ข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Elisa กับ Elispot คือ Elisa เป็นการทดสอบ immunosorbent ที่เชื่อมโยงกับเอ็นไซม์ซึ่งกำหนดความเข้มข้นรวมของโปรตีนส่งสัญญาณที่หลั่งออกมา ในขณะที่ Elispot คือการทดสอบ immunosorbent ที่เชื่อมโยงกับเอ็นไซม์ซึ่งตรวจจับเซลล์ที่สร้างไซโตไคน์แต่ละตัว
Elisa และ Elispot เป็นชุดตรวจอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์สองแบบที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านการแพทย์ พยาธิวิทยาของพืช เทคโนโลยีชีวภาพ และอุตสาหกรรมยาต่างๆ ในเทคนิคเหล่านี้ ตัววิเคราะห์โปรตีนจะถูกตรวจพบโดยแอนติบอดีที่ต่อต้านมัน Elisa เป็นการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่ได้รับความนิยมมากที่สุดที่ใช้ในห้องปฏิบัติการ ในทางกลับกัน Elispot เป็นการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ซึ่งไม่ได้ใช้แทน Elisa แต่ใช้มากกว่า Elisa ในห้องปฏิบัติการ
Elisa Assay คืออะไร
Elisa คือการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่กำหนดความเข้มข้นรวมของโปรตีนส่งสัญญาณที่หลั่งออกมา เป็นการทดสอบทางชีวเคมีเชิงวิเคราะห์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายซึ่งได้รับการอธิบายครั้งแรกโดย Engvall และ Perlmann ในปี 1971 เทคนิคนี้ใช้เอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์ประเภทโซลิดเฟสเพื่อตรวจหาโปรตีนจำเพาะในตัวอย่างของเหลวโดยใช้แอนติบอดีที่ต่อต้านโปรตีนจำเพาะนี้ การทดสอบนี้เป็นเครื่องมือวินิจฉัยที่ใช้กันทั่วไปในด้านการแพทย์ พยาธิวิทยาพืช และเทคโนโลยีชีวภาพ
กลไกการทดสอบ ELISA
ในการทดสอบ ELISA ส่วนใหญ่ แอนติเจนที่ไม่ทราบจำนวนจะถูกตรึงไว้บนฐานรองรับ (แผ่นไมโครลิตร) ในตอนเริ่มต้น จากนั้นจึงใช้แอนติบอดีปฐมภูมิที่เข้าคู่กันบนพื้นผิวที่รองรับที่เป็นของแข็ง แอนติบอดีนี้สร้างสารเชิงซ้อนที่มีแอนติเจน (แอนติเจน-แอนติบอดีเชิงซ้อน) แอนติบอดีปฐมภูมิที่จับกับแอนติเจนสามารถตรวจพบได้โดยแอนติบอดีทุติยภูมิที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ผ่านการคอนจูเกชันทางชีวภาพในขั้นตอนสุดท้ายของการทดสอบ Elisa จะมีการเติมสารที่มีซับสเตรตของเอนไซม์ หากมีการจับที่เหมาะสมของแอนติบอดีปฐมภูมิกับแอนติเจน สารตั้งต้นจะเกิดการเปลี่ยนสีที่ตรวจจับได้ ในที่สุด สิ่งนี้จะวัดปริมาณแอนติเจนในตัวอย่าง
รูปที่ 01: ประเภทต่างๆ ของเอลิซ่า
นอกจากนี้ยังมีแนวทางที่แตกต่างกันสำหรับ Elisa เช่น Elisa โดยตรงและ Elisa โดยอ้อม ในปัจจุบัน การทดสอบ Elisa แบบต่างๆ ถูกใช้เพื่อตรวจหาเชื้อโรคในมนุษย์ เช่น Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, hepatitis B virus, hepatitis C virus, enterotoxin ที่ผลิต E.coli, HIV และ SARS-CoV-2
Elispot Assay คืออะไร
Elispot คือการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่ตรวจจับเซลล์ที่หลั่งไซโตไคน์แต่ละตัว Cecil Czerkinsky อธิบาย ELISpot เป็นครั้งแรกในปี 1983เป็นประเภทของการทดสอบที่มุ่งเน้นไปที่การวัดความถี่ของการหลั่งไซโตไคน์ในเชิงปริมาณสำหรับเซลล์เดียว นอกจากนี้ยังจัดเป็นเทคนิคที่ใช้แอนติบอดีเพื่อตรวจหาสารวิเคราะห์โปรตีนทางชีววิทยาหรือเคมี การทดสอบ Fluorospot เป็นรูปแบบหนึ่งของการทดสอบ Elispot ซึ่งใช้การเรืองแสงเพื่อวิเคราะห์สารวิเคราะห์หลายตัว (โปรตีนที่มีความลับมากกว่า)
