ความแตกต่างที่สำคัญ – HPLC กับ LCMS
เรามาดูความหมายของ HPLC และ LCMS ก่อน ก่อนวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่าง HPLC และ LCMS โครมาโตกราฟีเป็นเทคนิคการแยกในการวิเคราะห์ทางเคมี โดยที่องค์ประกอบตัวอย่างจะถูกแยกออกระหว่างการส่งผ่านตัวกลางโครมาโตกราฟี นอกจากนี้ยังเกี่ยวข้องกับการโต้ตอบกับตัวอย่าง เฟสคงที่ และเฟสเคลื่อนที่ HPLC ย่อมาจาก High Performance Liquid Chromatography และใช้เป็นวิธีโครมาโตกราฟีของเหลวในเคมีวิเคราะห์ การรวมกันของโครมาโตกราฟีเหลวและแมสสเปกโตรสโคปี (LCMS) ได้รับการพัฒนาสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของชีวโมเลกุลที่เลือก และเป็นขั้นตอนการทดสอบที่มีความไวสูง แม่นยำ และเฉพาะเจาะจงเมื่อเปรียบเทียบกับ HPLCนี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ LCMC บทความนี้จะแนะนำคุณเกี่ยวกับ HPLC และ LCMC ที่เกี่ยวกับการวิเคราะห์ทางเคมีและหารือเกี่ยวกับความแตกต่างระหว่าง HPLC และ LCMS
HPLC คืออะไร
โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) เป็นเทคนิคการแยกที่ได้รับความนิยมในเคมีวิเคราะห์ ส่วนใหญ่จะใช้เพื่อแยกส่วนประกอบ เพื่อระบุและหาปริมาณแต่ละส่วนประกอบในส่วนผสม ก่อนหน้านี้ วิธีนี้เรียกว่าโครมาโตกราฟีของเหลวแรงดันสูงเพราะขึ้นอยู่กับปั๊มในการไหลของตัวทำละลายของเหลวที่มีแรงดันซึ่งประกอบรวมด้วยของผสมตัวอย่างผ่านคอลัมน์ที่บรรจุด้วยวัสดุดูดซับที่เป็นของแข็ง แต่ละองค์ประกอบและทุกองค์ประกอบในส่วนผสมของตัวอย่างมีปฏิกิริยากับวัสดุดูดซับที่เป็นของแข็งต่างกัน ซึ่งส่งผลให้อัตราการไหลที่แตกต่างกันสำหรับองค์ประกอบที่แตกต่างกัน ซึ่งอาจนำไปสู่การแยกองค์ประกอบขณะที่ไหลออกจากคอลัมน์ HPLC
HPLC ถูกนำมาใช้สำหรับการใช้งานที่หลากหลาย เช่น การวิเคราะห์ระดับวิตามินดีในเลือด การใช้ยาอย่างผิดกฎหมายของนักกีฬา โดยการตรวจจับยาที่ตกค้างในปัสสาวะ การแยกส่วนประกอบของตัวอย่างทางชีววิทยาที่ซับซ้อนเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัยและการวิเคราะห์ และการผลิตยา
LCMS คืออะไร
