ความแตกต่างที่สำคัญ – คราบแกรม vs วัฒนธรรม
แกรมสเตนเป็นเทคนิคการย้อมสีซึ่งดำเนินการเพื่อแยกแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่มตามความหนาของชั้นเปปติโดไกลแคนในผนังเซลล์ของพวกมัน การเพาะเลี้ยงเป็นวิธีการปลูกและบำรุงรักษาจุลินทรีย์ภายใต้สภาวะของห้องปฏิบัติการเพื่อการวิเคราะห์ที่แตกต่างกัน ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างคราบกรัมและการเพาะเลี้ยงคือหน้าที่ แกรมสเตรน เทคนิคการย้อมสีแบคทีเรีย โดยที่การเพาะเลี้ยงเป็นวิธีการเจริญเติบโตและการบำรุงรักษาจุลินทรีย์
แกรมสเตนคืออะไร
แกรมสเตนเป็นเทคนิคการย้อมสีที่แตกต่างกันที่สำคัญซึ่งใช้สำหรับการระบุแบคทีเรียในจุลชีววิทยาเทคนิคนี้แนะนำโดย Hans Christian Gram นักแบคทีเรียวิทยาชาวเดนมาร์กในปี พ.ศ. 2427 การย้อมสีแกรมแบ่งประเภทแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่มใหญ่ๆ ได้แก่ กรัมบวกและกรัมลบ สิ่งเหล่านี้มีความสำคัญมากในการจำแนกและจำแนกแบคทีเรีย การย้อมแกรมเป็นขั้นตอนเริ่มต้นสำหรับการกำหนดลักษณะของแบคทีเรีย
แบคทีเรียถูกจัดกลุ่มตามความแตกต่างในผนังเซลล์ของพวกมัน แบคทีเรียแกรมบวกมีชั้น peptidoglycan หนาในผนังเซลล์ในขณะที่แบคทีเรียแกรมลบมีชั้น peptidoglycan บาง ๆ ในผนังเซลล์ดังแสดงในรูปที่ 01 ผลลัพธ์ของการย้อมสีกรัมจะขึ้นอยู่กับความแตกต่างของความหนาในชั้น peptidoglycan ของ ผนังเซลล์
รูปที่ 1: แบคทีเรียแกรมบวกและแบคทีเรียแกรมลบ
การย้อมสีกรัมดำเนินการโดยใช้รีเอเจนต์สี่แบบ ได้แก่; คราบปฐมภูมิ, มอร์แดนท์, สารลดสีและคราบเคาน์เตอร์ คริสตัลไวโอเลตและซาฟรานินทำหน้าที่เป็นคราบหลักและคราบเคาน์เตอร์ ตามลำดับ ในขณะที่ไอโอดีนกรัมและแอลกอฮอล์ 95% ทำหน้าที่เป็นสารกันบูดและสารขจัดสีตามลำดับ
ขั้นตอนพื้นฐานของคราบกรัม
- เตรียมป้ายแบคทีเรียบนสไลด์แก้วที่สะอาด ตรึงความร้อนและเย็น
- เปื้อนด้วยคริสตัลไวโอเล็ตเป็นเวลา 1 – 2 นาที
- ล้างคราบด้วยน้ำประปาที่ไหลช้าเพื่อขจัดคราบส่วนเกิน
- ฉีดไอโอดีนกรัมเป็นเวลา 1 นาที
- ล้างคราบด้วยน้ำก๊อกที่ไหลช้าๆ
- ละเลงด้วยแอลกอฮอล์ 95% เป็นเวลา 2 – 5 วินาที แล้วล้างออกด้วยน้ำประปาที่ไหลช้าๆ
- ป้ายหน้าเปื้อนซาฟรานิน 1 นาที
- ล้างคราบด้วยน้ำประปาที่ไหลช้าๆ ตากให้แห้งและสังเกตใต้กล้องจุลทรรศน์
ที่จุดสิ้นสุดของคราบแกรม แบคทีเรียแกรมลบจะเป็นสีชมพู ในขณะที่คราบกรัมบวกจะพบเป็นสีม่วง ดังแสดงในรูปที่ 02 ผลลัพธ์ของคราบกรัมจะขึ้นอยู่กับความหนา ของชั้น peptidoglycan ในผนังเซลล์ ในขั้นตอนการกำจัดสี คราบปฐมภูมิและสารกันบูดจะถูกลบออกจากแบคทีเรียแกรมลบอย่างง่ายดาย และไม่มีสีเนื่องจากมีชั้น peptidoglycan บางๆ คราบหลักยังคงอยู่ในแบคทีเรียแกรมบวกเนื่องจากมีชั้นเปปติโดไกลแคนหนา คราบที่เคาน์เตอร์จะไม่ได้ผลสำหรับแบคทีเรียแกรมบวกเนื่องจากการคงอยู่ของคราบหลัก ดังนั้นจำนวนแบคทีเรียที่เป็นบวกจะมองเห็นได้ในสีย้อมปฐมภูมิ เช่น สีม่วง คราบที่เคาน์เตอร์จะเปื้อนแบคทีเรียแกรมลบและจะมองเห็นได้ในสีหยิบซึ่งเป็นสีซาฟรานิน ดังนั้นจึงง่ายที่จะจำแนกแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่มตามคราบแกรมและมีประโยชน์ในการแยกแยะและจำแนกแบคทีเรีย
รูปที่ 2: สายพันธุ์แกรม
วัฒนธรรมคืออะไร
การเพาะเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์เป็นวิธีการเพาะเลี้ยงและบำรุงรักษาจุลินทรีย์ภายใต้เงื่อนไขของห้องปฏิบัติการเพื่อวัตถุประสงค์ที่แตกต่างกัน วัฒนธรรมปลูกในอาหารที่เป็นของแข็ง กึ่งของแข็ง และของเหลวตามชนิดและวัตถุประสงค์ของการเพาะเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์ วัฒนธรรมได้รับสารอาหารที่จำเป็นและสภาวะการเจริญเติบโตที่จุลินทรีย์ต้องการ มีองค์ประกอบที่แตกต่างกันของอาหารเลี้ยงเชื้อ เช่น แหล่งพลังงาน แหล่งคาร์บอน แหล่งไนโตรเจน แร่ธาตุ ธาตุอาหารรอง น้ำ สารทำให้แข็งตัว ฯลฯ ควรปรับอุณหภูมิที่เหมาะสม ออกซิเจน และ pH ตามชนิดของจุลินทรีย์ที่ปลูก
จุลินทรีย์มีหลายประเภท ตัวอย่างเช่น การเพาะเลี้ยงแบบกลุ่ม, การเพาะแบบต่อเนื่อง, การเพาะแบบแทง, การเพาะแบบจานวุ้น, การเพาะแบบน้ำซุป เป็นต้นตามองค์ประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อ มีสื่อการเพาะเลี้ยงหลายประเภทที่เรียกว่า สื่อสังเคราะห์ สื่อกึ่งสังเคราะห์ และ สื่อธรรมชาติ การเพาะเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์ถูกเตรียมภายใต้สภาวะปลอดเชื้อภายในห้องพิเศษที่เรียกว่าการไหลของอากาศแบบราบเรียบ สื่อสำหรับปลูกและเครื่องแก้วจะผ่านการฆ่าเชื้อก่อนการเพาะเชื้อจุลินทรีย์ที่ต้องการ ภายใต้สภาวะปลอดเชื้อที่เหมาะสม จุลินทรีย์เป้าหมายจะถูกถ่ายโอนไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วและฟักที่อุณหภูมิที่เหมาะสม ภายในสื่อจุลินทรีย์จะเติบโตและเพิ่มจำนวนโดยใช้สารอาหารที่ให้มา
รูปที่ 3: การเพาะเชื้อแบคทีเรียบนจาน
Gram Stain กับ Culture ต่างกันอย่างไร
แกรมสเตน vs วัฒนธรรม |
|
| สายพันธุ์แกรมเป็นเทคนิคการย้อมแบบดิฟเฟอเรนเชียลที่ใช้สำหรับการแยกแยะและจำแนกแบคทีเรีย | การเพาะเชื้อจุลินทรีย์เป็นวิธีการปลูกจุลินทรีย์ในห้องปฏิบัติการ |
| ส่วนประกอบ | |
| นี่ใช้รีเอเจนต์ต่างกันรวมทั้งคราบสองอัน | สิ่งนี้ใช้สื่อเพาะเลี้ยงที่แตกต่างกัน เช่น ของแข็ง กึ่งของแข็ง และของเหลวที่ประกอบด้วยสารอาหารและเงื่อนไขที่จำเป็นอื่นๆ |
| ฟังก์ชั่นพื้นฐาน | |
| ช่วยให้จัดกลุ่มแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่ม: กรัมลบและกรัมบวก | ทำให้จุลินทรีย์สามารถขยายพันธุ์ได้ตามวัตถุประสงค์ที่แตกต่างกัน |
| ฐาน | |
| ผลคราบแกรมขึ้นอยู่กับความแตกต่างของชั้น peptidoglycan ของผนังเซลล์ | จุลินทรีย์จะเติบโตและทวีคูณภายในสื่อวัฒนธรรม |
| ผลลัพธ์ | |
| กรัมแบคทีเรียลบมีสีชมพูและกรัมบวกมองเห็นเป็นสีม่วง | บนจานสามารถเห็นอาณานิคมของจุลินทรีย์ได้ สำหรับสื่อที่เป็นของเหลว จุลินทรีย์จะถูกระงับ |
สรุป – คราบแกรม vs วัฒนธรรม
การเพาะเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์ได้รับการจัดเตรียมและบำรุงรักษาภายใต้สภาวะของห้องปฏิบัติการเพื่อวัตถุประสงค์ที่แตกต่างกัน เช่น การเก็บรักษา การทดสอบ การทำให้บริสุทธิ์ด้วยสารเคมี เป็นต้น การย้อมแกรมเป็นขั้นตอนการย้อมสีที่แยกแบคทีเรียออกเป็นสองกลุ่มหลักที่เรียกว่ากรัมลบแบคทีเรียและกรัมบวกแบคทีเรียดังนั้นความแตกต่างระหว่างคราบกรัมกับการเพาะเชื้อคือ คราบกรัมเป็นเทคนิคการย้อมสีแบคทีเรีย ในขณะที่การเพาะเลี้ยงเป็นวิธีการเจริญเติบโตและบำรุงรักษาจุลินทรีย์ในห้องปฏิบัติการ