PCR เทียบกับ PCR แบบเรียลไทม์
PCR หรือปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสเป็นการค้นพบที่ปฏิวัติวงการชีววิทยาโมเลกุลสมัยใหม่ ซึ่งพัฒนาขึ้นครั้งแรกโดยนักเคมี Kary Mullis ในปี 1983 อนุญาตให้ขยายลำดับเดียวใน DNA ที่ซับซ้อนเพื่อการวิเคราะห์ แนวคิดพื้นฐานของ PCR คือไพรเมอร์สองตัวซึ่งประกอบกับสายตรงข้ามของลำดับดีเอ็นเอจะมุ่งเข้าหากัน ไพรเมอร์สร้างเส้นใยเสริม ซึ่งแต่ละเส้นมีไพรเมอร์อีกเส้นหนึ่ง ดังนั้น ผลที่ได้คือลำดับจำนวนมากที่สอดคล้องกับ DNA ที่อยู่ระหว่างไพรเมอร์ทั้งสอง เอนไซม์ DNA polymerase ใช้เพื่อขยายไพรเมอร์ใน PCRDNA polymerase เป็นเอนไซม์ที่ทนความร้อนได้ และมีความสามารถในการอยู่รอดในอุณหภูมิสูง (94 ถึง 95 °C) ซึ่งใช้สำหรับการทำให้ DNA แม่แบบเปลี่ยนสภาพ
PCR ประกอบด้วยสามขั้นตอน คือ การทำให้เสื่อมสภาพซ้ำๆ กัน การหลอมไพรเมอร์ และการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ เครื่องเทอร์โมไซเคิลใช้ในการทำปฏิกิริยานี้ เพื่อให้สามารถตั้งโปรแกรมให้เปลี่ยนอุณหภูมิได้อย่างรวดเร็วและแม่นยำ การประยุกต์ใช้ PCR เป็นการสอบสวนทางอาญา ลายนิ้วมือ DNA การตรวจหาเชื้อโรค และการวิเคราะห์ DNA ของสายพันธุ์มนุษย์ในระยะแรก
PCR ทั่วไปคืออะไร
PCR ทั่วไปมีสามขั้นตอนหลักคือ; ขั้นตอนการขยายดีเอ็นเอ การแยก PCR และการตรวจจับผลิตภัณฑ์ การแยกส่วนของ DNA มักจะทำโดย agarose gel electrophoresis จากนั้นผลิตภัณฑ์จะถูกย้อมด้วยเอไทดูอิมโบรไมด์ สุดท้าย การตรวจจับทำได้โดยการแสดงภาพแถบบนเจลภายใต้แสงยูวี ดังนั้นผลลัพธ์สุดท้ายของ PCR ทั่วไปจึงไม่แสดงเป็นตัวเลขโดยปกติ PCR ทั่วไปจะตรวจจับได้เพียงพารามิเตอร์เดียวเท่านั้น
PCR แบบเรียลไทม์คืออะไร
PCR แบบเรียลไทม์สามารถตรวจจับการขยายของผลิตภัณฑ์ได้เนื่องจากผลิตภัณฑ์ถูกสังเคราะห์ ด้วยการพัฒนาเทคโนโลยี PCR ได้กลายเป็นเทคนิคที่ได้รับความนิยมอย่างมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการตรวจจับและระบุแบคทีเรียในอาหาร PCR แบบเรียลไทม์ใช้ระบบสีย้อมเรืองแสงและเทอร์โมไซเคิลซึ่งมีความสามารถในการตรวจจับเรืองแสง
PCR ทั่วไปและ PCR แบบเรียลไทม์ต่างกันอย่างไร
• PCR ทั่วไปใช้เวลานานกว่าเนื่องจากใช้เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PCR แบบขยาย ในทางตรงกันข้าม PCR แบบเรียลไทม์ใช้เวลาน้อยกว่า เนื่องจากสามารถตรวจจับการขยายสัญญาณในช่วงแรกของปฏิกิริยาได้
• PCR แบบเรียลไทม์รวบรวมข้อมูลในช่วงการเติบโตแบบทวีคูณของ PCR ในขณะที่ PCR แบบดั้งเดิมรวบรวมข้อมูลที่จุดสิ้นสุดของปฏิกิริยา
• ผลลัพธ์จุดสิ้นสุดของ PCR แบบเดิมอาจไม่แม่นยำนัก แต่ผลลัพธ์ของ PCR แบบเรียลไทม์นั้นแม่นยำมาก
• PCR แบบเรียลไทม์มีความละเอียดอ่อนกว่า PCR ทั่วไป
• PCR ทั่วไปมีความละเอียดต่ำมาก ในขณะที่ PCR แบบเรียลไทม์สามารถตรวจพบการเปลี่ยนแปลงเพียงเล็กน้อยเนื่องจากความละเอียดสูง
• การตรวจจับจุดสิ้นสุดของ PCR ทั่วไปมีช่วงไดนามิกสั้น ในขณะที่การตรวจจับ PCR แบบเรียลไทม์มีช่วงไดนามิกกว้าง
• พบเทคนิคการตรวจจับอัตโนมัติใน PCR แบบเรียลไทม์ต่างจาก PCR ทั่วไป
• PCR ทั่วไปนั้นซับซ้อนมากและต้องใช้แรงงานมากกว่า PCR แบบเรียลไทม์
• PCR แบบเดิมไม่สามารถแยกแยะระหว่างแบคทีเรียที่ตายและมีชีวิต ต่างจาก PCR แบบเรียลไทม์
• PCR แบบเรียลไทม์ใช้ระบบสีย้อมเรืองแสงเพื่อตรวจจับผลิตภัณฑ์ ในขณะที่ PCR ทั่วไปใช้เอธิเดียมโบรไมด์และแสงยูวีในการมองเห็นแถบในตัวกลางเจล agarose
