ความแตกต่างที่สำคัญ – ELISA ทางตรงและทางอ้อม
immunoassay ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) หรือที่เรียกว่าเอนไซม์ immunoassay คือการทดสอบทางซีรั่มที่ตรวจพบแอนติบอดีในเลือด ใช้เป็นเครื่องมือในการวินิจฉัยเพื่อดูว่าผู้ป่วยได้รับเชื้อไวรัสบางชนิดหรือสารติดเชื้ออื่น (แอนติเจน) หรือไม่ และร่างกายได้ผลิตแอนติบอดีต่อการติดเชื้อหรือไม่ ELISA ยังสามารถระบุการติดเชื้อในอดีตและปัจจุบันได้ ดังนั้น แพทย์จึงมักใช้ ELISA เป็นการทดสอบก่อนการคัดกรองก่อนทำการวิเคราะห์โรคในเชิงลึก การทดสอบนี้สามารถทำได้ในห้องปฏิบัติการโดยการเก็บตัวอย่างเลือดจากผู้ป่วยการทดสอบ ELISA มีสองประเภท: ELISA โดยตรงและ ELISA ทางอ้อม ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง ELISA ทางตรงและทางอ้อมคือ ELISA ทางอ้อมนั้นไวกว่าและต้องการการเพิ่มแอนติบอดีรอง ในขณะที่ ELISA โดยตรงนั้นไวน้อยกว่าและใช้แอนติบอดีหลักเท่านั้น
Direct ELISA คืออะไร
ELISA เป็นการตรวจวินิจฉัยโรคเพื่อระบุการมีอยู่ของแอนติเจนหรือแอนติบอดีจำเพาะในเลือด จะทำเป็นการทดสอบจาน ใช้แอนติบอดีที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่วิเคราะห์ได้ง่าย การปรากฏตัวของแอนติเจนในตัวอย่างซีรัมจะจับกับแอนติบอดีจำเพาะที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ ในขั้นตอนสุดท้าย จะมีการเติมสารตั้งต้นเฉพาะเพื่อทำปฏิกิริยากับเอนไซม์ เอนไซม์จะเปลี่ยนสารตั้งต้นเป็นผลิตภัณฑ์ที่มีสีหรือให้สัญญาณ การเปลี่ยนแปลงของสีในซับสเตรตทางเคมีเผยให้เห็นว่ามีแอนติบอดีจำเพาะในตัวอย่างซีรัม การทดสอบ ELISA โดยตรงใช้เฉพาะแอนติบอดีหลักที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์เท่านั้น เมื่อจับกับแอนติเจน มันจะเปลี่ยนสีอย่างรวดเร็ว ซึ่งบ่งชี้ว่ามีสารติดเชื้อในเลือดอย่างไรก็ตาม ความเข้มของสัญญาณจะอ่อนลงใน ELISA โดยตรง เนื่องจากเอพิโทปถูกจำกัดให้จับกับแอนติเจน ดังนั้น ELISA โดยตรงจึงมีความไวน้อยกว่าเมื่อเทียบกับ ELISA ทางอ้อม
รูปที่ 01: การทดสอบ ELISA โดยตรง
ELISA ทางอ้อมคืออะไร
ELISA สามารถทำได้โดยใช้แอนติบอดีสองประเภทคือ; แอนติบอดีปฐมภูมิและแอนติบอดีทุติยภูมิ เครื่องมือ ELISA ทางอ้อมใช้แอนติบอดีทั้งสองประเภทเพื่อขยายสัญญาณเพื่อการตรวจจับที่ดีขึ้น เทคนิค ELISA ทางอ้อมดำเนินการดังนี้
