ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการแปลนิกและการเติมปลายคือการแปลนิคเป็นกระบวนการที่สร้างโพรบดีเอ็นเอที่มีป้ายกำกับสำหรับปฏิกิริยาการผสมพันธุ์แบบต่างๆ ในขณะที่การเติมปลายเป็นเทคนิคที่สร้างชิ้นส่วนทื่อโดยการเพิ่มนิวคลีโอไทด์ลงในส่วนที่ยื่นออกมา
การแปลแบบนิกและการเติมปลายเป็นสองเทคนิคที่ใช้ในอณูชีววิทยา การแปลนิคใช้สำหรับติดฉลากโพรบสำหรับไฮบริไดเซชันเพื่อตรวจจับลำดับนิวคลีโอไทด์ที่เฉพาะเจาะจง การอุดปลายท่อใช้สำหรับทำชิ้นส่วนทื่อที่มีปลายเหนียวและมีระยะยื่นแบบเกลียวเดียว เทคนิคทั้งสองมีความสำคัญอย่างยิ่ง และมักดำเนินการในห้องปฏิบัติการวิจัยระดับโมเลกุล
นิคแปลนคืออะไร
การแปลนิคเป็นเทคนิคสำคัญที่ใช้ในการเตรียมโพรบที่ติดฉลากไว้สำหรับเทคนิคทางอณูชีววิทยาต่างๆ เช่น การซับ การผสมแบบในแหล่งกำเนิด การผสมแบบฟลูออเรสเซนต์ในแหล่งกำเนิด เป็นต้น เป็นวิธีการติดฉลากดีเอ็นเอในหลอดทดลอง โพรบ DNA ใช้เพื่อระบุลำดับ DNA หรือ RNA ที่เฉพาะเจาะจง ด้วยความช่วยเหลือของหัววัดที่ติดฉลากไว้ ชิ้นส่วนจำเพาะสามารถทำเครื่องหมายหรือมองเห็นได้จากส่วนผสมที่ซับซ้อนของกรดนิวคลีอิก ดังนั้นโพรบที่ติดฉลากจึงจัดทำขึ้นโดยใช้เทคนิคต่างๆ การแปลนิคเป็นวิธีหนึ่งที่สร้างโพรบที่ติดฉลากด้วยความช่วยเหลือของเอ็นไซม์ DNase 1 และ DNA polymerase 1
รูปที่ 01: Nick Translation
กระบวนการแปลนิกเริ่มต้นด้วยการทำงานของเอนไซม์ DNase 1DNase 1 แนะนำชื่อเล่นให้กับกระดูกสันหลังฟอสเฟตของ DNA ที่มีเกลียวสองเส้นโดยการตัดพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ระหว่างนิวคลีโอไทด์ เมื่อสร้างนิคแล้ว จะมีการผลิตนิวคลีโอไทด์กลุ่ม 3′ OH อิสระ และเอ็นไซม์ DNA polymerase 1 จะทำหน้าที่กับมัน กิจกรรม exonuclease 5′ ถึง 3′ ของ DNA polymerase 1 กำจัดนิวคลีโอไทด์จากนิกไปยังทิศทาง 3′ ของสาย DNA
กิจกรรมโพลีเมอเรสของเอ็นไซม์ DNA polymerase 1 จะทำงานและเพิ่มนิวคลีโอไทด์เพื่อแทนที่นิวคลีโอไทด์ที่ถูกกำจัดออกไปพร้อมกัน หากนิวคลีโอไทด์ติดฉลาก การแทนที่จะเกิดขึ้นโดยนิวคลีโอไทด์ที่ติดฉลาก และจะทำเครื่องหมายดีเอ็นเอเพื่อระบุตัวตน สุดท้ายนี้ ดีเอ็นเอที่ติดฉลากสังเคราะห์ใหม่นี้สามารถใช้เป็นโพรบในปฏิกิริยาการผสมพันธุ์ต่างๆ ได้
การเติมปลายคืออะไร
