ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง crRNA tracrRNA และ gRNA คือ crRNA เป็นหนึ่งในสองประเภทของ RNA ของ CRISPR ซึ่งประกอบกับลำดับ DNA เป้าหมาย ในขณะที่ tracrRNA เป็น RNA ชนิดที่สองของ CRISPR ซึ่งทำหน้าที่เป็น โครงยึดสำหรับ Cas nuclease และ gRNA เป็นหนึ่งในสององค์ประกอบหลักของระบบ CRISPR-Cas9 ของแบคทีเรียและอาร์เคีย ซึ่งจดจำ DNA เป้าหมายและนำทางโปรตีนของ Cas เพื่อสร้างการแบ่งสายคู่ใน DNA เป้าหมาย
CRISPR ย่อมาจาก palindromic สั้น ๆ สลับกันแบบคลัสเตอร์ปกติ เป็นหนึ่งในระบบภูมิคุ้มกันในแบคทีเรียและอาร์เคีย แบคทีเรียและอาร์เคียใช้ระบบนี้เพื่อป้องกันตนเองจากเชื้อโรคไวรัสมันเป็นหนึ่งในกลไกที่น่าทึ่งที่สุดที่เกี่ยวข้องกับการดัดแปลงพันธุกรรมที่ประสบความสำเร็จ กลไกนี้ (CRISPR-Cas9) ใช้เป็นเครื่องมือแก้ไขยีนใหม่ในเทคโนโลยีชีวภาพ ได้นำความก้าวหน้าใหม่ๆ มาสู่เทคโนโลยีชีวภาพ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในด้านพันธุวิศวกรรม
ระบบ CRISPR-Cas9 มีสององค์ประกอบหลัก พวกมันคือ RNA ไกด์ (gRNA) และนิวคลีเอสที่เกี่ยวข้องกับ CRISPR (Cas) Guide RNA เป็นลำดับ RNA เฉพาะที่นำทางโปรตีน Cas เพื่อแยก DNA เป้าหมาย Guide RNA ประกอบด้วย RNA สองประเภท พวกมันคือ Crispr RNA (crRNA) และ tracrRNA นิวคลีเอสที่เกี่ยวข้องกับ CRISPR (Cas) เป็นเอ็นโดนิวคลีเอสที่ไม่จำเพาะซึ่งทำให้เกิดการแตกของสองสายใน DNA เป้าหมาย ด้วยการทำให้ DNA เป้าหมายแตกออกเป็นสองเส้น แบคทีเรียและอาร์เคียจะควบคุมกลไกการซ่อมแซมภายในตัวเพื่อยับยั้ง DNA ของไวรัส
crRNA คืออะไร
crRNA หรือ Crispr RNA เป็นหนึ่งในสองประเภทของแนวทาง RNA โครงสร้างเป็นลำดับนิวคลีโอไทด์ 17-20 คุณลักษณะที่มีค่าที่สุดของ crRNA คือเป็นส่วนเสริมของ DNA เป้าหมายดังนั้น crRNA จึงจับคู่กับลำดับ DNA ของไวรัส ความจำเพาะของระบบ CRISPR-Cas 9 ขึ้นอยู่กับ crRNA ในแบคทีเรีย crRNA มีอยู่รวมกับลำดับ tracrRNA ซึ่งเป็น CRISPR RNA ชนิดที่สอง การผลิต crRNA ถูกกระตุ้นโดยการสัมผัสแบคทีเรียกับไวรัสอีกครั้ง เมื่อถูกเปิดเผย การถอดรหัสของยีนที่มีการเข้ารหัสสำหรับ crRNA จะเกิดขึ้น จากนั้นกลไกการป้องกันก็จะเริ่มต้านไวรัส
รูปที่ 01: ระบบ CRISPR-Cas9
tracrRNA คืออะไร
Trans-activating crRNA หรือ tracrRNA เป็นส่วนที่สองของ guideRNA หรือ CRISPR RNA มันออกเสียงว่า RNA ตัวติดตาม tracrRNA ทำหน้าที่เป็นโครงยึดสำหรับโปรตีน endonuclease Cas 9 กล่าวอีกนัยหนึ่ง tracrRNA ทำงานเป็นที่จับเพื่อนำทาง Cas9 ไปสู่ DNA เป้าหมายโครงสร้าง TracrRNA มี 42 นิวคลีโอไทด์ มันมีอยู่รวมกับ crRNA
gRNA คืออะไร
