ความแตกต่างระหว่าง Phusion และ Taq Polymerase

2024 ผู้เขียน: Alex Aldridge | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-17 13:51

ความแตกต่างที่สำคัญ – Phusion vs Taq Polymerase

DNA polymerase เป็นเอ็นไซม์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในเทคนิคอณูชีววิทยา และยังมีอยู่ตามธรรมชาติในสิ่งมีชีวิตทุกชนิดที่ผ่านการจำลองดีเอ็นเอ พวกมันคือเอ็นไซม์โพลีเมอไรเซชันหลักที่เกี่ยวข้องกับการจำลองแบบ DNA polymerase สามารถเพิ่มนิวคลีโอไทด์ไปยังปลายสาย DNA ที่ว่าง 3’ ได้ ด้วยเหตุนี้จึงทำให้เกิดการยืดออกของสายใหม่ ในปัจจุบัน เนื่องจากการพัฒนาของอณูชีววิทยาในการวินิจฉัยโรคและการประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรม การผลิตโพลีเมอเรสที่มีคุณสมบัติที่เป็นประโยชน์หลายประการจึงเป็นสิ่งสำคัญ วิธีนี้จะเพิ่มความแม่นยำของวิธีการและทำให้เป็นเทคนิคที่รวดเร็วยิ่งขึ้นPhusion และ Taq polymerase เป็นเอนไซม์โพลีเมอเรสที่ผลิตในเชิงพาณิชย์สองชนิดซึ่งใช้ในการใช้งานระดับโมเลกุลพิเศษ Phusion เป็น DNA polymerase ที่แยกได้จาก Pyrococcus furiosus และส่วนใหญ่ใช้ในการทดลองโคลนเพื่อเพิ่มความแม่นยำ Taq DNA Polymerase เป็น DNA polymerase มาตรฐานที่ใช้ในปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR) และแยกได้จากแบคทีเรียที่ทนความร้อน เทอร์มัส อควาติคัส. ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างเอนไซม์ทั้งสองคือจุลินทรีย์ต้นทาง Phusion ถูกแยกออกจาก extremophile, Pyrococcus furiosus ในขณะที่ Taq polymerase นั้นแยกได้จาก thermophile, Thermus aquaticus

Phusion คืออะไร

Phusion DNA polymerase เป็นโพลีเมอเรสชนิดใหม่ที่ผลิตขึ้นโดยการแยกเอ็นไซม์ออกจาก Pyrococcus furiosus ซึ่งเป็นอาร์เคียสุดโต่ง จุลินทรีย์เหล่านี้อาศัยอยู่ในสภาวะที่มีอุณหภูมิสูงมาก จึงทำให้พอลิเมอเรสเป็นพอลิเมอเรสที่ทนความร้อนสูง Phusion polymerase ถูกใช้เพื่อให้ได้ความเที่ยงตรงที่เหนือกว่าพอลิเมอเรสที่ทนต่อความร้อนแบบธรรมดา แทคโพลีเมอเรสPhusion polymerase สามารถขยายเทมเพลตยาวได้ถึง 7.5kb ของจีโนม DNA ความจุโพลีเมอไรเซชันที่เหมาะสมที่สุดของ Phusion polymerase อยู่ที่ 72^{0 C นอกจากนี้ Phusion ยังใช้ในการโคลนผลิตภัณฑ์สำหรับการจัดลำดับ การวิเคราะห์การแสดงออก และการวิเคราะห์การกลายพันธุ์}

Phusion DNA polymerase มีกิจกรรม exonuclease 3’ – 5’ ซึ่งช่วยให้สามารถตรวจทานเส้นที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่หลังจากการสังเคราะห์ได้ ดังนั้น นิวคลีโอไทด์ที่ไม่ตรงกันจึงสามารถซ่อมแซมได้ง่าย จึงมีอัตราความผิดพลาดน้อยกว่า ข้อดีโดยรวมของ Phusion polymerase คือ;

ความเที่ยงตรงสูง
ความเร็วสูงและลดเวลาขยาย
การตอบสนองที่แข็งแกร่งและต้องการการปรับให้เหมาะสมน้อยที่สุด
ผลตอบแทนสูง

ความแตกต่างระหว่าง Phusion และ Taq polymerase

รูปที่ 01: Phusion

ข้อเสียเปรียบหลักของ Phusion polymerase คือมันถูกยับยั้งเมื่อมี deoxyuridine triphosphate (dUTP) เมื่อสะสม dUTP ในส่วนผสมของปฏิกิริยา อาจยับยั้งการออกฤทธิ์ของ Phusion polymerase สิ่งนี้สามารถป้องกันได้โดยการบำบัดส่วนผสมของปฏิกิริยาด้วย dUTPase ก่อนเติมเอนไซม์ ปัจจุบันมีการใช้ Phusion polymerase รุ่นต่างๆ ที่ต้านทาน dUTP ที่รู้จักกันในชื่อ Pfu Turbo แทน Phusion polymerase เพื่อแก้ปัญหานี้