การอุดปลายเป็นเทคนิคที่ใช้ในอณูชีววิทยาเพื่อทำให้เป็นชิ้นๆ การย่อยแบบจำกัดทำให้เกิดชิ้นส่วนที่มีส่วนที่ยื่นออกมา ชิ้นส่วนเหล่านี้อาจเข้ากันไม่ได้ในการรวมเข้ากับพลาสมิดเวกเตอร์เวกเตอร์มักจะทื่อเพื่อให้สามารถรวมปลายที่ไม่เข้ากัน ดังนั้น ชิ้นส่วนที่มีส่วนที่ยื่นออกมาสามารถทำให้ทื่อได้โดยการเพิ่มนิวคลีโอไทด์ไปยังเส้นใยเสริมโดยใช้ส่วนที่ยื่นออกมาเป็นแม่แบบสำหรับการเกิดพอลิเมอไรเซชัน กระบวนการนี้เรียกว่าการเติมปลาย
DNA polymerase เช่น ชิ้นส่วน Klenow ของ DNA Polymerase I และ T4 DNA Polymerase กระตุ้นการเติมที่ปลาย พวกเขาเพิ่มนิวคลีโอไทด์เพื่อเติม (5′ → 3′) และเคี้ยวกลับ (3′ → 5′) เมื่อเติมปลายเหนียวแล้ว จะกลายเป็นทื่อ และพร้อมที่จะผูกมัดเป็นเวกเตอร์
นอกจากนี้ การอุดปลายยังสามารถใช้เพื่อติดฉลากโมเลกุลดีเอ็นเอ อย่างไรก็ตาม สามารถใช้เพื่อติดฉลากโมเลกุลดีเอ็นเอที่มีปลายเหนียวเท่านั้น เมื่อเทียบกับการแปลแบบนิก การเติมปลายเป็นวิธีที่อ่อนโยนกว่าซึ่งไม่ค่อยทำให้ DNA แตก
อะไรคือความคล้ายคลึงกันระหว่างการแปลของนิคกับการเติมท้าย
- ทั้งการแปลนิกและการเติมปลายเป็นเทคนิคทางอณูชีววิทยา
- ใช้ติดป้ายหัววัดได้
- อยู่ในหลอดแก้วทั้งคู่
ความแตกต่างระหว่างการแปลของนิคกับการเติมท้ายคืออะไร
การแปลนิคเป็นเทคนิคที่สร้างโพรบที่มีป้ายกำกับสำหรับการผสมข้ามพันธุ์ ในทางตรงกันข้าม การเติมปลายเป็นเทคนิคที่สร้างเศษทู่สำหรับการผูกเป็นเวกเตอร์ นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการแปลนิคและการเติมส่วนท้าย นอกจากนี้ การแปลของ Nick ต้องใช้กิจกรรม exonuclease 5’to 3′ ในขณะที่การเติมส่วนท้ายไม่ต้องการกิจกรรม exonuclease 5’to 3′
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงความแตกต่างระหว่างการแปลนิกและการกรอกรายละเอียดเพิ่มเติม
สรุป – Nick Translation vs End Filling
การแปลแบบนิกเป็นวิธีที่รวมนิวคลีโอไทด์ที่ติดฉลากกัมมันตภาพรังสีเข้าไว้ในดีเอ็นเอ มันสังเคราะห์โพรบที่ติดฉลากตามกิจกรรมของเอนไซม์ DNase 1 และ E. coli DNA polymerase 1 ในทางกลับกัน การเติมปลายเป็นเทคนิคที่ทำให้เกิดเศษทื่อ เมื่อชิ้นส่วนมีปลายเหนียว (ส่วนที่ยื่นเป็นเกลียวเดี่ยว) จำเป็นต้องทำให้ปลายทื่อเพื่อมัดเป็นเวกเตอร์ การเติมส่วนปลายจะเพิ่มนิวคลีโอไทด์ที่เข้ากันได้ และสร้างชิ้นส่วนปลายทู่เพื่อให้เข้ากันได้สำหรับ ligation ดังนั้น นี่จึงสรุปความแตกต่างระหว่างการแปลนิคและการเติมตอนท้าย