กลไกการทดสอบ Elispot
ในกลไกนี้ โมโนโคลนอลแอนติบอดีจำเพาะของไซโตไคน์จะถูกเติมลงในหลุมของเพลตไมโครลิตรในขั้นต้น จากนั้นเซลล์ที่ต้องการจะถูกเพิ่มลงในบ่อน้ำ ต่อมาเซลล์จะถูกฟักตัว ในระหว่างการฟักตัวของเซลล์ เซลล์จะได้รับอนุญาตให้ตอบสนองต่อสิ่งเร้าใดๆ และหลั่งไซโตไคน์ออกมา ไซโตไคน์ที่ถูกหลั่งออกมาจากเซลล์ฟักไข่จะเกาะติดกับแอนติบอดี เนื่องจากเซลล์ถูกล้อมรอบด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีจำเพาะของไซโตไคน์
รูปที่ 02: Elispot Assay
เพื่อตรวจหาโมโนโคลนอลแอนติบอดีจำเพาะของไซโตไคน์เหล่านี้ แอนติบอดีตรวจจับจำเพาะที่ไบโอตินิลเลตจะถูกเพิ่มเข้าไปในบ่อน้ำ แอนติบอดีตรวจจับจำเพาะที่ไบโอตินิลเลตจับโมโนโคลนัลแอนติบอดีจำเพาะของไซโตไคน์ในบ่อน้ำ นอกจากนี้ คอนจูเกตของสเตรปทาวิดิน-เอ็นไซม์จะถูกเติมลงในหลุมเพื่อจับกับแอนติบอดีสำหรับตรวจหา ในขั้นตอนสุดท้าย จะมีการเติมพื้นผิวเฉพาะลงในหลุม ปฏิกิริยาของเอ็นไซม์คอนจูเกตและซับสเตรตทำให้เกิดจุดที่แตกต่างกันในบ่อน้ำ จุดที่แตกต่างกันเหล่านี้จะถูกอ่านบนเครื่องอ่าน ELISpot แบบอัตโนมัติ ในที่สุด สิ่งนี้จะคำนวณความถี่ของการหลั่งไซโตไคน์เพิ่มเติม
ความคล้ายคลึงกันระหว่างเอลิซ่ากับเอลิสพอตคืออะไร
- เป็นทั้งชุดตรวจอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์
- ทั้งชุดตรวจตรวจพบสารวิเคราะห์โปรตีนจำเพาะ
- การทดสอบเหล่านี้ใช้แอนติบอดีจำเพาะเพื่อระบุตัววิเคราะห์โปรตีน
- การทดสอบทั้งสองแบบใช้เอนไซม์และสารตั้งต้น
- ใช้เป็นเครื่องมือวินิจฉัยในห้องปฏิบัติการทางการแพทย์
เอลิซ่ากับเอลิสพอตต่างกันอย่างไร
Elisa คือการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่กำหนดความเข้มข้นรวมของโปรตีนส่งสัญญาณที่หลั่งออกมา ในทางกลับกัน Elispot เป็นการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ซึ่งวัดเซลล์ที่หลั่งไซโตไคน์แต่ละตัว นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Elisa และ Elispot นอกจากนี้ ในการทดสอบเอลิซา แอนติเจนจะถูกตรึงบนหลุมไมโครลิตรก่อน ในทางตรงกันข้าม ในการทดสอบ Elispot แอนติบอดีจะถูกตรึงบนหลุมไมโครลิตรก่อน ดังนั้น นี่จึงเป็นข้อแตกต่างระหว่าง Elisa และ Elispot
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงการวิเคราะห์โดยละเอียดของความแตกต่างระหว่าง Elisa และ Elispot ในรูปแบบตาราง
สรุป – Elisa vs Elispot
Elisa และ Elispot เป็นชุดตรวจอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์สองแบบที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านการแพทย์ พยาธิวิทยาของพืช เทคโนโลยีชีวภาพ และอุตสาหกรรมยาต่างๆ Elisa ตรวจพบการมีอยู่ของลิแกนด์ (โปรตีน) ในตัวอย่างของเหลวโดยใช้แอนติบอดีที่มุ่งตรงไปที่ลิแกนด์ที่จะทำการวัด การทดสอบ Elispot เป็นวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจสอบการตอบสนองของภูมิคุ้มกัน ตรวจพบเซลล์ที่หลั่งไซโตไคน์แต่ละตัวโดยใช้แอนติบอดี เป็นทั้งเทคนิค immunoassay และ bioassay ดังนั้น นี่คือบทสรุปของความแตกต่างระหว่าง Elisa และ Elispot