ความแตกต่างที่สำคัญ – Trypsinization อุ่น vs เย็น
Trypsinization แบบอุ่นและเย็นเป็นสองวิธีที่ใช้ในการแยกเซลล์จากเอนไซม์ในการเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์ ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นและแบบเย็น ตามชื่อที่แนะนำนั้น ขึ้นอยู่กับอุณหภูมิที่เพิ่มทริปซินเพื่อการแยกเซลล์ ทริปซิไลเซชั่นแบบอุ่นเกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิสูงกว่า (36.5 – 37 0C) ในขณะที่ทริปซิเนชั่นแบบเย็นเกิดขึ้นภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ
ในระหว่างกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิของเซลล์สัตว์ มีสามวิธีหลักที่ใช้และได้พิสูจน์แล้วว่าประสบความสำเร็จสามวิธี ได้แก่ การแยกเซลล์ทางกล การแยกเซลล์ด้วยเอนไซม์ และเทคนิคการแยกเซลล์เบื้องต้น การแยกตัวของเซลล์ด้วยเอนไซม์ที่นำไปสู่การแยกเซลล์ และทำโดยเอนไซม์ทริปซินที่ย่อยสลายโปรตีน ดังนั้นกระบวนการนี้จึงเรียกว่า Trypsinization Trypsinization สามารถทำได้ภายใต้สองเงื่อนไขที่แตกต่างกัน ได้แก่ Warm Trypsinization และ Cold Trypsinization ทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นเป็นวิธีการรักษาเซลล์ด้วยทริปซินภายใต้สภาวะที่อบอุ่นที่อุณหภูมิ 36.5 – 37 0C Cold trypsinization เป็นกระบวนการของการรักษา trypsin ที่เกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่เย็นกว่าโดยเฉพาะอย่างยิ่งในน้ำแข็งที่มีอุณหภูมิต่ำมาก
Warm Trypsinization คืออะไร
Trypsinization สามารถทำได้เพื่อแยกส่วนประกอบของเซลล์เพื่อแยกเซลล์ออกเพื่อสร้างการเพาะเลี้ยงเซลล์หลัก ทริปซินเป็นเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีน และส่วนผสมของเอนไซม์ที่ใช้ในการทริปซิไนเซชันอาจเป็นสารสกัดหยาบหรือผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ก็ได้สารสกัดหยาบกล่าวกันว่ามีประสิทธิภาพมากขึ้นในการสลายโปรตีนและการสลายตัวของเซลล์ เนื่องจากมีเอนไซม์ที่ย่อยสลายอื่นๆ
ทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นเป็นวิธีที่ใช้บ่อยที่สุดสำหรับการแยกเซลล์ซึ่งเกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิสูงขึ้น ก่อนทำการรักษาโดยทริปซิไนเซชั่น เนื้อเยื่อที่ต้องการจะถูกหั่นเป็นชิ้นเล็กๆ ช่วยให้กระบวนการแยกแยะได้ง่าย เนื้อเยื่อที่หั่นแล้วจะถูกล้างด้วยสื่อพิเศษที่เรียกว่า Dissection Basal S alt medium.
เมื่อเสร็จสิ้นขั้นตอนการล้าง เซลล์จะถูกแปลงเป็นขวดที่มีเอนไซม์ที่ทำงานอยู่ ซึ่งก็คือทริปซิน เนื่องจากเทคนิคนี้บ่งบอกถึงโปรโตคอลทริปซิไนเซชั่นที่อบอุ่น ทริปซินจึงถูกวางที่อุณหภูมิประมาณ 37 0C ประมาณสี่ชั่วโมง
รูปที่ 01: Trypsin
เนื้อหาผสมและกวนโดยใช้วิธีการหมุนเหวี่ยงเพื่อความสะดวกของโปรโตคอลและเพื่อเร่งกระบวนการแยกส่วน เมื่อถึงเวลาที่แนะนำ เซลล์สามารถได้มาจากส่วนลอยเหนือตะกอน จากนั้นเซลล์ที่ได้จากส่วนลอยเหนือตะกอนจะถูกฟักที่อุณหภูมิและเวลาที่กำหนด
Cold Trypsinization คืออะไร
ทริปซิไนเซชั่นเย็นเป็นทริปซิไนเซชั่นอีกประเภทหนึ่งที่เกิดขึ้นภายใต้สภาพอากาศหนาวเย็น ในเทคนิคนี้ เซลล์ที่สับและล้างจะถูกใส่ในขวดที่ใส่น้ำแข็งแล้วแช่ด้วยทริปซิน ระยะเวลาแช่นานกว่ามาก – ประมาณ 6 – 24 ชั่วโมง
