ความแตกต่างที่สำคัญ – อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์กับอิมมูโนฮิสโตเคมี
การวินิจฉัยโรคซึ่งใช้วิธีการทางอณูชีววิทยา ได้กลายเป็นพื้นที่ใหม่ของเทคโนโลยีห้องปฏิบัติการทางคลินิก รวมถึงการทดสอบและวิธีการทั้งหมดในการระบุโรคและทำความเข้าใจสาเหตุของโรคโดยการวิเคราะห์ DNA, RNA หรือโปรตีนที่แสดงออกในร่างกาย ความก้าวหน้าอย่างรวดเร็วในการวินิจฉัยระดับโมเลกุลได้เปิดใช้งานการวิจัยขั้นพื้นฐานเกี่ยวกับโรคติดต่อและไม่ติดต่อ สิ่งเหล่านี้ใช้เพื่อกำหนดการเปลี่ยนแปลงในลำดับหรือระดับการแสดงออกในยีนหรือโปรตีนที่สำคัญที่เกี่ยวข้องกับโรค อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ (IF) และอิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) เป็นสองเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในชีววิทยามะเร็งIF เป็นประเภทของ IHC ที่ใช้วิธีการตรวจหาสารเรืองแสงในการวิเคราะห์โมโนโคลนัลและโพลีโคลนอลแอนติบอดี ในขณะที่ IHC ใช้วิธีทางเคมีเป็นหลักในการตรวจจับโมโนโคลนัลและโพลีโคลนอลแอนติบอดี นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง IF และ IHC
Immunofluorescence (IF) คืออะไร
อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์เป็นเทคนิคการตรวจจับซึ่งแอนติบอดีที่ใช้ในการทดสอบจะถูกติดฉลากโดยใช้สีย้อมเรืองแสงหรือโปรตีนเรืองแสงเพื่อจุดประสงค์ในการตรวจจับ แอนติบอดีทุติยภูมิที่ติดฉลากอาจส่งผลให้เกิดสัญญาณพื้นหลังที่ไม่ต้องการ ดังนั้นเทคนิค IF จะขึ้นอยู่กับการติดฉลากแอนติบอดีหลักเองในปัจจุบัน เพื่อหลีกเลี่ยงสัญญาณที่ไม่ต้องการระหว่างการตรวจจับ ด้วยเทคนิคนี้ จะป้องกันการผูกมัดแบบไม่จำเพาะระหว่างแอนติบอดีปฐมภูมิและแอนติบอดีทุติยภูมิ และทำได้เร็วกว่าเนื่องจากไม่มีขั้นตอนการฟักตัวทุติยภูมิที่เกี่ยวข้อง คุณภาพของข้อมูลก็ดีขึ้นด้วย
รูปที่ 01: การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์สองครั้งสำหรับ BrdU, NeuN และ GFAP
ฟลูออโรโครมหรือสีย้อมเรืองแสงเป็นสารประกอบที่สามารถดูดซับรังสีได้ โดยเฉพาะรังสีอัลตราไวโอเลตที่ตื่นเต้น เมื่ออนุภาคไปถึงสถานะพื้นดินจากสถานะที่ถูกกระตุ้น พวกมันจะปล่อยรังสีที่เครื่องตรวจจับจับและตรวจจับเพื่อสร้างสเปกตรัม ฉลากฟลูออเรสเซนต์มีความสำคัญอย่างยิ่งที่เข้ากันได้และเสถียรสำหรับปฏิกิริยาเฉพาะ และควรคอนจูเกตกับแอนติบอดีอย่างเหมาะสมเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำ ฟลูออโรโครมที่ใช้กันมากที่สุดชนิดหนึ่งคือฟลูออเรสซินไอโซไทโอไซยาเนต (FITC) ซึ่งเป็นสีเขียว โดยมีความยาวคลื่นสูงสุดในการดูดกลืนและปล่อยที่ 490 นาโนเมตร และ 520 นาโนเมตรตามลำดับ โรดามีน ซึ่งเป็นสารอีกชนิดหนึ่งที่ใช้ใน IF มีสีแดงและมีความยาวคลื่นสูงสุดในการดูดกลืนแสงและการปล่อยก๊าซที่ 553 นาโนเมตรและ 627 นาโนเมตรที่แตกต่างกัน
อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) คืออะไร
