ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการกรองแบบเจลและโครมาโตกราฟีแบบสัมพันธ์กันคือโครมาโตกราฟีแบบกรองเจลขึ้นอยู่กับความแตกต่างในน้ำหนักโมเลกุลหรือขนาดของตัวอย่างที่วิเคราะห์ ในขณะที่โครมาโตกราฟีแบบสัมพรรคภาพขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ของสารที่วิเคราะห์กับลิแกนด์ที่ถูกตรึง
โครมาโตกราฟีในเคมีวิเคราะห์หมายถึงกระบวนการแยกส่วนประกอบในส่วนผสมโดยใช้เทคนิคต่างๆ โครมาโตกราฟีเป็นชื่อรวมที่แสดงถึงวิธีการแยกต่างๆ จำนวนมาก
เจลกรองโครมาโตกราฟีคืออะไร
เจลโครมาโตกราฟีการกรองเป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่การแยกส่วนประกอบขึ้นอยู่กับความแตกต่างของน้ำหนักโมเลกุลหรือขนาด เทคนิคนี้เรียกอีกอย่างว่าโครมาโตกราฟีแบบแยกขนาดหรือโครมาโตกราฟีแบบตะแกรงโมเลกุล เทคนิคการแยกในกระบวนการนี้ขึ้นอยู่กับความสามารถที่แตกต่างกันของโมเลกุลในตัวอย่างที่จะเข้าไปในรูพรุนของสื่อกรองเจล
ในเทคนิคการกรองแบบเจล เฟสแบบอยู่กับที่ประกอบด้วยเม็ดบีดของวัสดุคล้ายฟองน้ำที่ให้ความชุ่มชื้นซึ่งมีรูพรุนขนาดโมเลกุลที่มีช่วงขนาดที่แคบ หากเราผ่านสารละลายที่เป็นน้ำซึ่งประกอบด้วยโมเลกุลขนาดต่างๆ ผ่านคอลัมน์ที่มี "ตะแกรงโมเลกุล" เหล่านี้ โมเลกุลที่มีขนาดใหญ่กว่ารูพรุนของสื่อกรองจะเคลื่อนที่อย่างรวดเร็วผ่านคอลัมน์ ในทางตรงกันข้าม โมเลกุลที่เล็กกว่าจะเข้าสู่รูพรุนของเจลและมีแนวโน้มที่จะเคลื่อนตัวช้าๆ ผ่านคอลัมน์ โมเลกุลจะชะออกจากคอลัมน์โดยเรียงตามขนาดโมเลกุลที่ลดลงในที่นี้ ขีดจำกัดของเจลคือมวลโมเลกุลของโมเลกุลที่เล็กที่สุดที่ไม่สามารถเจาะรูขุมขนของเจลที่กำหนดได้
เทคนิคการกรองเจลมีหลายประเภท เช่น วิธีการกรองเจลทางอ้อม การกรองเจลในสภาวะคงที่ การฟอกไตด้วยเจลบีด ฯลฯ โครมาโตกราฟีเจลกรองทางอ้อมมีประโยชน์ในการกำหนดฮอร์โมนไทรอยด์ฟรี Steady-state gel filtration chromatography เป็นเทคนิคทางอ้อมที่มีประโยชน์ส่วนใหญ่ในการวัดค่าของสเตียรอยด์ฟรี เช่น คอร์ติซอล เทสโทสเตอโรน ฯลฯ ในทางกลับกัน การล้างไตด้วยเจลบีดเป็นการดัดแปลงการกรองแบบเจลในสภาวะคงที่ซึ่งค่อนข้างง่ายกว่า
Affinity Chromatography คืออะไร
อะฟฟินิตี้โครมาโตกราฟีเป็นเทคนิคการวิเคราะห์และวิธีการแยกที่ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาการผูกมัดเฉพาะระหว่างลิแกนด์ที่ถูกตรึงและคู่ที่มีผลผูกพันตัวอย่างบางส่วนรวมถึงการจับแอนติบอดี-แอนติเจน, การจับด้วยเอนไซม์-สารตั้งต้น และการจับด้วยเอนไซม์-ตัวยับยั้ง ดังนั้นเทคนิคนี้จึงมีการใช้งานที่สำคัญหลายประการในการทำให้บริสุทธิ์ด้วยกรดนิวคลีอิก การทำให้โปรตีนบริสุทธิ์จากสารสกัดจากเซลล์ และการทำให้บริสุทธิ์จากเลือด