- จานถูกฟักด้วยแอนติเจนและล้างเพื่อป้องกันการจับที่ไม่จำเพาะ
- จากนั้นก็เติมแอนติบอดีปฐมภูมิและล้าง
- แอนติบอดีทุติยภูมิที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ถูกเติมและล้าง
- เติมสารตั้งต้นและอนุญาตให้ทำปฏิกิริยากับเอนไซม์
- สัญญาณถูกตรวจพบ และมีการระบุการมีอยู่หรือไม่มีของแอนติเจนจำเพาะในตัวอย่าง
ในการทดสอบ ELISA ทางอ้อม แอนติบอดีทุติยภูมิหลายตัวสามารถจับกับแอนติบอดีปฐมภูมิเพียงตัวเดียว แอนติบอดีทุติยภูมิเชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่วิเคราะห์ได้ง่าย ดังนั้น การเชื่อมโยงเพียงครั้งเดียวสามารถสร้างสัญญาณที่แรงได้เนื่องจากการโต้ตอบมากกว่าหนึ่งรายการ ดังนั้น ELISA ทางอ้อมจึงมีความไวมากกว่า ELISA โดยตรง อย่างไรก็ตาม ELISA ทางอ้อมสามารถส่งสัญญาณที่ไม่เฉพาะเจาะจงเนื่องจากปฏิกิริยาข้ามของแอนติบอดีทุติยภูมิ
รูปที่ 02: การทดสอบ ELISA ทางอ้อม
ELISA ทางตรงและทางอ้อมต่างกันอย่างไร
ELISA ทางตรงและทางอ้อม |
|
| ELISA โดยตรงมีความไวน้อยกว่าเมื่อเทียบกับ ELISA ทางอ้อม | ELISA ทางอ้อมมีความอ่อนไหวมากกว่า |
| เวลาที่ใช้ | |
| การทดสอบ ELISA โดยตรงเป็นกระบวนการที่รวดเร็ว | ELISA ทางอ้อมใช้เวลานาน |
| การใช้แอนติบอดี | |
| ใช้แอนติบอดีเพียงชนิดเดียว (แอนติบอดีปฐมภูมิ) ใน ELISA โดยตรง | แอนติบอดีหลักและรองใช้สำหรับ ELISA ทางอ้อม |
| เชื่อมโยงกับเอนไซม์ | |
| แอนติบอดีปฐมภูมิเชื่อมโยงกับเอนไซม์ | แอนติบอดีรองเชื่อมโยงกับเอนไซม์ |
| ปฏิกิริยาข้ามของแอนติบอดีที่สอง | |
| Direct ELISA กำจัดปฏิกิริยาข้ามของแอนติบอดีที่สอง | ELISA ทางอ้อมได้รับผลกระทบจากปฏิกิริยาข้ามของแอนติบอดีที่สอง |
| สัญญาณ | |
| สัญญาณอ่อนเมื่อเทียบกับ ELISA ทางอ้อม | สัญญาณถูกขยายใน ELISA ทางอ้อม ดังนั้นจึงง่ายต่อการตรวจจับ |
สรุป – ELISA ทางตรงและทางอ้อม
ELISA เป็นเทคนิคทางชีวเคมีที่ใช้เป็นหลักในวิทยาภูมิคุ้มกันเพื่อตรวจหาแอนติบอดีหรือแอนติเจนในตัวอย่างเลือดของผู้ป่วย สามารถทำได้ผ่านสองกระบวนการที่เรียกว่า ELISA โดยตรงหรือโดยอ้อม การทดสอบ ELISA โดยตรงใช้เฉพาะแอนติบอดีหลักในการตรวจหาแอนติเจนในขณะที่ ELISA ทางอ้อมใช้ทั้งแอนติบอดีปฐมภูมิและทุติยภูมิใน ELISA โดยตรง แอนติบอดีปฐมภูมิจะถูกติดฉลากในขณะที่แอนติบอดีทุติยภูมิของ ELISA ทางอ้อมจะถูกติดฉลาก นี่คือข้อแตกต่างระหว่าง ELISA ทั้งทางตรงและทางอ้อม
