ความแตกต่างที่สำคัญ – ไปข้างหน้า vs ย้อนกลับ Primer
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) เป็นวิธีการขยายดีเอ็นเอที่ใช้ในการประยุกต์ใช้ทางอณูชีววิทยา เป็นเทคนิคที่ใช้กันทั่วไปซึ่งสร้างสำเนาลำดับดีเอ็นเอที่สนใจเป็นพิเศษจำนวนหลายล้านถึงหลายพันล้านชุด เป็นวิธีการในหลอดทดลองที่ทำในห้องปฏิบัติการ เทคนิค PCR ขึ้นอยู่กับ DNA polymerase ที่ผลิตในเชิงพาณิชย์ที่เรียกว่า Taq polymerase และยังต้องการส่วนประกอบอื่นๆ อีกหลายอย่างและการบำรุงรักษาอุณหภูมิที่เหมาะสม องค์ประกอบที่สำคัญอย่างหนึ่งคือไพรเมอร์ ไพรเมอร์คือลำดับดีเอ็นเอสั้นๆ ที่ออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับลำดับดีเอ็นเอเป้าหมายโดยปกติแล้วจะมีความยาวประมาณ 20 นิวคลีโอไทด์ Taq polymerase กระตุ้นการเพิ่มนิวคลีโอไทด์ในลำดับนิวคลีโอไทด์ที่มีอยู่ก่อน ดังนั้นไพรเมอร์จึงเป็นจุดเริ่มต้นของการสังเคราะห์เส้นใยใหม่ Taq polymerase ทำงานในทิศทาง 5 ถึง 3 เท่านั้น ดังนั้นการสังเคราะห์ DNA จึงเกิดขึ้นในทิศทางเดียวกัน 5 ถึง 3 เนื่องจาก DNA มีเกลียวคู่ จึงจำเป็นต้องใช้ไพรเมอร์สองประเภทใน PCR พวกเขาเรียกว่าไพรเมอร์ไปข้างหน้าและไพรเมอร์ย้อนกลับ ไพรเมอร์ไปข้างหน้าและข้างหลังเรียกว่าไพรเมอร์ตามทิศทางของการยืดตัวของไพรเมอร์ในดีเอ็นเอเมื่อเกิดการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ Forward primer หลอมรวมกับสาย DNA antisense และเริ่มการสังเคราะห์ +ve strand ของยีนในทิศทาง 5’ ถึง 3’ รีเวิร์สไพรเมอร์หลอมด้วยเส้นใยความรู้สึกและเริ่มการสังเคราะห์สายเสริมของสายการเข้ารหัส ซึ่งก็คือ –ve สาระของยีนไปในทิศทาง 5'to 3' นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างไพรเมอร์เดินหน้าและถอยหลัง
ฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์คืออะไร
การปฐมนิเทศเป็นการสังเคราะห์สายรหัสหรือสายสัมผัสของยีน Taq polymerase เร่งการสังเคราะห์เส้นใยใหม่ในทิศทาง 5' ถึง 3' การสังเคราะห์สายการเข้ารหัสเกิดขึ้นเมื่อไพรเมอร์หลอมตัวด้วยเอ็นที่ไม่เข้ารหัสหรือแอนตีเซนส์และยืดออกในทิศทาง 5’ ถึง 3’
รูปที่ 01: ไพรเมอร์เดินหน้าและถอยหลัง
ไพรเมอร์ที่หลอมด้วยสายแอนตี้เซนส์หรือสายแบบไม่มีรหัสหรือสายแม่แบบเรียกว่าไพรเมอร์แบบไปข้างหน้า เนื่องจากไพรเมอร์แบบไปข้างหน้าทำหน้าที่เป็นจุดเริ่มต้นในการสังเคราะห์การเข้ารหัสหรือสายบวกของยีน ไพรเมอร์ไปข้างหน้ามีลำดับนิวคลีโอไทด์สั้น ๆ ที่ประกอบกับปลายขนาบข้าง 3 ของสายแอนติเซนส์ มันผสมพันธุ์กับสาย antisense และอำนวยความสะดวก Taq polymerase เพื่อเพิ่มนิวคลีโอไทด์ที่ประกอบกับสายแม่แบบ
รีเวิร์สไพรเมอร์คืออะไร
รีเวิร์สไพรเมอร์คือลำดับ DNA สั้น ๆ ที่หลอมด้วยปลายประสาทสัมผัส 3’ หรือสายเข้ารหัส ไพรเมอร์ย้อนกลับทำหน้าที่เป็นจุดเริ่มต้นในการสังเคราะห์สายเสริมของลำดับการเข้ารหัสหรือลำดับที่ไม่เข้ารหัส รีเวิร์สไพรเมอร์ได้รับการออกแบบมาเสริมให้กับปลายสายการเข้ารหัส 3 ฟุต ดังนั้นจึงหลอมด้วยปลายสายการเข้ารหัส 3 ' และช่วยให้ Taq polymerase สังเคราะห์สาย antisense หรือเส้นแม่แบบ เนื่องจากการวางแนวในลักษณะกลับด้าน ไพรเมอร์นี้จึงถูกระบุว่าเป็นรีเวิร์สไพรเมอร์
ไพรเมอร์ทั้งย้อนกลับและไปข้างหน้ามีความสำคัญสำหรับการผลิตสำเนาหลายล้านถึงพันล้านสำเนาของภูมิภาคเฉพาะของ DNA ที่เป็นเป้าหมายหรือสนใจ
ความคล้ายคลึงกันระหว่างไพรเมอร์เดินหน้าและถอยหลังคืออะไร
- ไพรเมอร์ทั้งแบบเดินหน้าและถอยหลังทำมาจากโอลิโกนิวคลีโอไทด์
- ไพรเมอร์ทั้งแบบเดินหน้าและถอยหลังมีลำดับนิวคลีโอไทด์สั้นประกอบกับปลายขนาบข้างของสายดีเอ็นเอคู่
- ไพรเมอร์ทั้งแบบเดินหน้าและถอยหลังมักประกอบด้วย 20 นิวคลีโอไทด์
- ทั้งไพรเมอร์เดินหน้าและถอยหลังใช้ในปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส
- ทั้ง Forward และ Reverse Primers ถูกสังเคราะห์ในเชิงพาณิชย์
- ไพรเมอร์ทั้งแบบเดินหน้าและถอยหลังมีอุณหภูมิคงที่และโดยปกติจะมีอาการ Tm.