Guide RNA หรือ gRNA เป็นหนึ่งในสององค์ประกอบหลักของระบบภูมิคุ้มกัน CRISPR-Cas9 เป็นลำดับ RNA เฉพาะที่ประกอบด้วยสององค์ประกอบ: crRNA และ tracrRNA gRNA รับรู้ DNA เป้าหมายและชี้นำโปรตีน Cas ให้แตกสองเส้นใน DNA เป้าหมาย เพื่อที่จะทำอย่างนั้น crRNA ประกอบด้วยลำดับเสริมของ DNA เป้าหมายในขณะที่ tracrRNA นำทางโปรตีน Cas ที่ทำงานเป็นที่จับ
รูปที่ 02: gRNA
การออกแบบ gRNA ที่ถูกต้องเป็นขั้นตอนที่สำคัญในเครื่องมือแก้ไขยีน CRISPR-Cas9 ดังนั้นความสำเร็จและประสิทธิภาพการแก้ไขของระบบ CRISPR จึงขึ้นอยู่กับลำดับที่ถูกต้องของ gRNA gRNA สามารถแสดงออกได้ในเซลล์จากพลาสมิดที่ทรานส์เฟกเมื่อมีการนำพลาสมิดที่โคลนเข้าไปในเซลล์ เซลล์เจ้าบ้านจะสร้าง gRNA gRNA ที่สร้างบ่อยที่สุดประกอบด้วยคู่เบส 100 คู่
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง crRNA tracrRNA และ gRNA คืออะไร
- crRNA, tracrRNA และ gRNA คือลำดับ RNA ที่พบในแบคทีเรียและอาร์เคีย
- ทั้งหมดอยู่ในระบบ CRISPR
- gRNA ทำจาก crRNA และ tracrRNA
- พวกเขามีส่วนร่วมในการจดจำ DNA ของแบคทีเรียและชี้นำเอ็นโดนิวคลีเอสไปสู่ DNA เป้าหมาย
- ด้วยเหตุนี้ RNA ทั้งสามประเภทจึงมีส่วนเกี่ยวข้องในการกำกับนิวคลีเอสของ Cas9 ให้แตกสองเส้นในการบุกรุกสารพันธุกรรมต่างประเทศ
- ความสำเร็จของการทดลอง CRISPR ขึ้นอยู่กับ RNA ทั้งสามประเภท
ความแตกต่างระหว่าง crRNA tracrRNA และ gRNA คืออะไร
crRNA เป็นส่วนหนึ่งของ gRNA ของ CRISPR ที่ประกอบกับ DNA เป้าหมาย ในขณะที่ tracrRNA เป็นส่วนที่สองของ gRNA ซึ่งทำหน้าที่เป็นโครงยึดสำหรับ Cas nucleasegRNA คือการรวมกันของ crRNA และ tracrRNA และเป็นหนึ่งในสององค์ประกอบของระบบ CRISPR-Cas9 ซึ่งจดจำ DNA เป้าหมายและนำทางนิวคลีเอสเพื่อสร้างการแบ่งสายคู่ใน DNA เป้าหมาย นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง crRNA tracrRNA และ gRNA
ตารางต่อไปนี้สรุปความแตกต่างระหว่าง crRNA tracrRNA และ gRNA
สรุป – crRNA กับ tracrRNA กับ gRNA
CRISPR-Cas9 system คือระบบภูมิคุ้มกันของแบคทีเรียและอาร์เคีย ระบบนี้ใช้เป็นเครื่องมือแก้ไขยีนในเทคโนโลยีชีวภาพ CRISPR ประกอบด้วย RNA สองประเภท ได้แก่ CRISPR RNA (crRNA) และ transactivating CRISPR RNA (tracrRNA) เรียกรวมกันว่า guideRNA หรือ gRNA RNA นี้รับรู้ลำดับเป้าหมายของเชื้อโรคที่บุกรุกและนำทางเอนโดนิวคลีเอสเพื่อสร้างการแยกสายคู่ใน DNA เป้าหมาย เมื่อเกิดการแตกสองเส้นในสารพันธุกรรมต่างประเทศ กลไกการซ่อมแซมภายใน (การรวมปลายที่ไม่เป็นเนื้อเดียวกัน; NHEJ) จะยับยั้ง DNA ต่างประเทศโดยการทำให้เกิดการกลายพันธุ์ดังนั้น นี่จึงสรุปความแตกต่างระหว่าง crRNA tracrRNA และ gRNA
