ความแตกต่างที่สำคัญ – YAC กับ BAC Vectors
เวกเตอร์ใช้ในการโคลนโมเลกุล เวกเตอร์สามารถกำหนดเป็นโมเลกุลดีเอ็นเอซึ่งทำหน้าที่เป็นพาหนะในการนำสารพันธุกรรมแปลกปลอมไปยังอีกเซลล์หนึ่ง เวกเตอร์ที่มี DNA ต่างประเทศเรียกว่า recombinant DNA และควรมีความสามารถในการทำซ้ำและแสดงออกภายในสิ่งมีชีวิตที่เป็นโฮสต์ โครโมโซมเทียมของยีสต์ (YAC) และโครโมโซมประดิษฐ์จากแบคทีเรีย (BAC) เป็นพาหะสองประเภทที่เกี่ยวข้องกับการโคลนนิ่ง ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง YAC และ BAC คือ YAC เป็นระบบเวกเตอร์ที่สร้างขึ้นโดยเทียมโดยใช้บริเวณเฉพาะของโครโมโซมยีสต์เพื่อแทรกสารพันธุกรรมจำนวนมากไปยังเซลล์ยีสต์ ในขณะที่ BAC เป็นระบบเวกเตอร์ที่สร้างขึ้นโดยเทียมโดยใช้ภูมิภาคเฉพาะของ Eโครโมโซมโคไลเพื่อแทรกดีเอ็นเอกลุ่มใหญ่เข้าไปในเซลล์อีโคไล
เวกเตอร์ YAC คืออะไร
YAC (โครโมโซมเทียมของยีสต์) เป็นโครโมโซมที่สร้างขึ้นอย่างเทียมซึ่งมีความสามารถในการขนส่ง DNA ต่างประเทศส่วนใหญ่และทำซ้ำภายในเซลล์ยีสต์ มีเซนโทรเมียร์ เทโลเมียร์ และลำดับการจำลองแบบอัตโนมัติซึ่งจำเป็นสำหรับการจำลองแบบและความเสถียร YAC ควรมีเครื่องหมายเลือกหรือเครื่องหมายและไซต์จำกัดเพื่อให้เป็นเวกเตอร์การโคลนที่มีประสิทธิภาพ ลำดับขนาดใหญ่ตั้งแต่ 1,000 kb ถึง 2000 kb สามารถแทรกลงใน YAC และถ่ายโอนไปยังยีสต์ได้ ประสิทธิภาพการแปลงของ YAC ต่ำมาก
รูปที่ 01: YAC Vector
BAC Vectors คืออะไร
แบคทีเรียประดิษฐ์โครโมโซม (BAC) เป็นโครโมโซมที่สร้างขึ้นโดยมนุษย์เทียมสำหรับการโคลนโมเลกุลมีบริเวณเฉพาะของ E. coli F plasmid และมีลักษณะเป็นวงกลมและม้วนงอมาก BAC ได้รับการพัฒนาเพื่อโคลนชิ้นส่วน DNA ให้เป็นแบคทีเรีย โดยเฉพาะกับ E. coli สามารถรับชิ้นส่วน DNA ที่มีขนาดสูงสุด 300 kb เมื่อเทียบกับ YAC เม็ดมีดโคลน BAC มีขนาดเล็กกว่า BACs ได้รับการพัฒนาในปี 1992 และยังคงได้รับความนิยมเนื่องจากความเสถียรและความสะดวกในการก่อสร้าง BAC ยังมีประโยชน์ในการพัฒนาวัคซีนอีกด้วย
รูปที่ 02: เวกเตอร์ BAC ในการโคลนโมเลกุล
เวกเตอร์ YAC และ BAC ต่างกันอย่างไร
YAC กับ BAC Vectors |
|
| YAC เป็นโครโมโซมที่ดัดแปลงพันธุกรรมโดยใช้ DNA ของยีสต์เพื่อการโคลนนิ่ง | BAC เป็นโมเลกุล DNA ที่ดัดแปลงพันธุกรรมโดยใช้ E. coli DNA เพื่อการโคลนนิ่ง |
| เพศ | |
| YACs ออกแบบมาเพื่อโคลนจีโนม DNA ขนาดใหญ่เป็นยีสต์ | BACs ได้รับการพัฒนาสำหรับการโคลนชิ้นส่วนจีโนมขนาดใหญ่ใน Escherichia coli |
| ความยาวแทรก | |
| YAC สามารถมีจีโนมขนาดเมกะเบสได้ (1000 kb – 2000 kb) | BAC สามารถใส่เม็ดมีดขนาด 200–300 kb หรือน้อยกว่า |
| ก่อสร้าง | |
| YAC DNA นั้นยากที่จะทำให้บริสุทธิ์เหมือนเดิมและต้องการความเข้มข้นสูงเพื่อสร้างระบบเวกเตอร์ YAC | BAC นั้นทำให้บริสุทธิ์ได้ง่ายเหมือนเดิมและสามารถสร้างได้อย่างง่ายดาย |
| เพ้อฝัน | |
| YAC มักจะเพ้อเจ้อ | BAC ไม่ค่อยเล่นกัน |
| เสถียรภาพ | |
| YAC ไม่เสถียร | BAC เสถียร |
| การดัดแปลง | |
| การรวมตัวของยีสต์เป็นไปได้มากและยังคงทำงานอยู่เสมอ ดังนั้นจึงสามารถสร้างการลบและการจัดเรียงใหม่อื่นๆ ใน YAC | E. ป้องกันการรวมตัวของโคไลและเปิดใช้งานเมื่อจำเป็น ดังนั้นจึงลดการจัดเรียงใหม่ที่ไม่ต้องการใน BAC |
| บำรุงรักษา | |
| การจัดการ recombinant YACs มักจะต้องการ YAC ที่จะถ่ายโอนไปยัง E. coli สำหรับการจัดการในภายหลัง ดังนั้นจึงเป็นกระบวนการที่ลำบาก | BAC การแก้ไขเกิดขึ้นโดยตรงใน E. coli ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องมีการถ่ายโอนดีเอ็นเอ ดังนั้นกระบวนการจึงไม่ยุ่งยาก |
สรุป – YAC กับ BAC Vectors
YAC ได้กลายเป็นเครื่องมือวิจัยที่จำเป็นในกระบวนการโคลนนิ่งเนื่องจากความสามารถในการโคลนดีเอ็นเอชิ้นใหญ่เข้าไปในสิ่งมีชีวิตที่เป็นโฮสต์ อย่างไรก็ตาม YACs มีข้อเสียหลายประการเช่นเวกเตอร์ เช่น ปัญหาในการก่อสร้าง chimerism ความไม่เสถียร ฯลฯ ดังนั้นเพื่อเอาชนะปัญหาเหล่านี้ นักวิทยาศาสตร์ได้พัฒนาเวกเตอร์ BAC BAC ถูกสร้างขึ้นโดยใช้บริเวณเฉพาะของโครโมโซม E. coli เป็นเวกเตอร์ที่เสถียรและสามารถสร้างได้ง่าย อย่างไรก็ตาม ความยาวของ DNA ที่ BAC สามารถจัดการได้นั้นน้อยกว่า YAC ถึง 20 เท่า นี่คือความแตกต่างระหว่างระบบเวกเตอร์ YAC และ BAC ปัจจุบัน BAC เป็นที่ต้องการมากกว่า YAC ในห้องปฏิบัติการ
