ความแตกต่างที่สำคัญ – RNASE A กับ RNASE H
ไรโบนิวคลีเอสคือนิวคลีเอสที่ย่อยสลาย RNA ให้เป็นหน่วยที่เล็กกว่าโดยเฉพาะ พวกเขาสามารถแบ่งออกเป็นสองประเภท; endoribonucleases และ exoribonucleases เอนโดริโบนิวคลีเอสเป็นเอนโดนิวคลีเอสที่สามารถย่อยสลาย RNA สายเดี่ยวหรือสายคู่ มันแยกพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ภายในสายโซ่พอลินิวคลีโอไทด์ RNA ตัวอย่าง ได้แก่ RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P และ RNase H. Exoribonuclease เป็น exonuclease ที่ทำให้ RNA เสื่อมโทรมโดยการกำจัดขั้วนิวคลีโอไทด์จากปลาย 5'end หรือ 3'end ของโมเลกุล RNA ตัวอย่าง ได้แก่ RNase R, RNase II, RNase D และ RNase PHความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง RNASE A และ RNASE H คือ RNase A เป็นไรโบนิวคลีเอสในตับอ่อนที่ย่อยสลาย RNA สายเดี่ยวให้เป็นส่วนประกอบที่เล็กกว่าโดยเฉพาะ ในขณะที่ RNase H เป็นเอนไซม์ที่ไม่เฉพาะเจาะจงที่แยก RNA ใน RNA-DNA ไฮบริดออกเป็นหน่วยที่เล็กกว่าผ่านทาง กลไกไฮโดรไลติก
RNASE A คืออะไร
RNase A คือไรโบนิวคลีเอสในตับอ่อนที่แยกไซโตซีนและยูราซิลที่ตกค้างที่ปลาย 3 'ของ RNA สายเดี่ยวโดยเฉพาะ RNase H ทำงานที่ความเข้มข้นของเกลือสูงกว่า (0.3M หรือความเข้มข้นของ NaCl สูงกว่า) ปฏิกิริยาไฮโดรไลติกเป็นสองขั้นตอน สร้างผลิตภัณฑ์ฟอสโฟรีเลต 3 'ผ่านตัวกลางโมโนฟอสเฟตแบบวัฏจักร 2', 3' แม้ว่ามันจะจำเพาะสำหรับ RNA สายเดี่ยวที่ความเข้มข้นของเกลือที่สูงขึ้น แต่ก็สามารถย่อยสลาย RNA และ RNA ที่มีเกลียวคู่ใน RNA-DNA ไฮบริดที่ความเข้มข้นของ NaCl ต่ำกว่า (ต่ำกว่า 0.3M NaCl)
บรูซ เมอร์ริฟิลด์สังเคราะห์เอนไซม์นี้เป็นครั้งแรก RNase A เป็นเอนไซม์ที่ได้รับความนิยมอย่างมากในการวิจัยระดับโมเลกุลRNase A ตับอ่อนของวัวเป็นตัวอย่างหนึ่งของ RNase A และเป็นหนึ่งในเอนไซม์ที่ทนทานที่สุดที่ใช้ในห้องปฏิบัติการ เอนไซม์นี้ไม่ต้องการปัจจัยร่วมในการทำงาน เป็นเอนไซม์ที่ทนความร้อนสูง RNase A เป็นเอนไซม์ตัวแรกและโปรตีนตัวที่สามที่ตรวจพบลำดับกรดอะมิโนที่ถูกต้อง เอนไซม์นี้มีขนาดเล็กมาก มีกรดอะมิโน 124 ตัว และมีมวลโมเลกุล 12600da และมีฮิสติดีนตกค้างสี่ตัว (12 ตัวและ 119 ตัวซึ่งเกี่ยวข้องกับปฏิกิริยาเร่งปฏิกิริยา)
รูปที่ 01: The RNase A
RNase A สามารถแยกได้โดยการต้มตัวอย่างหยาบ เมื่อเดือด เอนไซม์อื่นๆ ทั้งหมดจะย่อยสลาย RNase A ที่เหลืออยู่ RNase A เป็นเอนไซม์ที่เสถียรอย่างน่าอัศจรรย์ เอนไซม์นี้ยับยั้งโปรตีนสารยับยั้งไรโบนิวคลีเอส โลหะหนัก และสารเชิงซ้อนของยูริดีนวานาเดต
RNase H คืออะไร
RNase H เป็นเอนไซม์ไรโบนิวคลีเอสที่ไม่เฉพาะเจาะจงซึ่งสามารถย่อยสลาย RNA ใน RNA-DNA ไฮบริดผ่านปฏิกิริยาไฮโดรไลติก RNase H ตัดพันธะ 3'- ของ RNA ของ RNA ในไฮบริด RNA-DNA ในที่สุดก็ผลิตผลิตภัณฑ์สิ้นสุดฟอสเฟต 3'OH และ 5' ในการจำลองแบบ DNA นั้นมีบทบาทสำคัญในการขจัดไพรเมอร์อาร์เอ็นเอหลังจากสร้างสายดีเอ็นเอใหม่ ในสภาพห้องปฏิบัติการ มันทำลาย RNA โดยเฉพาะใน RNA-DNA ไฮบริด แต่ไม่ใช่ DNA และ RNA ที่ไม่ผสมพันธุ์ และเอ็นไซม์นี้มักจะใช้เพื่อทำลายเทมเพลต RNA หลังจากที่สาย DNA เสริมแรกถูกสร้างขึ้นในระหว่างการสังเคราะห์ cDNA
รูปที่ 02: RNase H
