ข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง GFP และ EGFP คือ GFP เป็นโปรตีนประเภท wild-type ที่รวมอยู่ในการโคลนโมเลกุลของเซลล์ที่ไม่ใช่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมในขณะที่ EGFP เป็น GFP ที่ได้รับการปรับปรุงหรือดัดแปลงซึ่งสามารถใช้กับเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม.
การโคลนโมเลกุลเป็นเทคนิคขั้นสูงที่นักวิทยาศาสตร์ใช้อย่างมากในการแสดงโปรตีนผ่านเทคโนโลยีรีคอมบิแนนท์ ในเทคโนโลยีรีคอมบิแนนท์ DNA จำเป็นต้องเปลี่ยนเวกเตอร์ลูกผสมให้กลายเป็นโฮสต์ของสิ่งมีชีวิตได้สำเร็จ ดังนั้น ในระหว่างกระบวนการแปลงร่าง ควรมีการระบุและยืนยันว่ายีนที่สนใจได้รับการแปลงสภาพแล้วหรือไม่ไปยังโฮสต์ ในการประเมินสิ่งนี้ นักชีววิทยาระดับโมเลกุลได้นำเทคนิคต่างๆ มาใช้เทคนิคหนึ่งคือยีนนักข่าว ยีนนักข่าวเหล่านี้ทำหน้าที่เป็นเครื่องหมายที่เลือกได้เพื่อเลือกทรานส์ฟอร์เมชันที่ถูกต้อง ดังนั้น Green Fluorescent Protein (GFP) และ Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) จึงเป็นโปรตีนสองชนิดที่ใช้ในการโคลนนิ่งโมเลกุล
GFP คืออะไร
GFP เป็นโปรตีนชนิดธรรมชาติที่มีกรดอะมิโนตกค้าง 238 ตัวและบริเวณที่สามารถเลือกลำดับกรดอะมิโนได้หลายส่วน ซึ่งแยกความแตกต่างจากโปรตีนเรืองแสงอื่นๆ นอกจากนี้ โปรตีนชนิดธรรมชาตินี้แต่เดิมถูกแยกออกจาก Aequorea Victoria; แมงกะพรุนชนิดหนึ่ง อย่างไรก็ตาม ในปรากฏการณ์ทางธรรมชาติ แมงกะพรุนสามารถผลิตแสงสีเขียวเพื่อตอบสนองต่อสิ่งเร้าบางอย่างได้
ก่อนหน้านี้ แนวคิดนี้ทำให้นักวิทยาศาสตร์ประหลาดใจ และพวกเขาตัดสินใจที่จะใช้กับเทคโนโลยีดีเอ็นเอลูกผสมของพวกเขา ด้วยเหตุนี้ นักวิทยาศาสตร์จึงใช้รูปแบบการกลายพันธุ์ของยีนประเภท wild-type เป็นยีนนักข่าวในการศึกษาการแสดงออกของยีน ยีนป่าของ GFP สามารถผลิตโปรตีนซึ่งให้การเรืองแสงที่อุณหภูมิห้องหรือภายใต้แสงยูวีดังนั้นเมื่อแทรกเข้าไปในทรานส์ฟอร์มแทนต์ มันจะแสดงและทำให้เกิดการเรืองแสง หากการเรืองแสงมีผลหลังจากกระบวนการแปลงสภาพ จะเป็นการยืนยันความสำเร็จของกระบวนการเปลี่ยนรูป พูดง่ายๆ ก็คือ การปล่อยแสงฟลูออเรสเซนส์ส่งสัญญาณถึงการเปลี่ยนแปลงที่ประสบความสำเร็จของเวกเตอร์ที่นำยีนที่สนใจเข้าสู่โฮสต์
รูปที่ 01: GFP
ด้วยเหตุนี้ GFP จึงทำหน้าที่เป็นเครื่องหมายในการแสดงออกของยีนในร่างกาย ปัจจุบันมีการใช้เทคนิคพันธุวิศวกรรมในการผลิต GFP นอกจากนี้ยังมี GFP เวอร์ชันปรับปรุงมากมาย เช่น EGFP ดังนั้น สิ่งนี้ทำให้สามารถใช้ GFP ได้อย่างมีประสิทธิภาพในการศึกษาการโคลนโมเลกุลและการแสดงออกของยีน
EGFP คืออะไร
Enhanced Green Fluorescent Protein หรือ EGFP เป็น GFP รุ่นปรับปรุงพูดง่ายๆ ก็คือ เราสามารถกำหนด EGFP เป็น GFP แบบ wild-type เวอร์ชันที่ออกแบบทางวิศวกรรมได้ เมื่อยีนป่าของ GFP กลายพันธุ์ มันจะก่อให้เกิดผลประโยชน์ ดังนั้นยีนกลายพันธุ์ของ GFP ทำให้สามารถแสดงออกถึงอักขระใหม่ได้ และด้วยเหตุนี้ เราจึงสามารถผลิต Enhanced GFP ที่มีลักษณะเฉพาะที่ดีขึ้นได้ นอกจากนี้ เราสามารถแนะนำการกลายพันธุ์ได้สำเร็จในยีน GFP ชนิดพันธุ์ป่าโดยใช้การฉายรังสีหรือวิธีการทางเคมี ยีนที่กลายพันธุ์เหล่านี้จะผลิต EGFP ซึ่งมีลักษณะที่เป็นประโยชน์มากกว่า
