ความแตกต่างที่สำคัญ – เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส vs เพจ SDS
เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นเทคนิคที่แยกโมเลกุลขนาดใหญ่ในสนามไฟฟ้า เป็นวิธีการทั่วไปในชีววิทยาระดับโมเลกุลในการแยก DNA, RNA และโปรตีนออกจากของผสมตามขนาดโมเลกุล SDS Page เป็นเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสชนิดหนึ่งซึ่งใช้ในการแยกโปรตีนออกจากส่วนผสมของโปรตีนตามขนาด เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นคำที่ใช้เพื่ออ้างถึงเทคนิคปกติที่ใช้สำหรับการแยก DNA, RNA และโปรตีน ในขณะที่ SDS Page เป็นเจลอิเล็กโทรโฟรีซิสประเภทหนึ่ง นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสและหน้า SDS
เจลอิเล็กโทรโฟรีซิสคืออะไร
เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นเทคนิคทั่วไปที่ใช้ในห้องปฏิบัติการเพื่อแยกโมเลกุลที่มีประจุ เช่น DNA, RNA, โปรตีน ฯลฯ ออกจากของผสม เจลใช้ในเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ทำหน้าที่เป็นตะแกรงโมเลกุล เจลมีสองประเภทที่ใช้ในเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ได้แก่ agarose และ polyacrylamide การเลือกการเตรียมเจลและเจลเป็นปัจจัยสำคัญที่ต้องพิจารณาในเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส เนื่องจากควรมีการจัดการขนาดรูพรุนของเจลอย่างระมัดระวังเพื่อการแยกโมเลกุลที่ดีผ่านเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสมีสนามไฟฟ้าเชื่อมต่อกับปลายทั้งสองของเจล ปลายด้านหนึ่งของเจลแสดงประจุบวกในขณะที่ปลายอีกด้านหนึ่งมีประจุลบ
DNA และ RNA เป็นโมเลกุลที่มีประจุลบ เมื่อใส่เจลจากด้านลบของเจลและนำไปใช้กับสนามไฟฟ้า พวกมันจะเคลื่อนผ่านรูพรุนของเจลไปยังปลายที่มีประจุบวกของเจลความเร็วของการย้ายถิ่นขึ้นอยู่กับประจุและขนาดของโมเลกุล โมเลกุลที่เล็กกว่าจะเคลื่อนตัวผ่านรูขุมขนของเจลได้ง่ายกว่าโมเลกุลที่ใหญ่กว่า ดังนั้นโมเลกุลที่เล็กกว่าจะเดินทางเป็นระยะทางไกลผ่านเจลและโมเลกุลที่ใหญ่กว่าเดินทางเป็นระยะทางสั้น ๆ ในการสังเกตการเคลื่อนที่ของโมเลกุลบนเจล จะใช้สีย้อมชนิดพิเศษ สนามไฟฟ้าถูกนำไปใช้ในช่วงระยะเวลาหนึ่งและหยุดเพื่อป้องกันการสูญเสียโมเลกุลและเพื่อให้โมเลกุลอยู่ในตำแหน่งที่เคลื่อนที่ สามารถสังเกตแถบต่างๆ ได้ในเจล แถบเหล่านี้เป็นตัวแทนของโมเลกุลที่มีขนาดต่างกัน ดังนั้นเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสจึงมีประโยชน์ในการแยกแยะโมเลกุลตามขนาด
เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสถูกรวมไว้ในเทคนิคต่างๆ เพื่อเป็นเทคนิคการเตรียมการทางอณูชีววิทยา เช่น PCR, RFLP, การโคลน, การหาลำดับดีเอ็นเอ, การซับใต้, การทำแผนที่จีโนม เป็นต้น
รูปที่ 01: Agarose gel electrophoresis
หน้า SDS คืออะไร
Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) คือเจลอิเล็กโทรโฟรีซิสชนิดหนึ่งที่ใช้แยกโปรตีน เมื่อใช้เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อแยกโปรตีน จำเป็นต้องมีการรักษาพิเศษเนื่องจากโปรตีนไม่มีประจุลบ เช่น DNA และ RNA และไม่ย้ายไปยังขั้วบวกหรือขั้วลบ ดังนั้น โปรตีนจะถูกแปลงสภาพและเคลือบด้วยประจุลบก่อนเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ใช้ผงซักฟอกที่เรียกว่าโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสซึ่งใช้ SDS และเจลโพลีอะคริลาไมด์สำหรับสื่อที่รองรับเรียกว่า SDS Page เทคนิคนี้มักใช้ในชีวเคมี พันธุศาสตร์ นิติเวช และอณูชีววิทยา