IHC เป็นวิธีการทดสอบระดับโมเลกุลที่ฝึกฝนเพื่อระบุและยืนยันการมีอยู่ของแอนติเจนในเซลล์เป้าหมาย เซลล์เป้าหมายอาจเป็นอนุภาคที่ติดเชื้อ จุลินทรีย์ก่อโรค หรือเซลล์เนื้องอกร้าย IHC ใช้โมโนโคลนัลและโพลีโคลนอลแอนติบอดีเพื่อกำหนดหาการมีอยู่ของแอนติเจนที่มีอยู่บนผิวเซลล์ของเซลล์เป้าหมาย เทคนิคนี้ขึ้นอยู่กับการจับแอนติเจนและแอนติบอดี มาร์กเกอร์ตรวจจับถูกคอนจูเกตกับแอนติบอดีเหล่านี้เพื่อตรวจจับการมีอยู่หรือการขาดหายไปของแอนติเจนที่จำเพาะ เครื่องหมายเหล่านี้อาจเป็นเครื่องหมายทางเคมี เช่น เอนไซม์ แอนติบอดีที่ติดแท็กเรืองแสง หรือแอนติบอดีที่ติดฉลากวิทยุ
รูปที่ 02: ชิ้นหนูกับสมองที่ย้อมด้วยอิมมูโนฮิสโตเคมี
แอปพลิเคชั่นที่ได้รับความนิยมมากที่สุดของ IHC อยู่ในชีววิทยาของเซลล์มะเร็งเพื่อระบุการปรากฏตัวของเนื้องอกร้าย แต่ยังใช้สำหรับการตรวจหาโรคติดเชื้อ
ความคล้ายคลึงกันระหว่างอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์กับอิมมูโนฮิสโตเคมีคืออะไร
- อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์และอิมมูโนฮิสโตเคมีเกิดขึ้นภายใต้สภาวะในหลอดทดลอง
- เทคนิคทั้งสองนี้ใช้แอนติเจน-แอนติบอดี
- ทั้งสองเทคนิคเร็วมาก
- ผลลัพธ์ของเทคนิคสามารถทำซ้ำได้
- คุณภาพข้อมูลดีขึ้นทั้งคู่
- เทคนิคเหล่านี้ใช้ในการวินิจฉัยโรคมะเร็งและโรคติดเชื้อ
อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์และอิมมูโนฮิสโตเคมีต่างกันอย่างไร
อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ vs อิมมูโนฮิสโตเคมี |
|
| IF เป็นเทคนิคการตรวจจับที่แอนติบอดีที่ใช้ในการทดสอบจะถูกติดฉลากโดยใช้สีย้อมเรืองแสงหรือโปรตีนเรืองแสงสำหรับการตรวจจับ | IHC เป็นเทคนิคการตรวจจับที่แอนติบอดีที่ใช้ในการทดสอบจะถูกติดฉลากโดยใช้สารเคมีหรือธาตุกัมมันตภาพรังสีเพื่อตรวจจับ |
| ความแม่นยำ | |
| ความแม่นยำในเทคนิค IF นั้นสูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับ IHC | ความแม่นยำต่ำกว่าใน IHC |
| เฉพาะ | |
| ถ้าเจาะจงกว่านี้ | IHC มีความเฉพาะเจาะจงน้อยกว่า |
สรุป – อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ vs อิมมูโนฮิสโตเคมี
กลไกระดับโมเลกุลทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงมากมายในด้านการแพทย์ ทำให้เกิดวิธีการทดสอบระดับโมเลกุลขั้นสูงซึ่งทำให้เกิดการปฏิวัติในด้านการวินิจฉัยสิ่งประดิษฐ์เหล่านี้นำไปสู่การระบุและยืนยันโรคได้อย่างรวดเร็วและแม่นยำ ส่งผลให้การบริหารและการผลิตยาประสบความสำเร็จ เทคนิคเหล่านี้ยังใช้ในเภสัชวิทยาเพื่อค้นหาเป้าหมายของยาและเพื่อยืนยันคุณสมบัติทางเภสัชจลนศาสตร์ของยาในระหว่างเมแทบอลิซึมของยา IF และ IHC เป็นวิธีการวินิจฉัยสองวิธีที่มีพื้นฐานอยู่บนแนวคิดของการจับแอนติเจนและแอนติบอดี แม้ว่าโหมดการตรวจหาในเทคนิคทั้งสองจะต่างกัน IF ใช้หลักการเรืองแสงในการตรวจจับแอนติเจน และ IHC ใช้แนวคิดของการผันเคมีเพื่อตรวจหาแอนติเจน นี่คือข้อแตกต่างระหว่าง IF กับ IHC
ดาวน์โหลดไฟล์ PDF ของอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์เทียบกับอิมมูโนฮิสโตเคมี
คุณสามารถดาวน์โหลดไฟล์ PDF ของบทความนี้และใช้เพื่อวัตถุประสงค์ออฟไลน์ตามหมายเหตุอ้างอิง โปรดดาวน์โหลดไฟล์ PDF ที่นี่ ความแตกต่างระหว่างอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์และอิมมูโนฮิสโตเคมี