RNase H ยังใช้ในการทดสอบการป้องกันนิวคลีเอสด้วย นอกจากนี้ยังสามารถรวมเข้ากับการกำจัดหางโพลีเอออกจาก mRNA ได้อีกด้วย RNase H มีความสามารถในการทำลาย RNA ที่ไม่มีการเข้ารหัสทั้งภายในและภายนอกเซลล์จำเป็นต้องมีไอออนของโลหะเป็นปัจจัยร่วมสำหรับกิจกรรมโปรตีนนี้ คีเลเตอร์ (EDTA) สามารถใช้ยับยั้งเอนไซม์ RNase H ได้
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง RNASE A และ RNASE H คืออะไร
- โปรตีนทั้งคู่ในธรรมชาติ
- เอนโดริโบนิวคลีเอสทั้งคู่
- ทั้งสองสามารถย่อยสลาย RNA ได้
- ทำปฏิกิริยาไฮโดรไลติกทั้งคู่
- ห้องปฏิบัติการโมเลกุลใช้ทั้งสองสิ่งนี้
ความแตกต่างระหว่าง RNASE A และ RNASE H คืออะไร
RNASE A กับ RNASE H |
|
| RNase A คือไรโบนิวคลีเอสในตับอ่อนที่แยกส่วนปลาย 3 ของไซโตซีนและยูราซิลที่ตกค้างของอาร์เอ็นเอสายเดี่ยวที่ความเข้มข้นของเกลือสูงขึ้นอย่างเฉพาะเจาะจง | RNase H เป็นเอนไซม์ไรโบนิวคลีเอสที่ไม่เฉพาะเจาะจงซึ่งสามารถย่อยสลาย RNA ใน RNA-DNA ไฮบริดผ่านปฏิกิริยาไฮโดรไลติก |
| ธรรมชาติของการแยกอาร์เอ็นเอ | |
| RNase A แยกเฉพาะ RNA สายเดี่ยวที่ความเข้มข้นของเกลือที่สูงขึ้น | RNase H แยก RNA ใน RNA- DNA hybrid |
| ความต้องการของปัจจัยร่วมสำหรับกิจกรรม | |
| RNase A ไม่ต้องการปัจจัยร่วมสำหรับกิจกรรม | RNase H ต้องการไอออนของโลหะเป็นปัจจัยร่วมในการทำงานของมัน |
| ตัวยับยั้งกิจกรรมโปรตีน | |
| โปรตีนตัวยับยั้งไรโบนิวคลีเอส โลหะหนัก และสารเชิงซ้อนของยูริดีนวานาเดตยับยั้งการทำงานของ RNAse A | คีเลเตอร์ (EDTA) ยับยั้งการทำงานของ RNase H |
| RNA Primer Removal ในการจำลอง DNA | |
| RNAse A ไม่ได้ใช้สำหรับการลบไพรเมอร์ RNA ในการจำลองดีเอ็นเอ | RNase H ใช้สำหรับการกำจัดไพรเมอร์ RNA ในการจำลองดีเอ็นเอ |
| การลบแม่แบบ DNA ในการสังเคราะห์ DNA เสริม (C-DNA) | |
| RNAse A ไม่ได้ใช้สำหรับการนำเทมเพลต RNA ออกในระหว่างการสังเคราะห์ DNA เสริม (C-DNA) | RNAse H ใช้สำหรับการนำเทมเพลต RNA ออกในระหว่างการสังเคราะห์ DNA เสริม (C-DNA) |
| ลบ Poly-A-Tail ใน mRNA Hybridized ไปยัง Oligo (dt) | |
| RNase A ไม่ได้ใช้เพื่อลบ “poly-A tail” ใน mRNA ที่ผสมเข้ากับ oligo (dt) | RNase H ใช้เพื่อลบ “poly-A tail” ใน mRNA ที่ผสมเข้ากับ oligo (dt) |
สรุป – RNASE A กับ RNASE H
ไรโบนิวคลีเอสคือเอ็นไซม์นิวคลีเอสที่มีความสามารถในการแยกอาร์เอ็นเอออกเป็นหน่วยที่เล็กกว่า พวกเขาเป็นสองประเภท endoribonucleases และ exoribonucleases เอนโดริโบนิวคลีเอสเป็นเอนโดนิวคลีเอสซึ่งมีความสามารถในการย่อยสลาย RNA แบบสายเดี่ยวหรือแบบสองสาย และแยกพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ภายในสายโซ่พอลินิวคลีโอไทด์ของอาร์เอ็นเอ RNase A และ RNase H เป็นเอนโดริโบนิวคลีเอสสองชนิด RNase A เป็นไรโบนิวคลีเอสในตับอ่อนที่แยกไซโตซีนและยูราซิลที่ไม่มีการจับคู่อย่างเฉพาะเจาะจงที่ปลาย 3 'ของ RNA สายเดี่ยวที่ความเข้มข้นของเกลือที่สูงขึ้น RNase H เป็นเอนไซม์ไรโบนิวคลีเอสที่ไม่เฉพาะเจาะจงซึ่งสามารถย่อยสลาย RNA ใน RNA-DNA ไฮบริดผ่านปฏิกิริยาไฮโดรไลติก นี่คือข้อแตกต่างระหว่าง RNase A และ RNase H.
ดาวน์โหลดไฟล์ PDF RNASE A กับ RNASE H
คุณสามารถดาวน์โหลดไฟล์ PDF ของบทความนี้และใช้เพื่อวัตถุประสงค์ออฟไลน์ตามบันทึกการอ้างอิง โปรดดาวน์โหลดไฟล์ PDF ที่นี่ความแตกต่างระหว่าง RNASE A และ RNASE H