ในหน้า SDS โปรตีนจะถูกผสมกับ SDS SDS แผ่โปรตีนออกเป็นรูปร่างเชิงเส้นและเคลือบพวกมันด้วยประจุลบตามสัดส่วนกับมวลโมเลกุลของพวกมันเนื่องจากประจุลบ โมเลกุลของโปรตีนจะเคลื่อนไปยังปลายประจุบวกของเจลและแยกออกตามมวลโมเลกุลของพวกมัน ใน SDS Page โพลีอะคริลาไมด์จะใช้เป็นตัวรองรับเจล การแยกโปรตีนที่แท้จริงขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของเจลเป็นหลัก ดังนั้นควรเตรียมเจลโพลีอะคริลาไมด์อย่างระมัดระวังและควรใช้ความเข้มข้นของโพลีอะคริลาไมด์ที่ถูกต้อง เจลโพลีอะคริลาไมด์มีความละเอียดสูงกว่าเจลอะกาโรส ดังนั้น SDS Page จึงถือเป็นเทคนิคการแยกโปรตีนที่มีความละเอียดสูง
SDS Page เป็นประเภทของเจลอิเล็กโทรโฟรีซิสที่ทำให้เสียสภาพ มีข้อจำกัดที่สำคัญในการวิเคราะห์โปรตีน เนื่องจาก SDS ทำลายโปรตีนก่อนการแยกตัว จึงไม่อนุญาตการตรวจจับกิจกรรมของเอนไซม์ ปฏิกิริยาการจับกับโปรตีน ปัจจัยร่วมของโปรตีน ฯลฯ
รูปที่ 02: หน้า SDS
เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสและ SDS Page ต่างกันอย่างไร
เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส vs เพจ SDS |
|
| เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นวิธีการแยกโมเลกุลขนาดใหญ่โดยใช้สนามไฟฟ้า | SDS Page เป็นเทคนิคเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสความละเอียดสูงที่ใช้ในการแยกโปรตีนตามมวลของพวกมัน |
| เจลรัน | |
| สามารถดำเนินการในลักษณะแนวนอนหรือแนวตั้ง | SDS เพจทำงานในแนวตั้งเสมอ |
| พื้นฐานสำหรับการแยกจากกัน | |
| การแยกเกิดขึ้นตามค่าใช้จ่ายและขนาด | โปรตีนแยกตามมวลและประจุ |
| ความละเอียด | |
| อิเล็กโตรโฟรีซิสเจล Agarose มีความละเอียดต่ำและอิเล็กโทรโฟเรซิสเจลโพลีอะคริลาไมด์มีความละเอียดสูงกว่า | SDS หน้ามีความละเอียดดีกว่า |
| การเสื่อมสภาพ | |
| เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสมีทั้งเทคนิคการทำให้เสียสภาพและไม่ทำให้เกิดการเสียรูป | SDS หน้าทำลายโปรตีนก่อนแยกออก |
สรุป – เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส vs เพจ SDS
เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นเทคนิคทั่วไปที่ใช้สำหรับการแยกและวิเคราะห์ DNA, RNA และโปรตีนตามขนาดและประจุ เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสมีสองประเภทหลักคืออะกาโรสเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสและโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟรีซิส เจล Agarose ส่วนใหญ่ใช้สำหรับการแยกกรดนิวคลีอิก เมื่อต้องการความละเอียดสูงกว่า จะใช้เจลโพลีอะคริลาไมด์SDS Page เป็นเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสชนิดหนึ่งที่ใช้กันทั่วไปเพื่อแยกส่วนผสมที่ซับซ้อนของโปรตีน ถือเป็นเทคนิคการแยกโปรตีนที่มีความละเอียดสูง นี่คือความแตกต่างระหว่างเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสและ SDS Page
