ความแตกต่างที่สำคัญ – Transient vs Stable Transfection
การเปลี่ยนถ่ายเป็นกระบวนการที่เกี่ยวข้องกับการถ่ายโอนยีนของเซลล์ยูคาริโอตโดยใช้วิธีการทางเคมีหรือทางกายภาพ การทรานส์เฟกชันสามารถจำแนกได้เป็น 2 ประเภทหลัก ได้แก่ การถ่ายเปลี่ยนผ่านชั่วคราว และการถ่ายแบบเสถียร ในระหว่างการเปลี่ยนถ่ายชั่วคราว ยีนที่น่าสนใจไม่สามารถรวมเข้ากับจีโนมของโฮสต์และแสดงชั่วคราวภายในโฮสต์ในระยะสั้น ในขณะที่ในการถ่ายแบบเสถียร ยีนที่น่าสนใจจะรวมเข้ากับจีโนมของโฮสต์และคงอยู่เป็นเวลานานในหลายชั่วอายุคน. นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการถ่ายแบบชั่วคราวและแบบเสถียรในทั้งสองกรณี การเปลี่ยนถ่ายสำเร็จและแสดงยีนออกมา
Transient Transfection คืออะไร
การเปลี่ยนถ่ายเป็นเครื่องมือสำคัญในการแทรกยีนเข้าไปในเซลล์ยูคาริโอต ในบรรดาการถ่ายยีนทั้งสองประเภท การถ่ายชั่วคราวเป็นวิธีทั่วไปในการถ่ายโอนยีน ผ่านเวกเตอร์ ยีนแปลกปลอมจะถูกเปลี่ยนภายในเซลล์เจ้าบ้าน เมื่อ DNA แปลกปลอมเข้าสู่เซลล์โฮสต์ จะมีสองทางเลือก มันสามารถรวมเข้ากับจีโนมโฮสต์และทำซ้ำหรืออยู่ภายในโดยไม่ต้องรวมเข้ากับจีโนม การเปลี่ยนถ่ายชั่วคราวแสดงการแสดงออกชั่วคราวของยีนที่ถูกแทรกโดยไม่ได้รวมเข้ากับจีโนมของโฮสต์ ยีนแสดงออกและผลิตรหัสโปรตีนจนกว่าเซลล์จะแบ่งตัว อย่างไรก็ตาม เนื่องจากไม่สามารถรวมเข้าด้วยกัน จึงไม่สามารถทำซ้ำและเข้าสู่คนรุ่นต่อไปได้ การเปลี่ยนถ่ายประเภทนี้ประสบความสำเร็จในระยะเวลาอันสั้น ในระหว่างการแบ่งตัวของเซลล์หรือเนื่องจากปัจจัยอื่นๆ บางส่วน DNA แปลกปลอมจะถูกย่อยสลาย การเปลี่ยนถ่ายชั่วคราวจะแสดงเมื่อ DNA ต่างประเทศอยู่ในรูปของ DNA ที่มีขดลวดสูง
รูปที่ 01: Transient Transfection
การเปลี่ยนถ่ายเสถียรคืออะไร
การถ่ายยีนแบบเสถียรแสดงให้เห็นถึงการบูรณาการยีนต่างประเทศที่ประสบความสำเร็จในจีโนมของโฮสต์ เมื่อ DNA แปลกปลอมเข้าสู่เซลล์โฮสต์ ส่วนหนึ่งของ DNA ต่างประเทศจะรวมเข้ากับจีโนมของโฮสต์และกลายเป็นส่วนหนึ่งของมัน ดังนั้น DNA จากต่างประเทศจึงทำซ้ำและส่งต่อไปยังคนรุ่นต่อไปเมื่อจีโนมของโฮสต์ทำซ้ำ การเปลี่ยนถ่ายประเภทนี้ซับซ้อนและหายาก อย่างไรก็ตาม เนื่องจากการถ่ายทอดที่เสถียรในจีโนม ลักษณะนี้จึงคงอยู่เป็นเวลานานในหลายชั่วอายุคน
การเปลี่ยนถ่ายที่เสถียรเป็นกระบวนการที่ยากและต้องการการส่ง DNA และการจัดหาเซลล์ของ DNA ต่างประเทศเข้าสู่จีโนมอย่างมีประสิทธิภาพ ดังนั้น DNA เชิงเส้นจึงสนับสนุนการถ่ายที่เสถียรกว่า DNA แบบวงกลมอย่างไรก็ตาม อัตราการถ่ายที่เสถียรอยู่ที่ประมาณ 1 ใน 104 ที่เปลี่ยนรูป การเปลี่ยนถ่ายที่เสถียรสามารถสังเกตได้โดยการเปลี่ยนรูปร่วมของเครื่องหมายที่เลือกได้และดำเนินการคัดเลือกแบบเทียมบนสื่อ
