ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Klenow และ T4 DNA polymerase คือ Klenow fragment เป็น E. coli DNA polymerase 1 ที่มีขนาดใหญ่ ในขณะที่ T4 DNA polymerase คือ DNA polymerase 1 ของ bacteriophage T4
DNA polymerase คือเอ็นไซม์ที่กระตุ้นการสร้าง DNA โดยการเพิ่มดีออกซีไรโบนิวคลีโอไทด์ที่ปลาย 3′-OH ของไพรเมอร์ที่มีอยู่แล้ว DNA polymerase มีหลายประเภท DNA polymerase ส่วนใหญ่ที่ใช้ในอณูชีววิทยาคือ prokaryotic DNA polymerase ชิ้นส่วน Klenow และ T4 DNA polymerase เป็น DNA polymerase สองประเภทที่มีต้นกำเนิดของโปรคาริโอต ชิ้นส่วน Klenow เป็นชิ้นส่วนขนาดใหญ่ที่เกิดจากความแตกแยกของ E.coli DNA polymerase 1 ออกเป็นสองส่วนโดยแบคทีเรีย protease subtilisin T4 DNA polymerase เป็น DNA polymerase 1 ของแบคทีเรีย T4 ทั้ง Klenow และ T4 DNA polymerase มีกิจกรรม exonuclease 5′→3′ และ 3′→5′ พวกเขาทั้งคู่ขาดกิจกรรม exonuclease 5′→3′ ทำให้เหมาะสำหรับการใช้งานมากมายในอณูชีววิทยา
Klenow คืออะไร
ชิ้นส่วนของ Klenow เป็น DNA polymerase ที่มีประโยชน์ในด้านอณูชีววิทยา เมื่อ E. coli DNA polymerase 1 ผ่านการย่อยโปรตีนด้วยโปรตีเอสของแบคทีเรีย Subtilisin จะส่งผลให้เกิดชิ้นส่วนสองชิ้น: ชิ้นหนึ่งเป็นส่วนขนาดใหญ่และอีกชิ้นเป็นชิ้นเล็ก ๆ เศษ Klenow เป็นชิ้นส่วนขนาดใหญ่ซึ่งมีขนาด 68 kDa แฟรกเมนต์ Klenow มี 5′→3′ polymerase และ 3′→5′ exonuclease (การพิสูจน์อักษร) กิจกรรมของ DNA Pol I กิจกรรม exonuclease 3′→5′ ของส่วน Klenow ช่วยอำนวยความสะดวกในการกำจัดเบสที่เติมอย่างไม่ถูกต้องในขณะที่กระบวนการโพลิเมอไรเซชันดำเนินไป ชิ้นส่วนของ Klenow ไม่มีกิจกรรม exonuclease 5′→3′ ซึ่งแสดงโดย E แบบเต็มความยาวหรือไม่เสียหายcoli DNA polymerase 1 เป็นข้อได้เปรียบเมื่อจำเป็นต้องใช้กิจกรรมโพลีเมอไรเซชันเพียงอย่างเดียว ชิ้นส่วน Klenow ใช้เพื่อเติมส่วนที่ยื่นออกมา 5 ฟุต การสังเคราะห์โพรบ การหาลำดับดีเอ็นเอ การสังเคราะห์ DNA แบบสองสาย การสังเคราะห์สายที่สองของ cDNA และการกลายพันธุ์ที่มุ่งเป้าไปที่ไซต์
รูปที่ 01: Klenow Fragment
ในบางแอปพลิเคชัน กิจกรรม exonuclease 3′→5′ ของชิ้นส่วน Klenow ก็ไม่ต้องการเช่นกัน สามารถลบออกได้โดยการทำให้เกิดการกลายพันธุ์ของยีนที่กำหนดรหัสสำหรับชิ้นส่วน Klenow แฟรกเมนต์ Klenow ที่เป็นผลลัพธ์เรียกว่า แฟรกเมนต์ exo-Klenow ดังนั้น เศษ exo-Klenow จึงมีเพียง 5′→3′ กิจกรรมโพลีเมอเรสของ E. coli polymerase 1.