- ทั้งไพรเมอร์เดินหน้าและถอยหลังถูกหลอมด้วยลำดับดีเอ็นเอเป้าหมาย
- ไพรเมอร์ทั้งเดินหน้าและถอยหลังได้รับการออกแบบตามปฏิกิริยา PCR
- ทั้งไพรเมอร์ไปข้างหน้าและถอยหลังเป็นจุดเริ่มต้นสำหรับการขยายดีเอ็นเอ
- ไพรเมอร์ทั้งแบบย้อนกลับและไปข้างหน้ามีความสำคัญสำหรับการผลิตสำเนาล้านชุดของภูมิภาคเฉพาะของลำดับดีเอ็นเอเป้าหมายหรือที่สนใจ
ไพรเมอร์เดินหน้าและถอยหลังต่างกันอย่างไร
ไพรเมอร์ไปข้างหน้า vs รีเวิร์สไพรเมอร์ |
|
| Forward primer เป็นลำดับ DNA สั้น ๆ ที่ผสมเข้ากับปลาย 3' ของ noncoding หรือสายเทมเพลตของยีนและทำหน้าที่เป็นจุดเริ่มต้นในการสังเคราะห์ลำดับการเข้ารหัส | Reverse primer เป็นลำดับ DNA สั้น ๆ ที่ผสมเข้ากับปลาย 3' ของการเข้ารหัสหรือสายที่ไม่ใช่แม่แบบ และทำหน้าที่เป็นจุดเริ่มต้นในการสังเคราะห์ลำดับที่ไม่เข้ารหัส |
| เส้นการหลอม | |
| การหลอมไพรเมอร์ไปข้างหน้าด้วยเส้นแม่แบบ | รีเวิร์สไพรเมอร์หลอมด้วยเกลียวที่ไม่ใช่เทมเพลท |
| ผลลัพธ์ลำดับใหม่ | |
| ไพรเมอร์ไปข้างหน้าอำนวยความสะดวกในการสังเคราะห์ลำดับการเข้ารหัส | รีเวิร์สไพรเมอร์อำนวยความสะดวกในการสังเคราะห์ลำดับที่ไม่เข้ารหัส |
สรุป – ไปข้างหน้า vs ย้อนกลับ Primer
เทคนิค PCR ไพรเมอร์มีอยู่ 2 ประเภท เป็นไพรเมอร์ไปข้างหน้าและถอยหลัง บนพื้นฐานของการยืดตัวของไพรเมอร์ในการสังเคราะห์สายดีเอ็นเอใหม่ ไพรเมอร์เหล่านี้มีฉลากหรือตั้งชื่อไว้ Taq polymerase สังเคราะห์ DNA ใหม่ในทิศทาง 5 ถึง 3 ดังนั้นไพรเมอร์จึงได้รับการออกแบบให้เสริมกับปลายเกลียวคู่ 3 เส้น ไพรเมอร์ไปข้างหน้าซึ่งยืดออกในทิศทาง 5’ ถึง 3’ ผสมพันธุ์กับส่วนปลาย 3’ ของแอนติเซนส์หรือเทมเพลตหรือลำดับที่ไม่เข้ารหัส ทำหน้าที่เป็นจุดเริ่มต้นในการสังเคราะห์ลำดับการเข้ารหัส รีเวิร์สไพรเมอร์ซึ่งยืดออกในทิศทาง 5’ ถึง 3’ ผสมพันธุ์กับจุดสิ้นสุด 3’ ของรหัสหรือแบบไม่มีแม่แบบหรือสายสัมผัสทำหน้าที่เป็นจุดเริ่มต้นในการสังเคราะห์ลำดับ noncoding นี่คือข้อแตกต่างระหว่างไพรเมอร์เดินหน้าและถอยหลัง