Liquid chromatography–mass spectrometry (LCMS) เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่รวมความสามารถในการแยกทางกายภาพของโครมาโตกราฟีของเหลวเข้ากับความสามารถในการวิเคราะห์มวลของแมสสเปกโตรเมตรี (MS) โครมาโตกราฟีของเหลวเป็นเทคนิคการแยก และแมสสเปกโตรเมตรีใช้ในการวิเคราะห์อัตราส่วนมวลต่อประจุของอนุภาคที่มีประจุ การแยกทางกายภาพมักจะทำได้โดย HPLC และอีกทางหนึ่งคือ LCMS หรือที่เรียกว่า HPLC-MS LCMS เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่โดดเด่นซึ่งมีความแม่นยำ ความไว และความจำเพาะสูงมากเมื่อเทียบกับ HPLC ดังนั้นจึงมีประโยชน์ในการใช้งานหลายอย่าง เช่น วัตถุประสงค์ในการวิจัย การวิเคราะห์ยา การวิเคราะห์อาหาร ฯลฯ LCMS ส่วนใหญ่จะใช้เพื่อแยก ตรวจจับ ระบุ และหาปริมาณคุณสมบัติทางชีวเคมีของตัวอย่างเฉพาะเมื่อมีส่วนผสมทางเคมีที่ซับซ้อน
HPLC กับ LCMC ต่างกันอย่างไร
ตัวย่อและคำจำกัดความของ HPLC และ LCMC
HPLC: HPLC ย่อมาจาก Liquid Chromatography ที่มีประสิทธิภาพสูง เป็นเทคนิคการแยกที่ใช้เป็นหลักในการแยกส่วนประกอบ เพื่อระบุและหาปริมาณแต่ละองค์ประกอบในส่วนผสม
LCMS: LCMS ย่อมาจาก Liquid Chromatography และ Mass Spectrometry เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่รวมความสามารถในการแยกทางกายภาพของโครมาโตกราฟีของเหลวเข้ากับความสามารถในการวิเคราะห์มวลของแมสสเปกโตรเมตรี (MS)
ลักษณะของ HPLC และ LCMC
การจำแนก
HPLC: นี่เป็นวิธี Liquid Chromatography เท่านั้น
LCMS: นี่เป็นการผสมผสานระหว่างวิธี Liquid Chromatography และ Mass Spectrometry
ประสิทธิภาพ
HPLC: เมื่อเปรียบเทียบกับ LCMS การวิเคราะห์ HPLC นั้นมีประสิทธิภาพน้อยกว่าและช้ากว่า
LCMS: เมื่อเทียบกับ HPLC การวิเคราะห์ LCMS นั้นมีประสิทธิภาพและเร็วกว่า
ความไว
HPLC: เมื่อเทียบกับ LCMS การวิเคราะห์ HPLC มีความไวน้อยกว่า
LCMS: เมื่อเทียบกับ HPLC การวิเคราะห์ LCMS นั้นไวกว่า
เฉพาะ
HPLC: เปรียบเทียบกับ LCMS การวิเคราะห์ HPLC มีความเฉพาะเจาะจงน้อยกว่า
LCMS: เปรียบเทียบกับ HPLC การวิเคราะห์ LCMS มีความเฉพาะเจาะจงมากกว่า
ความแม่นยำ
HPLC: HPLC ให้ผลลัพธ์ที่แม่นยำน้อยกว่า LCMS ในการกำหนดสารเคมีบางชนิด
LCMS: LCMS ให้ผลลัพธ์ที่แม่นยำกว่า HPLC สำหรับการตรวจวัดสารเคมีบางชนิด
ส่วนประกอบ
HPLC: HPLC ถือได้ว่าเป็นส่วนประกอบของ LCMS
LCMS: ไม่สามารถพิจารณา LCMS เป็นส่วนประกอบของ HPLC ได้
แหล่งไอออน
HPLC: ไม่มีแหล่งกำเนิดไอออนในเครื่องมือ HPLC
LCMS: แหล่งกำเนิดไอออนมีอยู่ในเครื่องมือ LCMS
แอพพลิเคชั่น
HPLC: สามารถวิเคราะห์ไอออน โพลีเมอร์ โมเลกุลอินทรีย์ และชีวโมเลกุลได้โดยใช้ HPLC
LCMS: สามารถวิเคราะห์โมเลกุลอินทรีย์และชีวโมเลกุลได้ ซึ่งแตกต่างจาก HPLC นั้น LCMS สามารถใช้เพื่อตรวจสอบสารผสมที่ได้รับการแก้ไขที่ไม่สมบูรณ์
