ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง immunoprecipitation และ coimmunoprecipitation คือ immunoprecipitation เป็นเทคนิคที่ทำให้โปรตีนตกตะกอนออกจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ ในขณะที่ coimmunoprecipitation เป็นเทคนิคที่ตกตะกอนโปรตีนเชิงซ้อนที่ไม่บุบสลายออกจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ
อันตรกิริยาระหว่างแอนติเจนกับแอนติบอดีคือปฏิกิริยาเคมีเฉพาะระหว่างแอนติบอดีที่ผลิตโดยเซลล์บีและแอนติเจน (โปรตีน) ระหว่างปฏิกิริยาภูมิคุ้มกัน โดยปกติ แอนติเจนที่ละลายน้ำได้จะรวมกับแอนติบอดีที่ละลายได้ต่อหน้าอิเล็กโทรไลต์ที่อุณหภูมิที่ละลายน้ำได้และ pH เพื่อสร้างสารเชิงซ้อนที่มองเห็นได้ที่ไม่ละลายน้ำสิ่งนี้เรียกว่าปฏิกิริยาการตกตะกอน ดังนั้น immunoprecipitation และ coimmunoprecipitation เป็นปฏิกิริยาการตกตะกอนสองประเภทที่ใช้เป็นประจำในห้องปฏิบัติการเพื่อระบุโปรตีน เช่น แอนติเจน
ภูมิคุ้มกันบกพร่องคืออะไร
การตกตะกอนของภูมิคุ้มกันเป็นเทคนิคการตกตะกอนโปรตีนจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ บางครั้ง เทคนิคนี้เรียกอีกอย่างว่าการตกตะกอนของโปรตีนในแต่ละคน การตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกันใช้แอนติบอดีเพื่อแยกโปรตีนที่เลือกที่สนใจออกจากเซลล์ไลเซต แอนติบอดีทำให้โปรตีนเป้าหมายเฉพาะหรือแอนติเจนบริสุทธิ์จากของผสม แอนติบอดีจับกับโปรตีน และดึงสารเชิงซ้อนของแอนติบอดี-แอนติเจนออกจากตัวอย่าง ในการตั้งค่าการทดลอง คอมเพล็กซ์แอนติเจน-แอนติบอดีถูกดึงออกมาโดยใช้โปรตีน A/G ควบคู่ agarose หรือลูกปัดแม่เหล็ก ต่อมา ลูกปัดจะถูกชะล้าง และโปรตีนที่น่าสนใจก็ถูกชะออกไป โปรตีนหรือแอนติเจนที่บริสุทธิ์ที่ได้จากการตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกันนั้นได้รับการยืนยันโดยเทคนิคต่างๆ เช่น การทดสอบการดูดซับอิมมูโนที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) และ Western blot (WB)
รูปที่ 01: การกระตุ้นภูมิคุ้มกัน
นอกจากนี้ โปรตีนหรือแอนติเจนที่แยกออกมาสามารถหาปริมาณและระบุได้ผ่านแมสสเปกโตรเมทรีโดยใช้รูปแบบการย่อยด้วยเอนไซม์ตามลำดับปฐมภูมิ มีข้อควรพิจารณาบางประการก่อนเริ่มการทดลองการตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกัน: การเลือกรูปแบบวิธีการ โปรตีนที่จับกับเม็ดบีด การเลือกแอนติบอดีและไอโซไทป์ปฐมภูมิที่เหมาะสม และกลุ่มควบคุมเชิงลบ
Coimmunoprecipitation คืออะไร
Coimmunoprecipitation เป็นเทคนิคการตกตะกอนสารเชิงซ้อนของโปรตีนที่ไม่บุบสลายออกจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ Coimmunoprecipitation โดยทั่วไปทำงานโดยการเลือกแอนติบอดีจำเพาะที่มีเป้าหมายเป็นโปรตีนที่รู้จัก (แอนติเจน) ซึ่งเชื่อว่าเป็นสมาชิกของโปรตีนที่ซับซ้อนมากขึ้นด้วยการกำหนดเป้าหมายสมาชิกที่รู้จักด้วยแอนติบอดีจำเพาะ เป็นไปได้ที่จะดึงโปรตีนเชิงซ้อนทั้งหมดออกจากสารละลาย สิ่งนี้ทำให้สามารถระบุสมาชิกที่ไม่รู้จักของคอมเพล็กซ์ได้ แนวคิดในการดึงโปรตีนเชิงซ้อนออกจากสารละลายบางครั้งเรียกว่ากลไก "ดึงลง"
รูปที่ 02: B Coimmunoprecipitation
Coimmunoprecipitation เป็นเทคนิคที่มีประสิทธิภาพซึ่งใช้ในการวิเคราะห์ปฏิกิริยาระหว่างโปรตีนกับโปรตีน วัตถุประสงค์หลักของการตกตะกอนร่วมคือการระบุพันธมิตรที่มีปฏิสัมพันธ์ เช่น ลิแกนด์ โคแฟคเตอร์ หรือโมเลกุลส่งสัญญาณไปยังโปรตีนที่สนใจ นอกจากนี้ Coimmunoprecipitation เป็นเทคนิคที่มีประสิทธิภาพซึ่งใช้ในการแยกโปรตีนออกจากซีรัม เซลล์ไลเสต เนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกัน หรือสื่อที่ปรับสภาพ
ความคล้ายคลึงกันระหว่างการสร้างภูมิคุ้มกันและการตกตะกอนร่วมคืออะไร
- การตกตะกอนภูมิคุ้มกันและการตกตะกอนร่วมเป็นเทคนิคสองประเภทที่อิงตามปฏิกิริยาการตกตะกอน
- ทั้งสองเทคนิคสามารถใช้เพื่อระบุแอนติเจนเป้าหมายผ่านแอนติบอดีจำเพาะ
- ทั้งสองเทคนิคขึ้นอยู่กับปฏิสัมพันธ์ของแอนติเจนและแอนติบอดีอย่างมาก
- มักใช้ในห้องปฏิบัติการทางคลินิก
ความแตกต่างระหว่างการตกตะกอนและการตกตะกอนร่วมคืออะไร
การตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกันเป็นเทคนิคที่ตกตะกอนโปรตีนออกจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ ในขณะที่การตกตะกอนร่วมเป็นเทคนิคที่ตกตะกอนโปรตีนเชิงซ้อนที่ไม่เสียหายออกจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ ดังนั้น นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง immunoprecipitation และ coimmunoprecipitation นอกจากนี้ การตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกันมักใช้ในห้องปฏิบัติการ ในขณะที่การตกตะกอนร่วมไม่ได้มักใช้ในห้องปฏิบัติการ
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงความแตกต่างระหว่าง immunoprecipitation และ coimmunoprecipitation ในรูปแบบตารางสำหรับการเปรียบเทียบแบบเคียงข้างกัน
สรุป – การให้ภูมิคุ้มกันเทียบกับการตกตะกอนร่วม
การตกตะกอนของภูมิคุ้มกันและการตกตะกอนร่วมเป็นเทคนิคที่ใช้ปฏิกิริยาการตกตะกอนสองประเภทซึ่งขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดี เทคนิคการตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกันจะตกตะกอนโปรตีนออกจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ ในขณะที่เทคนิคการตกตะกอนร่วมจะตกตะกอนโปรตีนที่ไม่เสียหายออกจากสารละลายโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ ดังนั้น นี่จึงสรุปความแตกต่างระหว่างการตกตะกอนของภูมิคุ้มกันและการตกตะกอนร่วม