รูปที่ 02: EGFP
คุณลักษณะที่ปรับปรุงของ EGFP มีดังนี้
- สามารถส่งสัญญาณเรืองแสงที่แรงขึ้นได้
- มีความไวสูง
- ใช้กับเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมแทนโปรคาริโอตและยูคาริโอตระดับล่างอื่นๆ ได้
- นอกจากนี้ยังเพิ่มความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์
ดังนั้น เมื่อเปรียบเทียบกับ GFP แล้ว EGFP เป็นตัวเลือกที่ต้องการสำหรับการศึกษาการแสดงออกของยีน อย่างไรก็ตาม สินค้ามีราคาแพงกว่าเมื่อเทียบกับ GFP
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง GFP และ EGFP คืออะไร
- GFP และ EGFP เป็นโปรตีนสองชนิดที่มีความสามารถในการปล่อยสีเขียว
- ดังนั้น ทั้งสองทำหน้าที่เป็นโปรตีนนักข่าวในการศึกษาการแสดงออกของยีน
- นอกจากนี้ยังสามารถสังเคราะห์ทั้งคู่โดยใช้เทคโนโลยี recombinant DNA
- นอกจากนี้ยังง่ายต่อการกลายพันธุ์ทั้งสองประเภทนี้เพิ่มเติมเพื่อสังเคราะห์รูปแบบที่ปรับปรุงแล้ว
ความแตกต่างระหว่าง GFP และ EGFP คืออะไร
ยีนนักข่าวเป็นยีนที่ยึดติดกับยีนที่สนใจในเทคโนโลยีดีเอ็นเอลูกผสม มันส่งสัญญาณการเปลี่ยนแปลงที่ประสบความสำเร็จของเวกเตอร์ลูกผสมไปยังโฮสต์ที่นี่ GFP และ EGFP เป็นโปรตีนเรืองแสงสีเขียวสองประเภทที่ทำงานเป็นโปรตีนนักข่าว อย่างไรก็ตาม ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง GFP และ EGFP ก็คือ GFP เป็นแบบไวด์ในขณะที่ EGFP เป็นเวอร์ชันที่ออกแบบทางวิศวกรรมของ GFP นอกจากนี้ EGFP มีลักษณะที่เป็นประโยชน์มากกว่า GFP ตัวอย่างเช่น EGFP ผลิตแสงจากหลอดฟลูออเรสเซนต์ที่แรงกว่าและไวกว่า GFP ความแตกต่างอีกประการระหว่าง GFP และ EGFP คือระบบที่เราสามารถใช้ได้ ระบบที่ไม่ใช่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมใช้ GFP ในขณะที่ระบบของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมใช้ EGFP
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงความแตกต่างระหว่าง GFP และ EGFP ในรูปแบบตาราง
สรุป – GFP vs EGFP
GFP และ EGFP เป็นโปรตีนนักข่าวในการศึกษาการโคลนโมเลกุลและการแสดงออกของยีน GFP เป็นโปรตีนประเภทธรรมชาติ ซึ่งเป็นโปรตีนเรืองแสงสีเขียวโปรตีนถูกแยกจากแมงกะพรุน Aequorea victoria ในขั้นต้น ในทางตรงกันข้าม EFGP เป็นรูปแบบโปรตีน GFP ที่ปรับปรุงแล้ว เป็นการกลายพันธุ์ของประเภทไวด์ที่มีคุณสมบัติที่ดีขึ้น ดังนั้น EFGP จึงมีความแรงของสัญญาณและความไวที่สูงขึ้น ดังนั้นเราจึงสามารถใช้กับเวกเตอร์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้ ในทางตรงกันข้าม การใช้ GFP ส่วนใหญ่จะใช้กับพาหะที่ไม่ใช่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเท่านั้น โดยรวมแล้ว นี่คือความแตกต่างระหว่าง GFP และ EGFP
