช้เพื่อตรวจหาแอนติเจนโดยการตรวจจับ DNA หรือ RNA โดยทั่วไป RNA ของไวรัสมีอยู่ในร่างกายก่อนที่จะตรวจพบแอนติบอดีหรือแสดงอาการของโรคการทดสอบ PCR สามารถบอกได้ว่ามีใครติดไวรัสหรือไม่ ปัจจุบัน PCR เป็นแบบทดสอบมาตรฐานในการตรวจหาโรค COVID-19 เทคนิค PCR มีหลายประเภท เช่น PCR แบบเรียลไทม์, PCR แบบซ้อน, PCR แบบมัลติเพล็กซ์, PCR แบบ Hot start และ PCR ระยะไกล เป็นต้น
การตรวจ PCR แบบทั่วไปคืออะไร
การทดสอบ PCR แบบธรรมดาเป็นเทคนิคการขยาย DNA ในหลอดทดลอง ที่ดำเนินการเป็นประจำในห้องปฏิบัติการทางอณูชีววิทยา วิธีนี้ทำให้สามารถผลิตชิ้นส่วนดีเอ็นเอเฉพาะได้หลายพันถึงล้านสำเนา Kary Mullis แนะนำเทคนิคนี้ในปี 1980 เทคนิคนี้ต้องใช้ชิ้นส่วน DNA ที่เรียกว่าเทมเพลต เพื่อทำสำเนาจำนวนมาก Taq polymerase ทำงานเป็นเอนไซม์ DNA polymerase และกระตุ้นการสังเคราะห์สายใหม่ของลำดับเทมเพลต
ไพรเมอร์ในส่วนผสม PCR จะทำงานเป็นจุดเริ่มต้นสำหรับการขยายส่วนย่อย ส่วนผสมทั้งหมดที่จำเป็นในการทำสำเนา DNA จะรวมอยู่ในส่วนผสม PCRปฏิกิริยา PCR ทำงานในเครื่อง PCR และควรป้อนด้วยส่วนผสม PCR ที่ถูกต้องและโปรแกรม PCR ที่ถูกต้อง หากส่วนผสมของปฏิกิริยาและโปรแกรมถูกต้อง จะสร้างสำเนา DNA ส่วนใดส่วนหนึ่งตามจำนวนที่ต้องการจาก DNA จำนวนเล็กน้อย
รูปที่ 01: การทดสอบ PCR ทั่วไป
ปฏิกิริยา PCR มีสามขั้นตอนหลัก ได้แก่ การเสื่อมสภาพ การหลอมไพรเมอร์ และการขยายเกลียว สามขั้นตอนเหล่านี้เกิดขึ้นที่อุณหภูมิต่างกันสามระดับ บัฟเฟอร์ PCR รักษาสภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการกระทำ Taq polymerase ปฏิกิริยา PCR ทั้งสามขั้นตอนนี้ถูกทำซ้ำเพื่อผลิตผลิตภัณฑ์ PCR จำนวนที่ต้องการ ที่ปฏิกิริยา PCR แต่ละครั้ง จำนวนสำเนา DNA จะเพิ่มเป็นสองเท่าดังนั้น การขยายแบบเอ็กซ์โปเนนเชียลจึงสามารถสังเกตได้ใน PCR ผลิตภัณฑ์ PCR สามารถแก้ไขได้โดยใช้เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส เนื่องจากจะสร้าง DNA จำนวนที่มองเห็นได้บนเจล และสามารถทำให้บริสุทธิ์สำหรับการศึกษาเพิ่มเติม เช่น การหาลำดับ
PCR เป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าในการวิจัยทางการแพทย์และชีวภาพ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาทางนิติเวช PCR มีคุณค่ามหาศาลเนื่องจากสามารถขยาย DNA สำหรับการศึกษาจากตัวอย่างเล็กๆ ของอาชญากรและสร้างโปรไฟล์ DNA ทางนิติเวชได้ PCR ใช้กันอย่างแพร่หลายในหลาย ๆ ด้านของอณูชีววิทยา รวมถึงการสร้างยีน การโคลนยีน การตรวจจับการกลายพันธุ์ การจัดลำดับดีเอ็นเอ ไมโครอาร์เรย์ DNA และการทดสอบความเป็นพ่อ
ชุดตรวจ PCR แบบซ้อนคืออะไร
Nested PCR เป็น PCR ชนิดหนึ่งที่ลดการขยาย DNA แบบไม่จำเพาะเจาะจง มี PCR ที่ต่อเนื่องกันสองตัวหรือปฏิกิริยาการขยายสัญญาณแบบต่อเนื่องสองปฏิกิริยาในการทดสอบ PCR แบบซ้อน ระหว่างปฏิกิริยาการขยายสัญญาณครั้งแรก จะเกิดผลิตภัณฑ์ PCR หลังจากปฏิกิริยาแรก ปฏิกิริยาการขยายที่สองจะดำเนินการกับผลิตภัณฑ์ PCR ของปฏิกิริยาแรกดังนั้นไพรเมอร์ในส่วนผสมของปฏิกิริยาที่สองจะจับกับผลิตภัณฑ์ PCR ตัวแรกและขยายออก
รูปที่ 02: Nested PCR
ไพรเมอร์คู่กันในแต่ละปฏิกิริยา การยึดเกาะแบบไม่จำเพาะของไพรเมอร์จะลดลงใน PCR ที่ซ้อนกัน การตรวจ PCR แบบซ้อนมีประโยชน์ในการเพิ่มความไวและ/หรือความจำเพาะ อย่างไรก็ตาม PCR ที่ซ้อนกันต้องการความรู้เกี่ยวกับลำดับที่สนใจ
