ความแตกต่างที่สำคัญ – HPLC กับ HPTLC
ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ HPTLC คือ HPLC อนุญาตให้แยกส่วนประกอบในเชิงปริมาณในตัวอย่างได้ ในขณะที่ HPTLC ไม่อนุญาตให้แยกส่วนประกอบในตัวอย่างเชิงปริมาณ
Chromatography เป็นวิธีการแยกทางกายภาพที่ใช้ในการแยกและระบุส่วนประกอบในส่วนผสม ทั้ง HPLC และ HPTLC เป็นเทคนิคโครมาโตกราฟี HPLC เป็นโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง HPTLC เป็นโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางที่มีประสิทธิภาพสูง
HPLC คืออะไร
HPLC คือโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่ใช้ในการแยก ระบุ และหาปริมาณส่วนประกอบในส่วนผสมในเทคนิคนี้ ตัวอย่างจะถูกละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสม จากนั้นตัวทำละลายที่มีตัวอย่างจะถูกส่งผ่านปั๊มด้วยแรงดันที่กำหนด ปั๊มเต็มไปด้วยวัสดุดูดซับที่เป็นของแข็ง จากนั้นส่วนประกอบบางส่วนจะจับกับวัสดุดูดซับอย่างแน่นหนา ในขณะที่ส่วนประกอบอื่นๆ จะเกาะติดกันอย่างหลวมๆ ทำให้ส่วนประกอบมีอัตราการไหลผ่านปั๊มต่างกัน จึงสามารถแยกส่วนประกอบได้อย่างง่ายดาย
รูปที่ 01: ระบบ HPLC
วัสดุดูดซับที่เติมปั๊มเรียกว่าเฟสอยู่กับที่ ตัวทำละลายที่มีตัวอย่างที่ละลายน้ำเรียกว่าเฟสเคลื่อนที่ ปั๊มที่ใช้ในเทคนิคนี้เรียกว่าคอลัมน์ คอลัมน์นี้เต็มไปด้วยวัสดุดูดซับ ส่วนใหญ่แล้วคืออนุภาคซิลิกา ขนาดของอนุภาคเหล่านี้อาจมีตั้งแต่ 2-50 ไมโครเมตร กระบวนการแยกได้รับผลกระทบจากองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่และอุณหภูมิของระบบปฏิกิริยาระหว่างเฟสที่อยู่กับที่และส่วนประกอบในตัวอย่างอาจเป็นปฏิกิริยาที่ไม่ชอบน้ำ ปฏิกิริยาระหว่างไดโพลกับไดโพล พันธะไอออนิก เป็นต้น
ความดันในการทำงานของ HPLC นั้นสูงกว่าโครมาโตกราฟีของเหลวแบบเดิมมาก อยู่ที่ประมาณ 50-350 บาร์ ความแตกต่างระหว่างโครมาโตกราฟีของเหลวและ HPLC คือในโครมาโตกราฟีของเหลว ตัวอย่างตกผ่านคอลัมน์ภายใต้แรงโน้มถ่วง ในขณะที่ใน HPLC ตัวอย่างจะถูกดันผ่านคอลัมน์ ขนาดของคอลัมน์และอนุภาคดูดซับยังเล็กมากเมื่อเทียบกับโครมาโตกราฟีของเหลวแบบดั้งเดิม อย่างไรก็ตาม ความละเอียดที่กำหนดโดยเทคนิค HPLC นั้นเหนือกว่า
HPTLC คืออะไร
HPTLC คือโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางที่มีประสิทธิภาพสูง เป็นรูปแบบอัตโนมัติขั้นสูงของ TLC แบบดั้งเดิม เทคนิคนี้ให้ความละเอียดที่มีประสิทธิภาพในระยะเวลาอันสั้น ในวิธีการวิเคราะห์นี้ สามารถวิเคราะห์ตัวอย่างและการอ้างอิงได้ในเวลาเดียวกัน ซึ่งช่วยให้เปรียบเทียบตัวอย่างกับข้อมูลอ้างอิงได้ให้ความแม่นยำในการวิเคราะห์ที่ดีขึ้นกว่าเทคนิคโครมาโตกราฟีอื่นๆ ใช้เวลาในการวิเคราะห์น้อยลง เทคนิคนี้เป็นเทคนิคราคาประหยัด