ในเทคนิคนี้ คุณสมบัติที่สำคัญที่สุดคือการตรึงแกนด์ เราสามารถใช้วัสดุต่างๆ เช่น อะคริเลตและซิลิกาเจลสำหรับสิ่งนี้ สิ่งสำคัญคือต้องป้องกันการแทรกสอด steric ของโมเลกุลเป้าหมายกับแกนด์ ยิ่งกว่านั้นสารยับยั้งยังติดอยู่กับเฟสของแข็ง เราเรียกตัวยับยั้งนี้ว่าตัวเว้นวรรค คลาสสิก สเปเซอร์ประกอบด้วยโซ่ไฮโดรคาร์บอน
เฟสที่อยู่กับที่ของโครมาโตกราฟีแบบสัมพันธ์กันประกอบด้วยแกนกลาง ตัวเว้นระยะ และแกนด์บางครั้งก็มีโลหะไอออนที่ประกอบกับลิแกนด์ด้วย เฟสของแข็งที่ต้องการมากที่สุดสำหรับขั้นตอนที่อยู่นิ่งในเทคนิคนี้คือเจลอากาโรส เนื่องจากสามารถจ่ายได้ง่ายเพื่อเติมและบรรจุคอลัมน์ด้วยเตียงเรซินทุกขนาด และมีขนาดใหญ่พอที่ชีวโมเลกุลจะไหลเข้าและผ่านลูกปัดได้อย่างอิสระ ลิแกนด์สามารถยึดติดกับบีดโพลีเมอร์ได้หลายวิธี สารประกอบตัวเว้นวรรคที่พบบ่อยที่สุดคือไซยาโนเจนโบรไมด์ อีพอกไซด์ อีพอกไซด์ที่มีกรด C6 และไดอะมิน ในทางกลับกัน ลิแกนด์ที่เราสามารถใช้ได้นั้นแตกต่างกันไปตามเป้าหมาย เช่น แอนติบอดี-แอนติเจน, ไอออน-ฟอสโฟโปรตีนของเหล็กหรืออะลูมิเนียม, อะวิดิน-ไบโอติน, กลูตาไธโอน-GST, คีเลเตอร์-โปรตีนที่ติดแท็กของเขา ฯลฯ
ความแตกต่างระหว่างการกรองแบบเจลและโครมาโตกราฟีแบบสัมพันธ์กันคืออะไร
โครมาโตกราฟีเป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่สำคัญ โครมาโตกราฟีแบบกรองเจลและโครมาโตกราฟีแบบอัฟฟินิตี้เป็นรูปแบบที่สำคัญสองประการของโครมาโตกราฟี ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการกรองแบบเจลและโครมาโตกราฟีแบบสัมพรรคภาพคือโครมาโตกราฟีแบบกรองเจลขึ้นอยู่กับความแตกต่างในน้ำหนักโมเลกุลหรือขนาดของตัวอย่างที่วิเคราะห์ ในขณะที่โครมาโตกราฟีแบบสัมพรรคภาพขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ของสารที่วิเคราะห์กับลิแกนด์ที่ถูกตรึง
สรุป – เจลกรองเทียบกับโครมาโตกราฟีสัมพันธ์
เทคนิคโครมาโตกราฟีมีหลายประเภทตามการใช้งานและลักษณะของตัวอย่างที่วิเคราะห์ การกรองด้วยเจลและโครมาโตกราฟีแบบสัมพันธ์กันเป็นเทคนิคสองประเภทดังกล่าว ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการกรองเจลและโครมาโตกราฟีแบบสัมพันธ์กันคือเจลกรองโครมาโตกราฟีขึ้นอยู่กับความแตกต่างในน้ำหนักโมเลกุลหรือขนาดของตัวอย่างที่วิเคราะห์ ในขณะที่โครมาโตกราฟีแบบสัมพรรคภาพขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ของสารที่วิเคราะห์กับลิแกนด์ที่ถูกตรึง