ความแตกต่างที่สำคัญ – YAC กับ M13 Phage Vector
การโคลนดีเอ็นเอเป็นกระบวนการสำคัญที่ช่วยให้สามารถแพร่กระจายชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่สำคัญของสิ่งมีชีวิตได้ จำเป็นต้องมีการรวม DNA เฉพาะกับ DNA เวกเตอร์เพื่อสร้าง DNA รีคอมบิแนนท์ซึ่งเปลี่ยนเป็นสิ่งมีชีวิตที่เป็นโฮสต์ เวกเตอร์คือโมเลกุลดีเอ็นเอซึ่งทำหน้าที่เป็นพาหนะในการนำสารพันธุกรรมแปลกปลอมเข้าสู่เซลล์หรือสิ่งมีชีวิตอื่น ควรมีความสามารถในการทำซ้ำภายในสิ่งมีชีวิตที่เป็นโฮสต์และผลิตสำเนาดีเอ็นเอลูกผสมหลายชุด มีเวกเตอร์หลายชนิดที่ใช้ในการโคลนดีเอ็นเอ โครโมโซมประดิษฐ์ของยีสต์ (YAC) และเวกเตอร์ฟาจ M13 เป็นสองประเภทในนั้นความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง YAC และ M13 phage vector คือ YAC เป็นโครโมโซมเทียมที่จำลองแบบในเซลล์ยีสต์ในขณะที่ M13 phage vector เป็น DNA ทรงกลมเส้นเดียวของแบคทีเรีย M13 ซึ่งทำซ้ำในเซลล์ E Coli
เวกเตอร์ YAC คืออะไร
YAC เป็นโครโมโซมที่สร้างขึ้นโดยเทียมซึ่งมีความสามารถในการนำ DNA ต่างประเทศจำนวนมากและทำซ้ำภายในเซลล์ยีสต์ มีลำดับเซนโทรเมียร์ เทโลเมียร์ และการจำลองแบบอัตโนมัติที่จำเป็นสำหรับการจำลองแบบและความเสถียร YAC ควรมีเครื่องหมายเลือกหรือเครื่องหมายและไซต์จำกัดเพื่อให้เป็นเวกเตอร์การโคลนที่มีประสิทธิภาพ ลำดับขนาดใหญ่ตั้งแต่ 1,000 kb ถึง 2000 kb สามารถแทรกลงใน YAC และถ่ายโอนไปยังยีสต์ได้
รูปที่ 01: YAC Vector
M13 Phage Vector คืออะไร
Bacteriophage M13 เป็นไวรัสที่แพร่เชื้อและทำซ้ำใน E Coli จีโนมของแบคทีเรีย M13 มีขนาดเล็กประมาณ 6.7 kb เป็น DNA ประสาทสัมผัสแบบเกลียวเดี่ยว แบบวงกลม และแบบบวก ไวรัสนี้ติดเชื้อแบคทีเรีย E Coli โดยเฉพาะผ่าน F pilus เมื่อมันเข้าสู่ ssDNA เข้าไปในแบคทีเรีย มันจะสังเคราะห์สายเสริมและกลายเป็น dsDNA หรือรูปแบบจำลอง (RF) ของ M13 RF สามารถทำตัวเหมือนพลาสมิดภายในสิ่งมีชีวิตที่เป็นโฮสต์ dsDNA ทำซ้ำภายใน E Coli และสร้าง ssDNA ที่มี phages ใหม่ ฟาจใหม่เหล่านี้ถูกปล่อยออกมาอย่างต่อเนื่องจาก E Coli โดยไม่ฆ่าเซลล์เจ้าบ้าน อย่างไรก็ตาม การติดเชื้อทำให้การเจริญเติบโตของ E Coli ช้าลง dsDNA สามารถสกัดจากเซลล์แบคทีเรียและใช้เป็นพาหะในการโคลนดีเอ็นเอ พวกมันเรียกว่าเวกเตอร์ฟาจ M13 พวกมันสามารถจัดการและใช้งานได้ง่ายเหมือนกับพลาสมิดเวกเตอร์
