ความแตกต่างที่สำคัญ – T4 กับ T7 DNA Ligase
DNA ligase เป็นเอนไซม์สำคัญที่ใช้ในเทคนิคอณูชีววิทยา มันทำหน้าที่เป็นกาวโมเลกุลเพื่อรวมนิวคลีโอไทด์โดยสร้างพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ระหว่างนิวคลีโอไทด์ พันธะฟอสโฟไดเอสเทอร์จะเกิดขึ้นระหว่างปลายไฮดรอกซิล 3’ ของมอยอิตีน้ำตาลและหมู่ฟอสเฟตปลาย 5’ DNA ligase มีความสำคัญในกระบวนการจำลองแบบเพื่อรวมชิ้นส่วนของ Okazaki ของสายที่ปกคลุมด้วยวัตถุฉนวนและระหว่างกลไกการซ่อมแซม DNA และการทดลองโคลนนิ่งในหลอดทดลองเพื่อรวมยีนที่ต้องการที่น่าสนใจกับจีโนมเวกเตอร์ มีสอง DNA ligases หลักที่ใช้โดยนักชีววิทยาระดับโมเลกุลในปัจจุบัน: T4 และ T7 DNA ligasesT4 DNA ligase เป็นหนึ่งในเอนไซม์แรกที่แยกได้จาก T4 bacteriophage T7 DNA ligase ซึ่งเป็นโปรตีนที่มีขนาดเล็กกว่า เป็นเอนไซม์ที่แยกได้จาก T7 bacteriophage นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง T4 และ T7 DNA ligase
การกระทำของ DNA Ligase คืออะไร
DNA ligation เกิดขึ้นในปฏิกิริยาสามขั้นตอน ขั้นตอนแรกคือการโจมตีแบบนิวคลีโอฟิลิกบนอัลฟา-ฟอสฟอรัสของ ATP ที่สร้างเอนไซม์โควาเลนต์-อะดีนิเลตขั้นกลาง ซึ่ง AMP เชื่อมโยงกับไนโตรเจนในสายโซ่ด้านข้างของไลซีน ในขั้นตอนที่สอง การโจมตีด้วยนิวคลีโอฟิลิกเกิดขึ้นที่ฟอสฟอรัสของเอ็นไซม์-อะดีนิเลตโดยสารตั้งต้นของ DNA ที่สิ้นสุดด้วยฟอสเฟต 5’-ฟอสเฟต ปล่อยไลซีนและสร้าง DNA-adenylate ในขั้นตอนสุดท้าย DNA-adenylate ถูกโจมตีโดย 3’- OH ของสาย DNA อื่น โดยปล่อย AMP และเข้าร่วมกับโพลีนิวคลีโอไทด์
T4 DNA Ligase คืออะไร
T4 Ligase เป็น ligase ตัวแรกที่ถูกแยกและระบุโดย Meselson, Weigle และ Kellenberger และเป็น ligase เชิงพาณิชย์ตัวแรกที่ผลิตขึ้นT4 DNA ligase เป็นเอนไซม์ที่ขึ้นกับ ATP ซึ่งกระตุ้นการสร้างพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ เป็นสายโซ่โพลีเปปไทด์เดี่ยวที่มีกรดอะมิโนตกค้าง 487 ตัว และมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 77 kDa pH ที่เหมาะสมสำหรับกิจกรรมอยู่ในช่วง 7.5 – 8
รูปที่ 01: T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase ตามชื่อของมัน มีอยู่ในแบคทีเรีย T4 และถูกแยกออกเมื่อ phage ผลิตเอนไซม์เมื่อติดเชื้อ E. coli เอ็นไซม์ ligates ดูเพล็กซ์ DNA แบบสองเกลียวที่มีปลายทู่และชิ้นส่วนที่จะผูกควรอยู่ใกล้กัน
T7 DNA Ligase คืออะไร
T7 ligase เป็นโปรตีน 41 kDa ที่ผลิตโดย T7 Bacteriophage และแยกได้จากเซลล์ E. coli ที่ติดเชื้อ หน้าที่หลักของ T7 ligase คือ ligate DNA duplexes ผ่านการเชื่อมโยง phosphodiester และเข้าร่วมชิ้นส่วน DNA ในบริเวณใกล้เคียงระหว่างการทดลองโคลนค่า pH ที่เหมาะสมสำหรับ T7 DNA ligase อยู่ในช่วง 7.0 – 7.2 T7 ligase ขึ้นอยู่กับ ATP T7 DNA ligases ยังสามารถหลอม DNA และ RNA hybrids ทำให้เกิดรูปแบบที่ผิดปกติในระหว่างการถอดรหัส อย่างไรก็ตาม ปรากฏการณ์นี้ยังอยู่ภายใต้การวิจัยโดยการศึกษาในหลอดทดลอง
