ความแตกต่างระหว่าง Trypsinization แบบอุ่นและแบบเย็น

2025 ผู้เขียน: Alex Aldridge | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2025-01-23 12:08

ความแตกต่างที่สำคัญ – Trypsinization อุ่น vs เย็น

Trypsinization แบบอุ่นและเย็นเป็นสองวิธีที่ใช้ในการแยกเซลล์จากเอนไซม์ในการเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์ ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นและแบบเย็น ตามชื่อที่แนะนำนั้น ขึ้นอยู่กับอุณหภูมิที่เพิ่มทริปซินเพื่อการแยกเซลล์ ทริปซิไลเซชั่นแบบอุ่นเกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิสูงกว่า (36.5 – 37 ^{0C) ในขณะที่ทริปซิเนชั่นแบบเย็นเกิดขึ้นภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ}

ในระหว่างกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิของเซลล์สัตว์ มีสามวิธีหลักที่ใช้และได้พิสูจน์แล้วว่าประสบความสำเร็จสามวิธี ได้แก่ การแยกเซลล์ทางกล การแยกเซลล์ด้วยเอนไซม์ และเทคนิคการแยกเซลล์เบื้องต้น การแยกตัวของเซลล์ด้วยเอนไซม์ที่นำไปสู่การแยกเซลล์ และทำโดยเอนไซม์ทริปซินที่ย่อยสลายโปรตีน ดังนั้นกระบวนการนี้จึงเรียกว่า Trypsinization Trypsinization สามารถทำได้ภายใต้สองเงื่อนไขที่แตกต่างกัน ได้แก่ Warm Trypsinization และ Cold Trypsinization ทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นเป็นวิธีการรักษาเซลล์ด้วยทริปซินภายใต้สภาวะที่อบอุ่นที่อุณหภูมิ 36.5 – 37 ^{0C Cold trypsinization เป็นกระบวนการของการรักษา trypsin ที่เกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่เย็นกว่าโดยเฉพาะอย่างยิ่งในน้ำแข็งที่มีอุณหภูมิต่ำมาก}

Warm Trypsinization คืออะไร

Trypsinization สามารถทำได้เพื่อแยกส่วนประกอบของเซลล์เพื่อแยกเซลล์ออกเพื่อสร้างการเพาะเลี้ยงเซลล์หลัก ทริปซินเป็นเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีน และส่วนผสมของเอนไซม์ที่ใช้ในการทริปซิไนเซชันอาจเป็นสารสกัดหยาบหรือผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ก็ได้สารสกัดหยาบกล่าวกันว่ามีประสิทธิภาพมากขึ้นในการสลายโปรตีนและการสลายตัวของเซลล์ เนื่องจากมีเอนไซม์ที่ย่อยสลายอื่นๆ

ทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นเป็นวิธีที่ใช้บ่อยที่สุดสำหรับการแยกเซลล์ซึ่งเกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิสูงขึ้น ก่อนทำการรักษาโดยทริปซิไนเซชั่น เนื้อเยื่อที่ต้องการจะถูกหั่นเป็นชิ้นเล็กๆ ช่วยให้กระบวนการแยกแยะได้ง่าย เนื้อเยื่อที่หั่นแล้วจะถูกล้างด้วยสื่อพิเศษที่เรียกว่า Dissection Basal S alt medium.

เมื่อเสร็จสิ้นขั้นตอนการล้าง เซลล์จะถูกแปลงเป็นขวดที่มีเอนไซม์ที่ทำงานอยู่ ซึ่งก็คือทริปซิน เนื่องจากเทคนิคนี้บ่งบอกถึงโปรโตคอลทริปซิไนเซชั่นที่อบอุ่น ทริปซินจึงถูกวางที่อุณหภูมิประมาณ 37 ^{0C ประมาณสี่ชั่วโมง}

รูปที่ 01: Trypsin

เนื้อหาผสมและกวนโดยใช้วิธีการหมุนเหวี่ยงเพื่อความสะดวกของโปรโตคอลและเพื่อเร่งกระบวนการแยกส่วน เมื่อถึงเวลาที่แนะนำ เซลล์สามารถได้มาจากส่วนลอยเหนือตะกอน จากนั้นเซลล์ที่ได้จากส่วนลอยเหนือตะกอนจะถูกฟักที่อุณหภูมิและเวลาที่กำหนด

Cold Trypsinization คืออะไร

ทริปซิไนเซชั่นเย็นเป็นทริปซิไนเซชั่นอีกประเภทหนึ่งที่เกิดขึ้นภายใต้สภาพอากาศหนาวเย็น ในเทคนิคนี้ เซลล์ที่สับและล้างจะถูกใส่ในขวดที่ใส่น้ำแข็งแล้วแช่ด้วยทริปซิน ระยะเวลาแช่นานกว่ามาก – ประมาณ 6 – 24 ชั่วโมง

หลังจากเสร็จสิ้นขั้นตอนการแช่ ทริปซินจะถูกลบออกจากเซลล์ไลเซท และเนื้อเยื่อจะถูกฟักต่อไปที่ 37 ^{0C ประมาณ 20 – 30 นาที การแยกตัวของเซลล์เกิดจากการปิเปตซ้ำๆ ของส่วนผสมของเนื้อเยื่อสิ่งนี้จะช่วยให้เซลล์แยกตัวออกจากเมมเบรนและมาถึงส่วนเหนือตะกอน เมื่อเซลล์อยู่ในส่วนลอยเหนือตะกอน พวกมันจะถูกฟักและเติบโตในอุณหภูมิและระยะเวลาที่ต้องการ}