รูปที่ 02: การวิเคราะห์สีย้อมอาหารโดยใช้ HPTLC
วิธี HPTLC เป็นกระบวนการที่เรียบง่าย และขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างก็ถูกกำจัดออกไปด้วย (ใน TLC แบบดั้งเดิม ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างจะถูกรวมไว้ก่อนการแยก ขั้นตอนนี้เกี่ยวข้องกับการทำความสะอาดและการตกแต่ง) สามารถใช้ตัวทำละลายได้โดยตรงโดยไม่ต้องเตรียมการล่วงหน้าใดๆ แม้ว่าเทคนิคโครมาโตกราฟีอื่นๆ จะต้องการการบำบัดล่วงหน้า เช่น การกำจัดแก๊ส การกรอง ฯลฯ
วัสดุดูดซับที่ใช้ใน HPTLC คือซิลิกาที่มีขนาดอนุภาคเล็กมาก ใน TLC แบบดั้งเดิม ขนาดอนุภาคของซิลิกาคือ 5-20 ไมโครเมตร ในขณะที่ใน HPTLC จะมีขนาด 4-8 ไมโครเมตร ตัวอย่างถูกนำไปใช้กับเพลต HPTLC โดยใช้ applicatorให้การใช้งานที่สม่ำเสมอและปลอดภัย จากนั้นเพลตจะถูกวางไว้ในห้องที่มีเฟสเคลื่อนที่ ห้องควรอิ่มตัวด้วยไอของเฟสเคลื่อนที่ หลังจากกระบวนการ HPTLC สามารถตรวจจับจุดที่เคลื่อนไหวได้ เมื่อตรวจจับจุดบนเพลต เทคนิค HPTLC จะใช้พื้นที่ยูวีที่เหมาะสมหรือห้องไอโอดีน
HPLC กับ HPTLC ต่างกันอย่างไร
HPLC กับ HPTLC |
|
| HPLC คือโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง | HPTLC คือโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางที่มีประสิทธิภาพสูง |
| เทคนิค | |
| ใน HPLC เฟสเคลื่อนที่ที่มีตัวทำละลายจะถูกส่งผ่านคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยเฟสที่อยู่กับที่ | ใน HPTLC ตัวอย่างจะถูกตรวจพบบนเพลต TLC และวางอยู่ภายในห้องที่มีเฟสเคลื่อนที่ จากนั้นตัวอย่างจะได้รับอนุญาตให้ย้ายขึ้นไปบนจานพร้อมกับเฟสเคลื่อนที่ |
| การวัด | |
| ใน HPLC ความแตกต่างระหว่างอัตราการไหลของส่วนประกอบผ่านคอลัมน์จะใช้เพื่อแยกส่วนประกอบในตัวอย่าง | ใน HPTLC ความแตกต่างระหว่างระยะทางที่แต่ละส่วนประกอบในตัวอย่างใช้เพื่อแยกส่วนประกอบในตัวอย่าง |
| การแยกเชิงปริมาณ | |
| HPLC อนุญาตให้แยกส่วนประกอบในเชิงปริมาณในตัวอย่างได้ | HPTLC ไม่อนุญาตให้แยกส่วนประกอบในเชิงปริมาณในตัวอย่าง |
สรุป – HPLC กับ HPTLC
HPLC และ HPTLC เป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีสองแบบ ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง HPLC และ HPTLC คือ HPLC อนุญาตให้แยกส่วนประกอบในเชิงปริมาณในตัวอย่างได้ ในขณะที่ HPTLC ไม่อนุญาตให้แยกส่วนประกอบในเชิงปริมาณในตัวอย่าง