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง T4 และ T7 DNA Ligase คืออะไร
- T4 และ T7 DNA Ligase มีส่วนร่วมในปฏิกิริยา ligation โดยการหลอมดูเพล็กซ์ของ DNA ผ่านการสร้างพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ระหว่างปลาย OH 3’ และปลายฟอสเฟต 5’ ของชิ้นส่วนดีเอ็นเอ
- เอ็นไซม์ทั้งสอง ligate blunt end DNA duplexes ซึ่งอยู่ใกล้กัน
- เอนไซม์ทั้งสองขึ้นอยู่กับ ATP
- เอนไซม์เหล่านี้แยกได้จากเซลล์ E. coli ด้วยแบคทีเรียเฉพาะ
- การใช้งานของเอนไซม์ทั้งสองได้แก่:
- การโคลนโมเลกุล – เพื่อเชื่อมโยงยีนที่น่าสนใจกับเวกเตอร์
- ซ่อมแซม DNA – เพื่อซ่อมแซมซอกเกลียวคู่
- การจำลองดีเอ็นเอในหลอดทดลอง
- ปฏิกิริยาลูกโซ่ลิกาเซ
ความแตกต่างระหว่าง T4 และ T7 DNA Ligase คืออะไร
T4 กับ T7 DNA Ligase |
|
| T4 DNA Ligase ประเภท DNA ligase ที่แยกได้จากแบคทีเรีย T4 และเกี่ยวข้องกับการแยกส่วน DNA ที่อยู่ติดกันผ่านการสร้างพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ | T7 DNA Ligase ประเภท DNA ligase ที่แยกได้จากแบคทีเรีย T7 และเกี่ยวข้องกับการแยกส่วน DNA ที่อยู่ติดกันผ่านการสร้างพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ |
| ขนาดโปรตีน | |
| ขนาดของ T4 DNA ligase คือ 77 kDa – ใหญ่กว่าเมื่อเปรียบเทียบกับ T7 DNA ligase | ขนาด T7 DNA ligase คือ 41 kDa. |
| pH ที่เหมาะสม | |
| pH range ซึ่งใช้งานได้ T4 DNA ligase คือ 7.5 – 8.0. | pH range ซึ่งใช้งานได้ T7 DNA ligase คือ 7.0 – 7.2. |
สรุป – T4 กับ T7 DNA Ligase
DNA ligases เป็นเอ็นไซม์ที่สำคัญที่เกี่ยวข้องกับการโคลนโมเลกุลเพื่อผลิตโมเลกุลดีเอ็นเอลูกผสมที่มียีนที่น่าสนใจ ปฏิกิริยา Ligation เป็นปฏิกิริยาที่ใช้พลังงานและมีการศึกษาวิจัยใหม่ที่กำลังดำเนินการอยู่เพื่อปรับปรุงความแม่นยำผ่านการปรับ ligases ที่มีอยู่ T4 และ T7 DNA ligases เป็นเอนไซม์ DNA ligase ที่สำคัญสองประเภทที่ใช้ในเทคนิคทางอณูชีววิทยา T7 DNA ligase ยังเป็นผลจากการวิจัยซึ่งอิงกับ ligase หลักที่แยกได้จาก E. coli ที่ติดเชื้อ T4 T7 แสดงให้เห็นประสิทธิภาพและความถูกต้องมากขึ้นในการปฏิบัติหน้าที่ เนื่องจากมีขนาดเล็กกว่า นี่คือความแตกต่างระหว่าง T4 และ T7 ligase
ดาวน์โหลดเวอร์ชัน PDF ของ T4 กับ T7 DNA Ligase
คุณสามารถดาวน์โหลดไฟล์ PDF ของบทความนี้และใช้เพื่อวัตถุประสงค์ออฟไลน์ตามหมายเหตุอ้างอิง โปรดดาวน์โหลดไฟล์ PDF ที่นี่ ความแตกต่างระหว่าง T4 และ T7 Ligase