T4 DNA Polymerase คืออะไร
T4 DNA polymerase เป็น DNA polymerase ที่กระตุ้นการสังเคราะห์ DNAเป็นโปรตีนที่เข้ารหัสโดย Bacteriophage T4 โครงสร้าง T4 DNA polymerase เป็นโปรตีนตกค้างของกรดอะมิโน 898 (น้ำหนักโมเลกุล 103.6 kDa) ต้องใช้เทมเพลตและไพรเมอร์เพื่อเร่งการสังเคราะห์
รูปที่ 02: T4 DNA Polymerase
คล้ายกับชิ้นส่วน Klenow T4 DNA polymerase มีทั้ง 5′→3′ polymerase และ 3′→5′ exonuclease กิจกรรม นอกจากนี้ยังขาดกิจกรรม exonuclease 5′→3′ เช่นกัน T4 DNA polymerase มีประโยชน์ในการเติมส่วนปลายที่ยื่นออกมาของชิ้นส่วนดีเอ็นเอ 5′ นอกจากนี้ยังมักใช้ในการติดฉลาก DNA ที่มีเกลียวคู่ 5′-end หรือ 3′-end T4 DNA polymerase มักใช้ในการโคลนทื่อ กิจกรรม exonuclease (การพิสูจน์อักษร) 3′→5′ ของ T4 DNA polymerase นั้นแข็งแกร่งกว่า (มากกว่า 200 เท่า) มากกว่าส่วน Klenow สิ่งสำคัญที่สุดคือ T4 DNA polymerase มีกระบวนการสูง (400 นิวคลีโอไทด์ต่อวินาที)
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง Klenow และ T4 DNA Polymerase คืออะไร
- Klenow และ T4 DNA polymerase เป็นโพรคาริโอตโพลีเมอเรสสองตัว
- โพลีเมอเรสทั้งสองมี 5′→3′ โพลีเมอเรสและ 3′→5′ กิจกรรม exonuclease
- พวกมันไม่แสดงกิจกรรม exonuclease 5′→3′
- เอนไซม์ทั้งสองต้องการเทมเพลตและไพรเมอร์เพื่อเร่งการสังเคราะห์ DNA
- เอ็นไซม์เหล่านี้สามารถหยุดการทำงานของความร้อนได้ที่ 75 0
ความแตกต่างระหว่าง Klenow และ T4 DNA Polymerase คืออะไร
ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Klenow และ T4 DNA polymerase คือที่มาของเอนไซม์แต่ละชนิด ชิ้นส่วน Klenow นั้นมาจากแบคทีเรียในขณะที่ T4 DNA polymerase นั้นมาจากแบคทีเรียซึ่งเป็นไวรัส T4 DNA polymerase มีกระบวนการที่สูงกว่า Klenow Fragment นอกจากนี้ T4 DNA polymerase ยังมีกิจกรรมการพิสูจน์อักษรที่แข็งแกร่งกว่าชิ้นส่วน Klenowดังนั้น นี่คือความแตกต่างอีกประการระหว่าง Klenow และ T4 DNA polymerase
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงความแตกต่างเพิ่มเติมระหว่าง Klenow และ T4 DNA polymerase ในรูปแบบตาราง
สรุป – Klenow vs T4 DNA Polymerase
Klenow Fragment เป็นกลุ่มใหญ่ของ E. coli DNA polymerase 1 มีกิจกรรม exonuclease 5′→3′ เท่านั้น และ 3′→5′ exonuclease มันขาดกิจกรรม exonuclease 5′→3′ ของ E. coli DNA pol 1 ที่ไม่บุบสลาย ดังนั้น Klenow fragment เป็นแบคทีเรียโพลิเมอร์ ในทางกลับกัน T4 DNA polymerase เป็นโพลีเมอเรสที่เข้ารหัสโดย bacteriophage T4 คล้ายกับชิ้นส่วน Klenow ประกอบด้วยกิจกรรม exonuclease 5′→3′ และ 3′→5′ exonuclease และขาดกิจกรรม exonuclease 5′→3′ อย่างไรก็ตาม T4 DNA polymerase มีกระบวนการสูงและมีกิจกรรมการพิสูจน์อักษรสูงกว่าชิ้นส่วน Klenowนี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Klenow และ T4 DNA polymerase