หลังจากเสร็จสิ้นขั้นตอนการแช่ ทริปซินจะถูกลบออกจากเซลล์ไลเซท และเนื้อเยื่อจะถูกฟักต่อไปที่ 37 0C ประมาณ 20 – 30 นาที การแยกตัวของเซลล์เกิดจากการปิเปตซ้ำๆ ของส่วนผสมของเนื้อเยื่อสิ่งนี้จะช่วยให้เซลล์แยกตัวออกจากเมมเบรนและมาถึงส่วนเหนือตะกอน เมื่อเซลล์อยู่ในส่วนลอยเหนือตะกอน พวกมันจะถูกฟักและเติบโตในอุณหภูมิและระยะเวลาที่ต้องการ
วิธีทริปซิไนเซชั่นแบบเย็นมีข้อดีหลายประการ
- จำนวนเซลล์ที่มีชีวิตสูงขึ้นเนื่องจากความเสียหายของเซลล์ลดลง ความเสียหายของเซลล์จะลดลงโดยไม่ใช้ขั้นตอนการหมุนเหวี่ยง
- วิธีสะดวกสุดๆ
- ลำบากน้อยลง
ข้อจำกัดหลักของวิธีทริปซิไนเซชั่นเย็นคือไม่สามารถใช้ปริมาณมากได้ในครั้งเดียว
Trypsinization อุ่นและเย็นมีความคล้ายคลึงกันอย่างไร
- กระบวนการทริปซิไนเซชั่นทั้งแบบอุ่นและแบบเย็นใช้เอ็นไซม์ทริปซินในการจำแนกเซลล์
- ทั้งกระบวนการอุ่นและเย็น Trypsinization ใช้ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์สำหรับการแยกเซลล์
- ทั้งกระบวนการอุ่นและเย็น Trypsinization เซลล์ได้มาจาก supernatant
Trypsinization อุ่นและเย็นต่างกันอย่างไร
Trypsinization อุ่น vs เย็น |
|
| ทริปซินไลเซชั่นอุ่นเป็นวิธีการรักษาเซลล์ด้วยทริปซินภายใต้สภาวะอบอุ่นที่อุณหภูมิ 36.5 – 37 0. | ทริปซินไลเซชั่นเย็นเป็นกระบวนการของการรักษาทริปซินที่เกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่เย็นกว่า โดยควรอยู่ในน้ำแข็งที่รักษาอุณหภูมิให้ต่ำมาก |
| โปรโตคอล | |
| ตัดกระดาษทิชชู่ไว้ที่ 37 0C อย่างต่อเนื่องตลอดขั้นตอน | กระดาษทิชชู่ที่หั่นแล้วจะถูกเก็บเอาไว้ในอุณหภูมิที่เย็นจัด จากนั้นจึงคงไว้ที่ 37 0. |
| อุณหภูมิ | |
| ทริปซินไลเซชั่นอุ่นๆ เกิดขึ้นที่ 36.5 – 37 0 | ทริปซิไลเซชันแบบเย็นเกิดขึ้นที่อุณหภูมิที่เย็นจัด |
| เวลาที่ใช้ | |
| ใช้เวลาน้อยลงสำหรับกระบวนการทริปซิไลเซชั่นอุ่นทั้งหมด (ประมาณ 4 ชั่วโมง) | ใช้เวลานานขึ้น (ประมาณ 6 – 24 ชั่วโมง) สำหรับทริปซิไลเซชั่นด้วยความเย็น |
| ผลผลิตของเซลล์ที่มีชีวิต | |
| trypsinization อุ่นต่ำ | trypsinization เย็นสูง |
| การใช้การหมุนเหวี่ยง | |
| การปั่นแยกเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการแยกเซลล์ในทริปซิไนเซชันแบบอุ่น | ไม่จำเป็นต้องใช้การหมุนเหวี่ยงในทริปซิไลเซชั่นแบบเย็น |
| ปริมาณเนื้อเยื่อเริ่มต้นสำหรับทริปซิไลเซชัน | |
| ใช้ทิชชู่ในปริมาณมากในการทำทริปซิไลเซชั่นอุ่นๆ | กระดาษทิชชู่ในปริมาณที่น้อยกว่าสามารถนำมาใช้ในทริปซิไลเซชั่นเย็นได้ |
| เซลล์เสียหาย | |
| สูงเนื่องจากการปั่นแยกในทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่น | ลดลงเนื่องจากทริปซิไลเซชั่นเย็น |
สรุป – Trypsinization อุ่น vs เย็น
ทริปซิไนเซชันเป็นวิธีการใช้เอนไซม์ทริปซินที่ย่อยสลายโปรตีนเพื่อแยกส่วนและเตรียมการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิในระหว่างกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ มีสองเทคนิคหลักของทริปซิไนเซชันตามอุณหภูมิที่ใช้ระหว่างขั้นตอน พวกมันคือทริปซิไนเซชั่นที่อบอุ่นและเย็น ทริปซิไลเซชั่นแบบอุ่นจะดำเนินการที่ 37 0C ในขณะที่ทริปซินไลเซชั่นแบบเย็นจะดำเนินการภายใต้สภาวะที่เย็นจัดแม้ว่าทริปซิไนเซชั่นแบบเย็นจะใช้เวลานานกว่าจะเสร็จสมบูรณ์ แต่ก็มีการกล่าวกันว่ามีเซลล์ที่มีชีวิตให้ผลผลิตสูงกว่า เนื่องจากความเสียหายของเซลล์ลดลงในทริปซิไนเซชันแบบเย็น เนื่องจากไม่ได้ใช้ขั้นตอนการปั่นแยกแบบแรงเหวี่ยง นี่คือความแตกต่างระหว่างทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นและแบบเย็น