รูปที่ 02: Stable Transfection
การเปลี่ยนถ่ายแบบชั่วคราวและแบบเสถียรต่างกันอย่างไร
การเปลี่ยนถ่ายแบบชั่วคราวและแบบเสถียร |
|
| DNA ต่างประเทศไม่รวมอยู่ในจีโนมโฮสต์ | DNA ต่างประเทศรวมเข้ากับจีโนมของโฮสต์และกลายเป็นส่วนหนึ่งของมัน |
| การจำลองภายในโฮสต์ | |
| ยีนที่ถ่ายโอนชั่วคราวจะไม่ทำซ้ำภายในโฮสต์ ยีนจึงไม่ส่งต่อให้คนรุ่นหลัง | ยีนถูกทำซ้ำภายในโฮสต์และส่งต่อไปยังคนรุ่นต่อไป |
| ระยะเวลาของการแสดงออกของยีน | |
| ยีนถูกแสดงเป็นช่วงเวลาหนึ่งและหลังจากนั้นจะถูกทำลาย | ยีนกลายเป็นส่วนหนึ่งของจีโนมและแสดงออกภายในรุ่นเป็นเวลานาน |
| ใช้ | |
| มีประโยชน์สำหรับการศึกษาผลกระทบของการแสดงออกของยีนหรือผลิตภัณฑ์ยีนในระยะสั้น | สิ่งนี้มีประโยชน์สำหรับการศึกษาผลกระทบของการแสดงออกของยีนในระยะยาว |
| การตรวจจับการเปลี่ยนแปลง | |
| ยีนถูกแสดงออกและสามารถตรวจพบได้ง่ายโดยการแทรกยีนนักข่าว | การถ่ายที่เสถียรสามารถตรวจจับได้ง่าย ๆ โดยการแทรกเครื่องหมายที่เลือกได้และเลือกผ่านการเลือกเทียมบนสื่อ |
| การเกิดขึ้นและกระบวนการ | |
| การเปลี่ยนถ่ายชั่วคราวเป็นเรื่องปกติและไม่ซับซ้อนในการแสดง | การเปลี่ยนถ่ายแบบเสถียรเกิดขึ้นได้ยากและซับซ้อนในการแสดง |
| ธรรมชาติของ DNA | |
| DNA supercoiled สูงเหมาะสำหรับการถ่ายแบบชั่วคราว | DNA เชิงเส้นเหมาะสำหรับการถ่ายแบบคงที่ |
| แอพพลิเคชั่น | |
| สิ่งนี้ใช้สำหรับการศึกษาการล้มของยีนหรือการทำให้เงียบด้วย RNA ที่ยับยั้งการผลิตโปรตีนในขนาดเล็กน้อย | ใช้สำหรับการผลิตโปรตีนในการศึกษาเภสัชวิทยาระยะยาวขนาดใหญ่ ยีนบำบัด การวิจัยเกี่ยวกับกลไกของการควบคุมยีนในระยะยาว |
สรุป – Transient vs Stable Transfection
ทรานส์เฟกชันชั่วคราวและเสถียรเป็นการทรานส์เฟกชันสองประเภทที่แสดงระหว่างการถ่ายโอนยีนไปยังเซลล์ยูคาริโอตโดยระบบที่ไม่ใช่ไวรัส DNA ต่างประเทศที่แปลงสภาพไม่ได้รวมเข้ากับจีโนมของโฮสต์ในการทรานส์เฟกชันชั่วคราวในขณะที่รวมเข้ากับจีโนมของโฮสต์ในการทรานส์เฟกที่เสถียร DNA ที่ขดเป็นวงกลมจะแสดงการถ่ายแบบชั่วคราวในขณะที่ DNA เชิงเส้นชอบการถ่ายแบบเสถียร นี่คือความแตกต่างระหว่างการถ่ายแบบชั่วคราวและแบบเสถียร อย่างไรก็ตาม การถ่ายแบบชั่วคราวนั้นพบได้บ่อยและง่ายกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับการถ่ายแบบเสถียร แต่การเลือกหนึ่งในสองขึ้นอยู่กับวัตถุประสงค์ของการถ่ายโอนยีนและระยะเวลาของโครงการวิจัย