การทดสอบ PCR แบบเรียลไทม์คืออะไร
PCR แบบเรียลไทม์หรือ PCR เชิงปริมาณ (Q PCR) คือ PCR เวอร์ชันดัดแปลงที่วัดผลิตภัณฑ์ PCR ในเชิงปริมาณ ดังนั้น เทคนิคนี้จึงหาปริมาณการขยายตามเวลาจริงโดยใช้เครื่อง PCR แบบเรียลไทม์ นอกจากนี้ยังเป็นวิธีการที่เหมาะสมสำหรับการกำหนดปริมาณของลำดับเป้าหมายหรือยีนที่มีอยู่ในตัวอย่าง
คุณสมบัติที่น่าสนใจของ PCR แบบเรียลไทม์คือมันรวมเอาทั้งการขยายเสียงและการหาปริมาณที่แท้จริงเข้าไว้ในขั้นตอนเดียว ดังนั้น ความจำเป็นในการใช้เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสในการตรวจจับจึงสามารถขจัดได้ด้วยเทคนิค PCR แบบเรียลไทม์ การใช้สีย้อมเรืองแสงเพื่อติดฉลากผลิตภัณฑ์ PCR ระหว่างปฏิกิริยา PCR จะนำไปสู่การหาปริมาณโดยตรงในที่สุด เมื่อผลิตภัณฑ์ PCR ถูกสะสม สัญญาณเรืองแสงก็จะถูกสะสมเช่นกัน และจะถูกวัดโดยเครื่องแบบเรียลไทม์ SYBR Green และ Taqman เป็นสองวิธีในการตรวจจับหรือรับชมกระบวนการขยายสัญญาณของ PCR แบบเรียลไทม์ ทั้งสองวิธีติดตามความคืบหน้าของกระบวนการขยายและรายงานปริมาณของผลิตภัณฑ์แบบเรียลไทม์
รูปที่ 03: Real-Time PCR
PCR แบบเรียลไทม์มีการใช้งานที่หลากหลาย เช่น การหาปริมาณการแสดงออกของยีน, microRNA และการวิเคราะห์ RNA แบบไม่เข้ารหัส, จีโนไทป์ SNP, การตรวจจับตัวแปรจำนวนสำเนา, การตรวจจับการกลายพันธุ์ที่หายาก, การตรวจหาสิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรม และ การตรวจหาเชื้อ
ความคล้ายคลึงกันระหว่างการทดสอบ PCR แบบซ้อนทั่วไปและแบบเรียลไทม์คืออะไร
- การทดสอบ PCR ที่ซ้อนกันและแบบเรียลไทม์เป็นการดัดแปลงของการทดสอบ PCR แบบเดิม
- ทั้งสามเทคนิคขยายตัวอย่าง DNA
- ผลิตภัณฑ์ของพวกเขาสามารถใช้ในการจัดลำดับหรือการวิเคราะห์
- การทดสอบเหล่านี้ต้องใช้ไพรเมอร์
ความแตกต่างระหว่างการทดสอบ PCR แบบซ้อนทั่วไปและแบบเรียลไทม์คืออะไร
Conventional PCR เป็นเทคนิคที่พัฒนาขึ้นเพื่อขยายลำดับเฉพาะของ DNA ในขณะเดียวกัน Nested PCR เป็นการดัดแปลง PCR ทั่วไปที่ประกอบด้วยปฏิกิริยาการขยายสัญญาณแบบต่อเนื่องสองปฏิกิริยา และ PCR แบบเรียลไทม์เป็นตัวแปรของ PCR ทั่วไปที่สามารถวัดปริมาณผลิตภัณฑ์ที่ขยายได้ดังนั้น นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการทดสอบ PCR แบบซ้อนทั่วไปและแบบเรียลไทม์ ต่างจาก PCR ทั่วไปและแบบเรียลไทม์ PCR ที่ซ้อนกันใช้ชุดไพรเมอร์สองชุด นอกจากนี้ยังมีปฏิกิริยาการขยายสัญญาณต่อเนื่องสองครั้งใน PCR ที่ซ้อนกันเพื่อลดการขยายสัญญาณที่ไม่เฉพาะเจาะจง นอกจากนี้ การทดสอบ PCR แบบทั่วไปและแบบเรียลไทม์ไม่มีปฏิกิริยาการขยายเสียงแบบต่อเนื่องสองแบบ
อินโฟกราฟิกต่อไปนี้แสดงรายการความแตกต่างระหว่างการทดสอบ PCR แบบซ้อนทั่วไปและแบบเรียลไทม์ในรูปแบบตารางสำหรับการเปรียบเทียบแบบเคียงข้างกัน
สรุป – การทดสอบ PCR แบบทั่วไปเทียบกับแบบซ้อนเทียบกับแบบเรียลไทม์
PCR แบบธรรมดาเป็นเทคนิคแรกที่พัฒนาขึ้นเพื่อขยายชิ้นส่วนเฉพาะของ DNA PCR แบบซ้อนและ PCR แบบเรียลไทม์เป็น PCR ทั่วไปสองรูปแบบ มีปฏิกิริยาการขยายสัญญาณแบบต่อเนื่องสองแบบและการใช้ชุดไพรเมอร์สองชุดใน PCR ที่ซ้อนกัน PCR แบบเรียลไทม์ได้รับการพัฒนาเพื่อวัดปริมาณผลิตภัณฑ์ PCR แบบขยาย ดังนั้น สิ่งนี้จะสรุปความแตกต่างระหว่างการทดสอบ PCR แบบซ้อนทั่วไปและแบบเรียลไทม์
