ข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง BL21 และ DH5 Alpha คือ BL21 เป็นเซลล์ E. coli ที่มีความสามารถทางพันธุวิศวกรรมที่ขาดโปรตีเอสซึ่งใช้เป็นหลักในการแสดงออกของโปรตีน ในขณะที่ DH5 Alpha เป็นเซลล์ E. coli ที่มีความสามารถดัดแปลงพันธุกรรมที่มีการกลายพันธุ์ของ recA1 ที่ใช้เป็นหลัก สำหรับการแปลงพลาสมิด
อี โคไลเป็นหนึ่งในสิ่งมีชีวิตที่มีชื่อเสียงสำหรับการผลิตโปรตีนลูกผสม มันได้กลายเป็นแพลตฟอร์มการแสดงออกที่ได้รับความนิยมมากที่สุดในช่วงหลายปีที่ผ่านมา นอกจากนี้ยังใช้เป็นโรงงานเซลล์ BL21 และ DH5 Alpha เป็นเซลล์ E. coli ที่ดัดแปลงพันธุกรรมสองเซลล์ซึ่งปัจจุบันใช้สำหรับการแสดงออกของโปรตีนและการเปลี่ยนแปลงของพลาสมิดตามลำดับ
BL21คืออะไร
BL21 เป็นเซลล์ E.coli ที่มีความสามารถทางพันธุวิศวกรรมที่ขาดโปรตีเอสซึ่งใช้เป็นหลักสำหรับการแสดงออกของโปรตีน E. coli BL21 เป็นเซลล์แบคทีเรียที่ได้มาจากสายพันธุ์ B มีข้อบกพร่องของ Lon protease และ ompT outer membrane protease โดยทั่วไปจะใช้สำหรับการแสดงออกของโปรตีนลูกผสมเพราะโดยปกติแล้วจะทำให้เกิดความเสถียรต่อโปรตีนที่แสดงออก BL21 มีประโยชน์สำหรับการแสดงออกของโปรตีนด้วย pCold I-IV DNA และ pCold TF DNA แต่เซลล์ E. coli ที่มีความสามารถนี้ไม่ได้มีไว้สำหรับระบบการแสดงออกของโปรตีนโดยใช้โปรโมเตอร์ T7 เช่นระบบ PET เหตุผลเบื้องหลังนี้คือ BL21 ไม่แสดง T7 RNA polymerase นอกจากนี้ ไม่แนะนำให้ใช้ในการสร้างหรือเตรียมพลาสมิด เนื่องจากไม่มีการกลายพันธุ์ของ recA
รูปที่ 01: BL21
BL21 ได้รับการอธิบายครั้งแรกโดย Studier ในปี 1986 หลังจากการดัดแปลงสาย B หลายครั้ง เซลล์ BL21 ขาดโปรตีเอส LON ซึ่งทำให้โปรตีนแปลกปลอมเสื่อมคุณภาพ นอกจากนี้ยังขาดยีนอีกตัวหนึ่งที่เข้ารหัสโปรตีเอสเยื่อหุ้มชั้นนอก (OmpT) ซึ่งมีหน้าที่ในการย่อยสลายโปรตีนนอกเซลล์ การขาดโปรตีนเหล่านี้ทำให้เกิดการผลิตโปรตีนจากต่างประเทศในเซลล์ E. coli BL21 ที่ประสบความสำเร็จ นอกจากนี้ การกลายพันธุ์ของ hsdSB ในเซลล์เหล่านี้ยังช่วยป้องกันการสร้างเมทิลเลชันของ DNA จากต่างประเทศและการหยุดชะงักในเซลล์ BL21
DH5 Alpha คืออะไร