วิธีทริปซิไนเซชั่นแบบเย็นมีข้อดีหลายประการ

• จำนวนเซลล์ที่มีชีวิตสูงขึ้นเนื่องจากความเสียหายของเซลล์ลดลง ความเสียหายของเซลล์จะลดลงโดยไม่ใช้ขั้นตอนการหมุนเหวี่ยง
• วิธีสะดวกสุดๆ
• ลำบากน้อยลง

ข้อจำกัดหลักของวิธีทริปซิไนเซชั่นเย็นคือไม่สามารถใช้ปริมาณมากได้ในครั้งเดียว

Trypsinization อุ่นและเย็นมีความคล้ายคลึงกันอย่างไร

• กระบวนการทริปซิไนเซชั่นทั้งแบบอุ่นและแบบเย็นใช้เอ็นไซม์ทริปซินในการจำแนกเซลล์
• ทั้งกระบวนการอุ่นและเย็น Trypsinization ใช้ในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเซลล์สำหรับการแยกเซลล์
• ทั้งกระบวนการอุ่นและเย็น Trypsinization เซลล์ได้มาจาก supernatant

Trypsinization อุ่นและเย็นต่างกันอย่างไร

Trypsinization อุ่น vs เย็น
ทริปซินไลเซชั่นอุ่นเป็นวิธีการรักษาเซลล์ด้วยทริปซินภายใต้สภาวะอบอุ่นที่อุณหภูมิ 36.5 – 37 0.	ทริปซินไลเซชั่นเย็นเป็นกระบวนการของการรักษาทริปซินที่เกิดขึ้นภายใต้สภาวะที่เย็นกว่า โดยควรอยู่ในน้ำแข็งที่รักษาอุณหภูมิให้ต่ำมาก
โปรโตคอล
ตัดกระดาษทิชชู่ไว้ที่ 37 0C อย่างต่อเนื่องตลอดขั้นตอน	กระดาษทิชชู่ที่หั่นแล้วจะถูกเก็บเอาไว้ในอุณหภูมิที่เย็นจัด จากนั้นจึงคงไว้ที่ 37 0.
อุณหภูมิ
ทริปซินไลเซชั่นอุ่นๆ เกิดขึ้นที่ 36.5 – 37 0	ทริปซิไลเซชันแบบเย็นเกิดขึ้นที่อุณหภูมิที่เย็นจัด
เวลาที่ใช้
ใช้เวลาน้อยลงสำหรับกระบวนการทริปซิไลเซชั่นอุ่นทั้งหมด (ประมาณ 4 ชั่วโมง)	ใช้เวลานานขึ้น (ประมาณ 6 – 24 ชั่วโมง) สำหรับทริปซิไลเซชั่นด้วยความเย็น
ผลผลิตของเซลล์ที่มีชีวิต
trypsinization อุ่นต่ำ	trypsinization เย็นสูง
การใช้การหมุนเหวี่ยง
การปั่นแยกเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการแยกเซลล์ในทริปซิไนเซชันแบบอุ่น	ไม่จำเป็นต้องใช้การหมุนเหวี่ยงในทริปซิไลเซชั่นแบบเย็น
ปริมาณเนื้อเยื่อเริ่มต้นสำหรับทริปซิไลเซชัน
ใช้ทิชชู่ในปริมาณมากในการทำทริปซิไลเซชั่นอุ่นๆ	กระดาษทิชชู่ในปริมาณที่น้อยกว่าสามารถนำมาใช้ในทริปซิไลเซชั่นเย็นได้
เซลล์เสียหาย
สูงเนื่องจากการปั่นแยกในทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่น	ลดลงเนื่องจากทริปซิไลเซชั่นเย็น

สรุป – Trypsinization อุ่น vs เย็น

ทริปซิไนเซชันเป็นวิธีการใช้เอนไซม์ทริปซินที่ย่อยสลายโปรตีนเพื่อแยกส่วนและเตรียมการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิในระหว่างกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ มีสองเทคนิคหลักของทริปซิไนเซชันตามอุณหภูมิที่ใช้ระหว่างขั้นตอน พวกมันคือทริปซิไนเซชั่นที่อบอุ่นและเย็น ทริปซิไลเซชั่นแบบอุ่นจะดำเนินการที่ 37 ^{0C ในขณะที่ทริปซินไลเซชั่นแบบเย็นจะดำเนินการภายใต้สภาวะที่เย็นจัดแม้ว่าทริปซิไนเซชั่นแบบเย็นจะใช้เวลานานกว่าจะเสร็จสมบูรณ์ แต่ก็มีการกล่าวกันว่ามีเซลล์ที่มีชีวิตให้ผลผลิตสูงกว่า เนื่องจากความเสียหายของเซลล์ลดลงในทริปซิไนเซชันแบบเย็น เนื่องจากไม่ได้ใช้ขั้นตอนการปั่นแยกแบบแรงเหวี่ยง นี่คือความแตกต่างระหว่างทริปซิไนเซชั่นแบบอุ่นและแบบเย็น}