Taq Polymerase คืออะไร

Taq DNA polymerase ประดิษฐ์ได้ปฏิวัติด้านอณูชีววิทยา มันแก้ปัญหาสำคัญในการขยายดีเอ็นเอ Taq DNA polymerase เป็นเอนไซม์พอลิเมอเรสที่มีความเสถียรทางความร้อนซึ่งสกัดและแยกได้จากแบคทีเรียเทอร์โมฟิลลิก Thermus aquaticus การค้นพบเอนไซม์นี้นำไปสู่การพัฒนา PCR เอนไซม์นี้อนุญาตให้ใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสในการขยายดีเอ็นเอแทนเทคนิคการโคลนนิ่งแบบเดิมๆปัจจุบัน PCR ถูกใช้ในการวินิจฉัยระดับโมเลกุล การเกษตร และอุตสาหกรรม โดยมีรูปแบบใหม่ๆ ที่เพิ่มเข้ามาในเทคนิคนี้มากมาย

ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Phusion และ Taq polymerase

รูปที่ 02: Taq Polymerase

Taq DNA polymerase ทำงานในช่วงอุณหภูมิที่เหมาะสมระหว่าง 72⁰C – 80^{0C Taq DNA polymerase ต้องการปัจจัยร่วม แมกนีเซียมสำหรับหน้าที่ของมัน Taq polymerase ไม่มีความสามารถในการพิสูจน์อักษร 3'-5' ดังนั้นอัตราความผิดพลาดของ Taq DNA polymerase นั้นสูงเมื่อเปรียบเทียบกับ DNA polymerase ที่ใหม่กว่า เช่น Phusion polymerase เป็นต้น แต่ความนิยมของ Taq DNA polymerase ยังคงเป็น เหมือนกันทั่วโลกของวิทยาศาสตร์เนื่องจากความสะดวกและความยืดหยุ่นของเอนไซม์}

ความคล้ายคลึงกันระหว่าง Phusion และ Taq polymerase คืออะไร

ทั้งเอนไซม์ Phusion และ Taq โพลีเมอเรสเป็นเอนไซม์พอลิเมอไรเซชันที่สามารถเพิ่มนิวคลีโอไทด์ไปยังปลายสาย DNA ที่เป็นอิสระ 3'
ทั้ง Phusion และ Taq โพลีเมอเรสต้องการลำดับไพรเมอร์เพื่อเริ่มต้นกระบวนการโพลิเมอไรเซชัน
ทั้ง Phusion และ Taq โพลีเมอเรสมีความเสถียรทางความร้อน
ทั้ง Phusion และ Taq โพลีเมอเรสถูกใช้ในกลไก PCR เพื่อขยาย DNA
เมื่อเติมโพลีเมอเรสลงในส่วนผสมของปฏิกิริยา ทั้งโพลีเมอเรส Phusion และ Taq จะถูกเติมเป็นลำดับสุดท้ายเพื่อให้มั่นใจในประสิทธิภาพของเอนไซม์
ทั้ง Phusion และ Taq โพลีเมอเรสถูกสังเคราะห์ในเชิงพาณิชย์เพื่อวัตถุประสงค์ในการทดลองทางอณูชีววิทยา
ทั้ง Phusion และ Taq โพลีเมอเรสจำเป็นต้องมีโคแฟคเตอร์เพื่อทำหน้าที่ให้สมบูรณ์

Phusion กับ Taq Polymerase ต่างกันอย่างไร

Phusion กับ Taq Polymerase
Phusion เป็น DNA polymerase ที่แยกได้จาก Pyrococcus furiosus และส่วนใหญ่ใช้ในการทดลองโคลนเพื่อเพิ่มความเที่ยงตรง	Taq DNA Polymerase เป็น DNA polymerase มาตรฐานที่ใช้ในปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR) และแยกได้จากแบคทีเรีย Thermus aquaticus
สิ่งมีชีวิตที่มา
Phusion สกัดจาก extremophilic archaea – Pyrococcus furiosus	วรรณกรรมเหล่านี้มีช่วงตั้งแต่ยุคล่าอาณานิคมจนถึงยุคการแยกอาณานิคม
ความสามารถในการพิสูจน์อักษร
3’ – 5’ มีความสามารถในการอ่านหลักฐานใน Phusion	3’ – 5’ ไม่มีความสามารถในการอ่านหลักฐานใน Taq polymerase
ความจงรักภักดี
ความเที่ยงตรงสูงกับ Phusion	Taq polymerase แสดงความเที่ยงตรงต่ำ
เครื่องขยายสัญญาณ
Phusion สามารถขยายชิ้นส่วน DNA ที่มีความยาวได้	Taq polymerase สามารถขยายชิ้นส่วน DNA ที่สั้นกว่าได้มาก
dUTP พิษ
Phusion action ถูกยับยั้งโดยการสะสมคี่	Taq polymerase ไม่ถูกยับยั้งโดย dUPT

สรุป – Phusion vs Taq polymerase

Phusion และ Taq DNA polymerase เป็นพอลิเมอเรสที่มีความเสถียรทางความร้อนสองตัวที่ใช้ในเทคนิค PCR Phusion เป็นโพลีเมอเรสที่แยกได้จาก extremophile, Pyrococcus furiosus ในขณะที่ Taq นั้นแยกได้จากแบคทีเรีย Thermus aquaticusการค้นพบ Taq DNA polymerase นำไปสู่การประดิษฐ์ PCR Phusion มีข้อได้เปรียบมากมายเหนือ Taq ซึ่งทำให้ Phusion เป็นตัวเลือกที่ดีกว่าในการผลิต DNA ที่มีความเที่ยงตรงสูง อย่างไรก็ตาม Taq polymerase ยังคงใช้เป็นเอนไซม์พอลิเมอเรสมาตรฐานใน PCR นี่คือข้อแตกต่างระหว่าง Phusion และ Taq polymerase