DH5 อัลฟ่าเป็นเซลล์ E. coli ที่ดัดแปลงพันธุกรรมและมีการกลายพันธุ์ของ recA1 ซึ่งส่วนใหญ่ใช้สำหรับการแปลงพลาสมิด เซลล์ DH5 Alpha E. coli ได้รับการดัดแปลงพันธุกรรมโดยนักชีววิทยาชาวอเมริกัน ดักลาส ฮานาฮาน เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพสูงสุดของการเปลี่ยนแปลง เซลล์ DH5 Alpha มีการกลายพันธุ์ที่แตกต่างกันสามแบบ: recA1, endA1 และ lacZΔM15 recA1 เป็นการกลายพันธุ์แบบจุดเดียวที่แทนที่ไกลซีน 160 ด้วยและกรดแอสปาร์ติกตกค้างในพอลิเปปไทด์ recAการกลายพันธุ์นี้ปิดใช้งานกิจกรรมของ recombinases และปิดใช้งาน recombinase ที่คล้ายคลึงกัน การกลายพันธุ์ endA1 จะหยุดการทำงานของเอ็นโดนิวคลีเอสภายในเซลล์ซึ่งป้องกันไม่ให้พลาสมิดที่ใส่เข้าไปเสื่อมสภาพ
รูปที่ 02: DH5 Alpha
นอกจากนี้ การกลายพันธุ์ lacZΔM15 ยังช่วยให้สามารถคัดกรองเซลล์ที่แปลงสภาพเป็นสีน้ำเงิน-ขาว เซลล์เหล่านี้เป็นเซลล์ที่มีความสามารถ มักใช้กับการเปลี่ยนแปลงแคลเซียมคลอไรด์เพื่อแทรกพลาสมิดที่ต้องการ การวิจัยเมื่อเร็วๆ นี้พบว่าเซลล์ DH5 Alpha ด้วยวิธี Hanahan เป็นเซลล์ที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดสำหรับการเปลี่ยนรูปพลาสมิด
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง BL21 และ DH5 Alpha คืออะไร
- BL21 และ DH5 Alpha เป็นสองยีนที่ดัดแปลงพันธุกรรม E.coli
- เป็นเซลล์ที่มีความสามารถทั้งคู่
- ประกอบด้วยการกลายพันธุ์ที่แตกต่างกัน
- ทั้งสองไม่มีที่อยู่อาศัยตามธรรมชาติ
- สิ่งเหล่านี้ใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในห้องปฏิบัติการ เช่น การศึกษาการแสดงออกและขั้นตอนการโคลน
อัลฟ่า BL21 และ DH5 ต่างกันอย่างไร
BL21 เป็นเซลล์ E. coli ที่มีความสามารถทางพันธุวิศวกรรมที่ขาดโปรตีเอสซึ่งใช้เป็นหลักในการแสดงออกของโปรตีน ในทางกลับกัน DH5 Alpha เป็นเซลล์ E. coli ที่มีความสามารถทางวิศวกรรมพันธุกรรมที่มีการกลายพันธุ์ของ recA1 ซึ่งส่วนใหญ่ใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงพลาสมิด นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่าง BL21 และ DH5 Alpha นอกจากนี้ เซลล์ BL21 E. coli ไม่มีการกลายพันธุ์ของ recA1 ในขณะที่เซลล์ DH5 Alpha E. coli มีการกลายพันธุ์ของ recA1
อินโฟกราฟิกต่อไปนี้แสดงความแตกต่างระหว่าง BL21 และ DH5 Alpha ในรูปแบบตาราง
สรุป – BL21 vs DH5 Alpha
E. coli สายพันธุ์ที่ไม่ก่อให้เกิดโรคได้รับการพัฒนาโดยนักวิทยาศาสตร์เพื่อการศึกษาการแสดงออกในห้องปฏิบัติการและการโคลนนิ่งBL21 และ DH5 Alpha เป็นเซลล์ E. coli ที่ดัดแปลงพันธุกรรมสองเซลล์ BL21 ใช้เป็นหลักสำหรับการศึกษาการแสดงออกของโปรตีน ในทางกลับกัน DH5 Alpha ส่วนใหญ่จะใช้เพื่อวัตถุประสงค์ในการแปลงพลาสมิด ดังนั้น นี่คือบทสรุปของความแตกต่างระหว่าง BL21 และ DH5 Alpha