ปฏิบัติการ
HPLC: ไดอะแกรมของเครื่องมือ HPLC แสดงไว้ในรูปที่ 1 และมักจะประกอบด้วยเครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ ปั๊ม และเครื่องตรวจจับ เครื่องเก็บตัวอย่างจะแนะนำของผสมของตัวอย่างในเฟสเคลื่อนที่ (ของผสมที่มีแรงดันของตัวทำละลาย เช่น น้ำ อะซีโตไนไตรล์และ/หรือเมทานอล) ซึ่งถ่ายโอนไปยังคอลัมน์ ปั๊มส่งกระแสที่ต้องการและองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ คอลัมน์นี้เต็มไปด้วยสารดูดซับ ซึ่งเป็นอนุภาคของแข็งที่เป็นเม็ดเล็ก เช่น ซิลิกาหรือโพลีเมอร์ เครื่องตรวจจับสร้างสัญญาณตามสัดส่วนกับปริมาณของการมีอยู่ขององค์ประกอบตัวอย่างในคอลัมน์ ดังนั้นจึงอนุญาตให้วิเคราะห์เชิงปริมาณขององค์ประกอบตัวอย่างที่เลือก เครื่องมือ HPLC ได้รับการควบคุม และการวิเคราะห์ข้อมูลจัดทำโดยไมโครโปรเซสเซอร์ดิจิทัลและซอฟต์แวร์ผู้ใช้
ภาพที่ 1: ไดอะแกรมของเครื่องมือ HPLC
LCMS: ไดอะแกรมของเครื่องมือ LCMS แสดงไว้ในรูปที่ 2 สารสกัดตัวอย่างถูกแทรกลงในคอลัมน์ที่ประกอบด้วย HPLC คอลัมน์นี้เก็บตัวอย่างเมตาโบไลต์ตามลักษณะทางกายภาพ และเมแทบอไลต์ที่แตกต่างกันจะไหลไปยังแมสสเปกโตรมิเตอร์ในช่วงเวลาที่ต่างกัน แมสสเปกโทรสโกปีใช้สำหรับประเมินมวลของอนุภาค เพื่อกำหนดองค์ประกอบการจัดเรียงของโมเลกุล และสำหรับการชี้แจงโครงสร้างโมเลกุล อย่างไรก็ตาม ตัวอย่างควรถูกทำให้แตกตัวเป็นไอออนเพื่อสร้างโมเลกุลที่มีประจุเพื่อกำหนดอัตราส่วนมวลต่อประจุ ดังนั้น แทนที่จะใช้เครื่องมือ HPLC LCMS จึงประกอบด้วยโมดูลเพิ่มเติมสามโมดูล เช่น แหล่งเหล็ก เครื่องวิเคราะห์มวล และเครื่องตรวจจับ แหล่งกำเนิดไอออนสามารถเปลี่ยนตัวอย่างเฟสก๊าซให้เป็นไอออน และเครื่องวิเคราะห์มวลที่จัดกลุ่มไอออนตามมวลโดยใช้สนามแม่เหล็กไฟฟ้าสุดท้าย เครื่องตรวจจับจะวัดปริมาณค่าและส่งข้อมูลของไอออนแต่ละตัวที่มีอยู่ในตัวอย่าง เทคนิค LCMS สามารถใช้ได้ทั้งเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ
รูปที่ 2: ไดอะแกรมของเครื่องมือ LCMS
โดยสรุป HPLC เป็นวิธีโครมาโตกราฟีของเหลว ในขณะที่ LCMS คือการรวมกันของโครมาโตกราฟีของเหลวและแมสสเปกโตรเมตรี เทคนิคการวิเคราะห์ทั้งสองนี้มีลักษณะที่แตกต่างกัน แต่สามารถใช้เพื่อระบุและหาปริมาณองค์ประกอบอาหาร ยา และโมเลกุลที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพอื่นๆ ได้
