ความแตกต่างที่สำคัญ – เจลซ้อน vs เจลแยก
ใช้คำว่า stacking gel และ Separating gel ในการอธิบายเทคนิค SDS-PAGE SDS-PAGE หรือ sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis เป็นเทคนิคในห้องปฏิบัติการที่ใช้ในการแยกโมเลกุลโปรตีนตามน้ำหนักโมเลกุล ทฤษฎีเบื้องหลังเทคนิคนี้คือโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่างกันแสดงอัตราการย้ายถิ่นที่แตกต่างกัน โมเลกุลที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำจะเคลื่อนที่เร็วขึ้นในขณะที่โมเลกุลที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงจะเคลื่อนที่ช้าๆ สื่อสำหรับการย้ายถิ่นฐานคือเจล เจลมีสองประเภทที่เรียกว่าสแต็คเจลและเจลแยกความแตกต่างที่สำคัญระหว่างเจลแบบเรียงซ้อนกับเจลสำหรับแยกคือ pH ของเจลแบบเรียงซ้อนคือ 6.8 ในขณะที่ค่า pH ของเจลสำหรับแยกคือ 8.8
Stacking Gel คืออะไร
เจลสแต็กกิ้งเป็นเจลโพลีอะคริลาไมด์เข้มข้นต่ำที่วางทับเจลละลายน้ำที่มีความเข้มข้นมากกว่า (เจลแยก) ในเทคนิค SDS-PAGE เจลซ้อนใช้เพื่อปรับปรุงความละเอียดของอิเล็กโตรโฟรีซิส ความละเอียดเพิ่มขึ้นเนื่องจากความแตกต่างระหว่างความเข้มข้นของเจลแบบซ้อนกับเจลที่ละลายซึ่งส่งผลต่อโปรตีนในตัวอย่าง เนื่องจากความเข้มข้นของพอลิอะคริลาไมด์ในเจลแบบเรียงซ้อนต่ำ ขนาดรูพรุนจึงสูงขึ้น สิ่งนี้ยังช่วยเพิ่มการแยกจากกัน
เจลแบบเรียงซ้อนเป็นเจลโพลีอะคริลาไมด์แบบหลวมที่มีรูพรุนขนาดใหญ่ประมาณ 7% พอลิอะคริลาไมด์ รูขุมขนเหล่านี้ไม่ได้ทำหน้าที่เป็นอุปสรรคสำคัญสำหรับโมเลกุลโปรตีนขนาดใหญ่ ดังนั้นเจลนี้จึงมีผลเล็กน้อยต่อการเคลื่อนที่ของโปรตีนเหล่านั้น สิ่งนี้ทำให้การแยกตัวตามการเคลื่อนไหวและขนาดของโปรตีนโดยเน้นให้พวกมันอยู่ระหว่างเจลสองชนิด
รูปที่ 01: SDS-PAGE Acrylamide Gel
pH ของเจลสแต็คคือ 6.8. ค่า pH ของมันคือกรดมากกว่าเจลที่มี pH 2 หน่วย ค่า pH นี้บ่งบอกถึงความแรงของไอออนิกที่ต่ำกว่า ดังนั้นจึงมีความต้านทานไฟฟ้าที่สูงขึ้น สิ่งนี้กระตุ้นการเคลื่อนไหวของโปรตีนมากกว่าอนุภาคที่มีประจุอื่น ๆ ที่มีอยู่ในเจล
เจลแยกคืออะไร
เจลสำหรับแยกหรือเจลสำหรับแก้ปัญหา SDS-PAGEtechnique คือเจลโพลีอะคริลาไมด์ที่มีความเข้มข้นสูงที่วางทับบนเจลที่มีความเข้มข้นต่ำ เจลแยกสารประกอบด้วยโพลีอะคริลาไมด์จำนวนมาก (10%) ค่า pH ของเจลนี้จะคงอยู่ที่ pH=8.8 ซึ่งเป็นระดับ pH ที่สูงกว่าของเจลแบบเรียงซ้อน
รูปที่ 02: เครื่องมือเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส
เมื่อโมเลกุลโปรตีนไปถึงเจลแยก การเคลื่อนตัวของโมเลกุลเหล่านั้นจะช้าลงเพราะเจลแยกเป็นเจลความเข้มข้นสูงที่มีรูพรุนขนาดเล็กที่สามารถทำหน้าที่เป็นอุปสรรคสำคัญสำหรับการเคลื่อนที่ของโมเลกุลโปรตีน. การชะลอตัวนี้ทำให้โปรตีนอื่นๆ เคลื่อนตัวช้าๆ ตามทัน ส่งผลให้เกิดแถบที่แคบและเข้มข้นระหว่างเจลทั้งสอง
ความสัมพันธ์ระหว่างเจลซ้อนกับเจลแยกคืออะไร
ทั้ง Stacking Gel และ Separating Gel ถูกใช้ในเครื่องเดียวกัน
เจลซ้อนกับเจลแยกต่างกันอย่างไร
เจลซ้อนกับเจลแยก |
|
| เจลเรียงซ้อนเป็นเจลโพลีอะคริลาไมด์เข้มข้นต่ำที่วางทับเจลละลายน้ำที่มีความเข้มข้นมากกว่า (เจลแยก) ในเทคนิค SDS-PAGE | เจลสำหรับแยกหรือเจลละลายของเทคนิค SDS-PAGE คือเจลโพลีอะคริลาไมด์ที่มีความเข้มข้นสูงซึ่งวางทับบนเจลที่มีความเข้มข้นต่ำแบบเรียงซ้อน |
| ตำแหน่ง | |
| วางเจลทับลงบนเจลละลาย (แยก) | เจลแยกวางที่ด้านล่างของภาชนะที่ใช้สำหรับเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส |
| สมาธิ | |
| เจลซ้อนความเข้มข้นสูง | เจลแยกความเข้มข้นต่ำ |
| เนื้อหาโพลีอะคริลาไมด์ | |
| เจลสำหรับวางซ้อนประกอบด้วยโพลิอะคริลาไมด์ประมาณ 7% | เจลแยกมีพอลิอะคริลาไมด์ประมาณ 10% |
| pH | |
| pH ของเจลซ้อนคือ 6.8. | pH ของเจลแยกคือ 8.8. |
| ขนาดรูขุมขน | |
| เจลเรียงซ้อนมีรูพรุนขนาดใหญ่ | เจลแยกมีรูพรุนขนาดเล็ก |
| ความละเอียด | |
| เจลซ้อนให้ความละเอียดดีขึ้น | เจลแยกให้ความละเอียดไม่ดี |
สรุป – เจลซ้อน vs เจลแยก
เจลเรียงซ้อนและเจลแยกเป็นเจลโพลีอะคริลาไมด์สองประเภทที่ใช้แยกโมเลกุลโปรตีนได้ดีขึ้นในตัวอย่างที่กำหนดให้ความแตกต่างระหว่างเจลแบบเรียงซ้อนและเจลสำหรับแยกคือ pH ของเจลแบบเรียงซ้อนคือ 6.8 ในขณะที่ค่า pH ของเจลสำหรับแยกคือ 8.8