ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการทดสอบ BCA และ Bradford คือการทดสอบ BCA นั้นใช้เวลานานและแม่นยำน้อยกว่า ในขณะที่การทดสอบ Bradford นั้นรวดเร็วและแม่นยำ
BCA และ Bradford assay เป็นสองวิธีในการทดสอบความเข้มข้นของโปรตีน การทดสอบทั้งสองนี้มีหลักการทดสอบที่แตกต่างกันและความแม่นยำต่างกัน
BCA Assay คืออะไร
BCA assay หรือ bicinchoninic acid assay เป็นการทดสอบทางชีวเคมีที่มีประโยชน์ในการกำหนดความเข้มข้นทั้งหมดของโปรตีนในสารละลาย วิธีนี้ได้รับการตั้งชื่อว่า Smith assay ตามนักประดิษฐ์ Paul K. Smith วิธีการวิเคราะห์นี้แสดงความคล้ายคลึงกันกับการทดสอบโปรตีน Lowry, การทดสอบโปรตีน Bradford หรือน้ำยาไบยูเรตเราสามารถสังเกตความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดในตัวอย่างที่กำหนดผ่านการเปลี่ยนสีของสารละลายตัวอย่าง ซึ่งเปลี่ยนจากสีเขียวเป็นสีม่วง การเปลี่ยนสีนี้เกิดขึ้นตามสัดส่วนของปริมาณโปรตีน หลังจากนั้น เราก็สามารถใช้เทคนิคการวัดสีเพื่อวิเคราะห์ความเข้มของสีและปริมาณโปรตีนในตัวอย่างได้
วิธี BCA ของการประมาณโปรตีน
เมื่อพิจารณากลไกของการทดสอบ BCA สารละลาย BCA ทั่วไปประกอบด้วยสารละลายที่มีความเป็นด่างสูงโดยมีค่า pH เกือบประมาณ 11.25 และส่วนผสมในสารละลายนี้ ได้แก่ กรดบิซินโชนินิก โซเดียมคาร์บอเนต โซเดียมไบคาร์บอเนต โซเดียมทาร์เทรต และ คอปเปอร์ (II) ซัลเฟตเพนทาไฮเดรต การทดสอบนี้ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาเคมีสองอย่างเป็นหลัก: การลดลงของคอปเปอร์ (II) เป็นคอปเปอร์ (I) โดยพันธะเปปไทด์ในโปรตีนและคีเลชั่นของกรดบิซินโชนินิกสองโมเลกุลที่มีไอออนของทองแดง (I) ส่งผลให้เกิดสารเชิงซ้อนสีม่วงที่สามารถ ดูดซับแสงที่ความยาวคลื่น 562 นาโนเมตร ในปฏิกิริยาแรก ปริมาณของทองแดง (II) ที่ลดลงโดยพันธะเปปไทด์จะเป็นสัดส่วนกับปริมาณโปรตีนในตัวอย่าง
Bradford Assay คืออะไร
Bradford assay เป็นวิธีวิเคราะห์ทางสเปกโทรสโกปีที่มีประโยชน์ในการวัดความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย วิธีนี้ได้รับการพัฒนาโดย Marion M. Bradford ในปี 1976 และเป็นวิธีที่ค่อนข้างรวดเร็วและแม่นยำ
ปฏิกิริยาสีของโปรตีนและแบรดฟอร์ดรีเอเจนต์
เราสามารถใช้วิธีนี้เพื่อกำหนดความเข้มข้นของปริมาณโปรตีนในตัวอย่างได้ ปฏิกิริยาเคมีที่เกิดขึ้นในตัวอย่างระหว่างการทดสอบนี้ขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของกรดอะมิโนของโปรตีนในตัวอย่างเท่านั้น
วิธีการประเมินโปรตีนของแบรดฟอร์ด
เมื่อพิจารณาวิธีการทดสอบนี้ เป็นการทดสอบโปรตีนตามสีที่อิงตามการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงของสีย้อมที่ชื่อว่า Coomassie Brilliant Blue G-250 โดยทั่วไปแล้ว สีย้อมนี้มีอยู่ในสามรูปแบบคือรูปแบบประจุลบ (สีน้ำเงิน) รูปแบบเป็นกลาง (สีเขียว) และรูปแบบประจุบวก (สีแดง) ดังนั้นภายใต้สภาวะที่เป็นกรด สีย้อมจะเปลี่ยนจากสีแดงเป็นสีน้ำเงิน นี่เป็นเพราะการจับตัวของโปรตีนกับสีย้อม ในทางตรงกันข้าม ถ้าไม่มีโปรตีนจับกับสีย้อม สีจะไม่ปรากฏ สารละลายจะได้สีน้ำตาลแดง สีย้อมนี้สามารถสร้างสารเชิงซ้อนที่แข็งแรงและไม่มีโควาเลนต์ด้วยกลุ่มคาร์บอกซิลของโปรตีนผ่านแรง Van der Waal และแรงดึงดูดของไฟฟ้าสถิต
ความแตกต่างระหว่าง BCA และการทดสอบแบรดฟอร์ดคืออะไร
BCA และ Bradford assay เป็นวิธีการทดสอบสองวิธีในการกำหนดความเข้มข้นของโปรตีน การทดสอบทั้งสองนี้มีหลักการที่แตกต่างกันของการทดสอบและความแตกต่างในด้านความแม่นยำ ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการทดสอบ BCA และ Bradford คือการทดสอบ BCA ใช้เวลานานและแม่นยำน้อยกว่า ในขณะที่การทดสอบ Bradford นั้นรวดเร็วและแม่นยำ
อินโฟกราฟิกต่อไปนี้สรุปความแตกต่างระหว่างการทดสอบ BCA และ Bradford ในรูปแบบตาราง
สรุป – BCA vs การทดสอบแบรดฟอร์ด
BCA assay หรือ bicinchoninic acid assay เป็นการทดสอบทางชีวเคมีที่มีประโยชน์ในการกำหนดความเข้มข้นทั้งหมดของโปรตีนในสารละลาย การทดสอบแบรดฟอร์ดเป็นวิธีการวิเคราะห์ทางสเปกโตรสโกปีที่มีประโยชน์ในการวัดความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย ข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการทดสอบ BCA และ Bradford คือ BCA ใช้เวลานานและแม่นยำน้อยกว่า ในขณะที่การทดสอบ Bradford นั้นรวดเร็วและแม่นยำ