ความสามารถโดยธรรมชาติของการติดเชื้อของฟาจ M13 เหล่านี้ทำหน้าที่เป็นคุณสมบัติที่ดีที่จะใช้เป็นพาหะในการโคลนยีนเมื่อพัฒนา M13 ให้เป็นเวกเตอร์ ควรมีการรวมองค์ประกอบหลายอย่างไว้ในจีโนมของมัน พวกมันคือยีนของโปรตีน lac repressor (lac I) ภูมิภาคโอเปอเรเตอร์-ใกล้เคียงของยีน lac Z โปรโมเตอร์ lac และไซต์โคลนหลายตัว (polylinker) เมื่อใช้ dsDNA ของ M13 เป็นพาหะ สามารถใช้เป็นพลาสมิดเวกเตอร์ได้ อย่างไรก็ตาม การใช้ ssDNA M13 มีข้อดีในการจัดลำดับดีเอ็นเอและการทำให้เกิดการกลายพันธุ์ที่ควบคุมโดยไซต์
เนื่องจากเวกเตอร์ฟาจ M13 มีไซต์การโคลนหลายแห่งในภูมิภาค lacZ เวกเตอร์ที่รวมกันใหม่สามารถระบุได้อย่างง่ายดายโดยการตรวจคัดกรองโคโลนีสีน้ำเงิน/ขาวบนจานวุ้นที่มี IPTG และ X-Gal แผ่นโลหะสีน้ำเงินที่ผลิตบนจานไม่มีสารฟาจที่รวมตัวใหม่ ดังนั้นจึงสามารถเลือกเฟจที่มีส่วนแทรกเพื่อวัตถุประสงค์ในการโคลนได้
รูปที่ 02: แบคทีเรีย M13
เวกเตอร์ฟาจ YAC กับ M13 ต่างกันอย่างไร
YAC กับ M13 Phage Vector |
|
| YAC เป็นโครโมโซมที่ดัดแปลงพันธุกรรมซึ่งมีความสามารถในการขนส่ง DNA ต่างประเทศจำนวนมากและทำซ้ำภายในเซลล์ยีสต์ | M13 phage vector เป็นไวรัสเวกเตอร์ที่พัฒนาโดย bacteriophage M13 ซึ่งใช้ในการแทรก DNA ต่างประเทศเข้าไปใน E Coli |
| วัตถุประสงค์ | |
| YACs ออกแบบมาเพื่อโคลนจีโนม DNA ขนาดใหญ่เป็นยีสต์ | M13 เวกเตอร์ฟาจถูกใช้เพื่อแทรก DNA ต่างประเทศเข้าไปใน E Coli |
| ความยาวแทรก | |
| YAC สามารถมีจีโนมขนาดเมกะเบสได้ (1000 kb – 2000 kb) | ขนาดเม็ดมีดประมาณ 1,500 bps. |
| ก่อสร้าง | |
| YAC DNA นั้นยากที่จะทำให้บริสุทธิ์เหมือนเดิมและต้องการความเข้มข้นสูงเพื่อสร้างระบบเวกเตอร์ YAC | มันเกิดขึ้นจากวงจรอิเล็กตรอนที่สังเคราะห์แสงเป็นวงจร |
| เสถียรภาพ | |
| YAC ไม่เสถียร | M13 ฟาจสามารถแยกออกได้ง่าย |
| ขนาด | |
| เอนไซม์คือโมเลกุลที่ใหญ่กว่า | M13 เฟจเสถียรกว่า YAC |
สรุป – YAC กับ M13 Phage Vector
YAC เป็นระบบเวกเตอร์ที่สร้างขึ้นโดยเทียมโดยใช้บริเวณเฉพาะของโครโมโซมยีสต์เพื่อแทรกสารพันธุกรรมจำนวนมากลงในเซลล์ยีสต์M13 phage vector เป็นระบบเวกเตอร์ที่ได้มาจากแบคทีเรีย M 13 ซึ่งใช้ E coli เป็นสิ่งมีชีวิตที่เป็นโฮสต์ นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง YAC และ M13 Phage Vector ทั้งสองมีประโยชน์เท่าเทียมกันในเทคโนโลยีดีเอ็นเอลูกผสมและการโคลนยีน
