ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างอิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรงและโดยอ้อมคืออิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรงใช้แอนติบอดีตัวเดียวที่ทำงานกับเป้าหมายที่สนใจ ในขณะที่อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางอ้อมใช้แอนติบอดีสองตัวเพื่อติดป้ายเป้าหมายที่สนใจ
อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์หรือการสร้างภาพเซลล์เป็นเทคนิคที่ใช้ในการติดฉลากแอนติเจนเป้าหมายเฉพาะด้วยฟลูออโรฟอร์ ที่นี่ ฟลูออโรฟอร์เป็นสารประกอบเคมีเรืองแสงที่สามารถเปล่งแสงอีกครั้งเมื่อถูกกระตุ้นด้วยแสง เมื่อฟลูออโรฟอร์จับกับแอนติเจนเป้าหมาย จะช่วยให้ตรวจจับโมเลกุลเป้าหมายในตัวอย่างได้ เพื่ออธิบายเพิ่มเติมเมื่อแอนติเจนจับกับแอนติบอดีจำเพาะ มันสามารถถูกคอนจูเกตกับฟลูออโรฟอร์ได้ดังนั้นจึงง่ายต่อการตรวจจับการมีอยู่ของแอนติเจนเป้าหมายในตัวอย่างเมื่อสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
นอกจากนี้ยังมีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์สองประเภท; อิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรงและโดยอ้อม ความแตกต่างระหว่างอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์โดยตรงและโดยอ้อมส่วนใหญ่อยู่ในจำนวนของแอนติบอดีที่ใช้และการคอนจูเกตของฟลูออโรฟอร์ กล่าวคือ ในอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์โดยตรง ฟลูออโรฟอร์จะคอนจูเกตโดยตรงกับแอนติบอดีปฐมภูมิ ในขณะที่อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ทางอ้อม ฟลูออโรฟอร์คอนจูเกตที่มีแอนติบอดีรอง
ภูมิคุ้มกันโดยตรงคืออะไร
ภูมิคุ้มกันบกพร่องใช้แอนติบอดีเพื่อตรวจหาแอนติเจนเป้าหมายที่เฉพาะเจาะจง อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์โดยตรงเป็นหนึ่งในสองประเภทของอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ ในอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์โดยตรง แอนติบอดีเดี่ยว (แอนติบอดีปฐมภูมิ) เกี่ยวข้องและฟลูออโรฟอร์จะคอนจูเกตโดยตรงกับแอนติบอดีปฐมภูมิ เมื่อจับแอนติบอดีกับแอนติเจนเป้าหมาย ฟลูออโรฟอร์จะปล่อยแสงเรืองแสงซึ่งสามารถตรวจพบได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
รูปที่ 01: อิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรง
อย่างไรก็ตาม อิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรงเป็นวิธีที่มีราคาแพง เนื่องจากแอนติบอดีคอนจูเกตปฐมภูมินั้นมีราคาแพงเมื่อเทียบกับแอนติบอดีทุติยภูมิ อย่างไรก็ตาม ไม่เกี่ยวข้องกับขั้นตอนเพิ่มเติม จึงเป็นเทคนิคที่สั้นกว่า นอกจากนี้ การผูกมัดแบบไม่จำเพาะจะลดลงในอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์โดยตรง ดังนั้น ปฏิกิริยาข้ามสปีชีส์จึงต่ำ แต่ในการตรวจจับ ความไวของอิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรงนั้นอ่อนแอเมื่อเปรียบเทียบกับอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางอ้อม
ภูมิคุ้มกันทางอ้อมคืออะไร
อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางอ้อมเป็นอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ประเภทที่สองที่เกี่ยวข้องกับแอนติบอดีสองประเภท เช่น แอนติบอดีปฐมภูมิและทุติยภูมิในการติดฉลากของแอนติเจนเป้าหมายในวิธีนี้ ฟลูออโรฟอร์คอนจูเกตกับแอนติบอดีทุติยภูมิ ดังนั้น เทคนิคนี้จึงมีขั้นตอนเพิ่มเติม
รูปที่ 02: อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์
อย่างไรก็ตาม วิธีนี้มีความไวสูง เนื่องจากฟลูออโรฟอร์หลายชนิดสามารถเชื่อมต่อกับแอนติบอดีทุติยภูมิและทำให้การตรวจจับง่ายขึ้น นอกจากนี้ อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางอ้อมยังมีราคาถูกกว่าเนื่องจากคอนจูเกตของแอนติบอดีทุติยภูมิมีราคาไม่แพงและง่ายกว่า เมื่อเทียบกับอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์โดยตรง สปีชีส์มีปฏิกิริยาข้ามสูงในวิธีทางอ้อม
ภูมิคุ้มกันทางตรงและทางอ้อมมีความคล้ายคลึงกันอย่างไร
- เป็นเทคนิค immunofluorescence สองประเภท
- แอนติบอดีปฐมภูมิและฟลูออโรฟอร์เกี่ยวข้องกับทั้งสองวิธี
- ปฏิกิริยาแอนติเจนและแอนติบอดียังเกิดขึ้นในทั้งสองวิธี
- นอกจากนี้ อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ทั้งทางตรงและทางอ้อมยังใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงเพื่อตรวจหาแอนติเจน
ภูมิคุ้มกันทางตรงและทางอ้อมต่างกันอย่างไร
ภูมิคุ้มกันสามารถเป็นได้ทั้งทางตรงและทางอ้อมโดยอิงจากการผันของฟลูออโรฟอร์กับแอนติบอดีที่ใช้ ในอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์โดยตรง ฟลูออโรฟอร์คอนจูเกตกับแอนติบอดีปฐมภูมิ ซึ่งเป็นแอนติบอดีเดี่ยวที่เกี่ยวข้องกับเทคนิคนี้ ในทางตรงกันข้าม ในอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางอ้อม ฟลูออโรฟอร์คอนจูเกตกับแอนติบอดีทุติยภูมิ ซึ่งเป็นหนึ่งในสองประเภทของแอนติบอดีที่เกี่ยวข้องกับเทคนิคนี้ ดังนั้น ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างอิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรงและโดยอ้อมคือชนิดของแอนติบอดีที่คอนจูเกตกับฟลูออโรฟอร์
อินโฟกราฟิกต่อไปนี้แสดงการเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่างอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางตรงและทางอ้อม
สรุป – ภูมิคุ้มกันทางตรงและทางอ้อม
อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์เป็นเทคนิคที่ใช้ในการตรวจหาแอนติเจนที่จำเพาะในตัวอย่าง เทคนิคนี้ใช้แอนติบอดีจำเพาะ ดังนั้นในเรื่องนี้ แอนติบอดีคอนจูเกตกับฟลูออโรฟอร์เพื่อตรวจจับพวกมันโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง นอกจากนี้ immunofluorescence มีสองประเภทคือ immunofluorescence ทางตรงและทางอ้อม อิมมูโนฟลูออเรสเซนโดยตรงเกี่ยวข้องกับแอนติบอดีเดี่ยวและฟลูออโรฟอร์ที่คอนจูเกตโดยตรงกับแอนติบอดีนี้ อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ทางอ้อมเกี่ยวข้องกับแอนติบอดีสองตัว ปฐมภูมิและทุติยภูมิและฟลูออโรฟอร์ที่คอนจูเกตกับแอนติบอดีทุติยภูมิเนื่องจากแอนติบอดีทุติยภูมิหลายชนิดสามารถจับกับแอนติบอดีปฐมภูมิ และฟลูออโรฟอร์หลายตัวสามารถคอนจูเกตกับแอนติบอดีทุติยภูมิได้ อิมมูโนฟลูออเรสเซนทางอ้อมจึงเป็นวิธีการที่ละเอียดอ่อนกว่าวิธีทางตรง นอกจากนี้ วิธีทางอ้อมยังถูกกว่าวิธีทางตรงอีกด้วย ดังนั้น นี่คือความแตกต่างระหว่าง immunofluorescence โดยตรงและโดยอ้อม