Acid Fast vs Non Acid Fast Bacteria
ความแตกต่างระหว่างแบคทีเรียที่เป็นกรดเร็วและไม่เป็นกรดนั้นอยู่ที่ผนังเซลล์ของพวกมัน โดยทั่วไปแล้วแบคทีเรียจะถูกระบุและสังเกตด้วยขั้นตอนการย้อมสีที่แตกต่างกัน การย้อมสีด้วยกรดอย่างรวดเร็วเป็นวิธีหนึ่งในการแยกแยะแบคทีเรียบางประเภทออกจากแบคทีเรียชนิดอื่น วิธีนี้ถูกค้นพบครั้งแรกโดย Franz Ziehl และ Friedrich Neelsen ในขณะนั้นเชื้อมัยโคแบคทีเรียมที่เป็นสาเหตุของวัณโรคไม่สามารถย้อมและสังเกตได้โดยใช้วิธีการย้อมสีแบบอื่น เช่น แกรมสเตน Neelsen และ Ziehl ย้อมแบคทีเรียนี้โดยเติมฟีนอล (กรดคาร์โบลิก) และฟูชซินพื้นฐาน (e) ร่วมกับแอลกอฮอล์ที่เป็นกรด ดังนั้นสีย้อมจึงเรียกว่าสารละลาย Carbol Fuchsin(e) หรือรอยเปื้อน Ziehl – Neelsen
ขั้นตอนการย้อมสีกรดเร็ว
เพื่อให้เข้าใจถึงแบคทีเรียที่เป็นกรดอย่างรวดเร็วและไม่ใช่กรดอย่างรวดเร็ว ขั้นแรกเราจะทำตามขั้นตอนการย้อมสี ความคงทนของกรดเป็นคุณสมบัติของแบคทีเรียที่ทนต่อการเปลี่ยนสีด้วยกรดหรือแอลกอฮอล์ที่เป็นกรดในระหว่างขั้นตอนการย้อมสี นี่เป็นคำอธิบายเบื้องต้นโดย Paul Ehrlich ปฏิบัติตามสามขั้นตอนในระหว่างขั้นตอนการย้อมสี
1. การใช้สีย้อมปฐมภูมิ – คาร์โบลฟุชซินเป็นแม่พิมพ์ปฐมภูมิที่ถูกน้ำท่วมด้วยคราบแบคทีเรียที่ติดความร้อนบนสไลด์ที่สะอาด ใช้ความร้อนเพื่อให้แน่ใจว่าสีย้อมซึมเข้าสู่ไซโตพลาสซึม
2. Decolorization – การบำบัดด้วยกรด-แอลกอฮอล์เพื่อขจัดสีย้อมปฐมภูมิ
3. การย้อมสีทับ – ใช้เมทิลีนบลูเพื่อดูแบคทีเรียที่ไม่มีสี
แบคทีเรียที่เป็นกรดเร็วคืออะไร
แบคทีเรียที่มีความคงทนต่อกรดเรียกว่าแบคทีเรียที่เป็นกรดเร็วกล่าวอีกนัยหนึ่ง แบคทีเรียที่ยังคงย้อมด้วยสีแดงหลังจากขั้นตอนการขจัดสีในระหว่างขั้นตอนการย้อมสีด้วยกรดอย่างรวดเร็วเรียกว่าแบคทีเรียที่มีฤทธิ์เป็นกรด อะไรทำให้แบคทีเรียเหล่านี้มีความคงทนต่อกรด? ถ้าเราพิจารณาภาพตัดขวางของผนังเซลล์ของแบคทีเรียที่เป็นกรดอย่างรวดเร็ว ก็จะเข้าใจได้ง่าย
Acid fast stain (หรือ carbolfuchsin) จับเฉพาะแบคทีเรียที่มีผนังเซลล์คล้ายขี้ผึ้ง ผนังเซลล์นี้มีไขมันคล้ายขี้ผึ้งที่ไม่ชอบน้ำซึ่งเรียกว่ากรดไมโคลิก ซึ่งครอบครอง 60% ของผนังเซลล์ เนื่องจากคุณสมบัติไม่ชอบน้ำ วัสดุที่ละลายน้ำได้จะถูกป้องกันไม่ให้เข้าสู่ไซโตพลาสซึม นั่นคือเหตุผลที่แบคทีเรียชนิดนี้ไม่สามารถย้อมด้วยสีที่ละลายน้ำได้ เช่น เมทิลีนบลู คาร์โบลฟุชซินประกอบด้วยฟีนอลและฟูชซินจึงสามารถแทรกซึมไปถึงไซโตพลาสซึมได้
ระหว่างขั้นตอนการทำให้สีแอลกอฮอล์เป็นกรด แอลกอฮอล์ที่เป็นกรดจะถูกป้องกันไม่ให้เข้าสู่ไซโตพลาสซึมเนื่องจากมีกรดไมโคลิกที่ไม่ชอบน้ำ ดังนั้นจึงไม่สามารถกำจัดคาร์โบฟุชซินออกจากเซลล์แบคทีเรียได้ดังนั้นสีย้อมหลักจะยังคงอยู่ในไซโตพลาสซึมแม้หลังจากขั้นตอนการทำให้สีตกแล้ว
Acid fast bacteria ประกอบด้วยหลายสกุล เช่น Mycobacterium และ Nocardia ซึ่งทำให้เกิดโรคในมนุษย์ ทำให้เกิด tuberculosis และ nocardiosis ตามลำดับ
Acid Fast Bacteria เป็นสีแดง
แบคทีเรียที่ไม่มีฤทธิ์เป็นกรดคืออะไร
ถ้าแบคทีเรียไม่ทนต่อกรดจะเรียกว่าแบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดเร็ว หลังจากทำตามขั้นตอนการย้อมสีด้วยกรดอย่างรวดเร็ว แบคทีเรียเหล่านี้จะย้อมด้วยสีน้ำเงิน เนื่องจากแบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดเร็วมีผนังเซลล์บางและขาดกรดไมโคลิกในผนังเซลล์ สิ่งนี้ช่วยให้การแทรกซึมของคาร์โบฟุชซินเข้าไปในไซโตพลาสซึม อย่างไรก็ตาม จะถูกลบออกด้วยการบำบัดด้วยกรดแอลกอฮอล์ ทำให้เซลล์แบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดอย่างรวดเร็วไม่มีสีเพื่อให้สังเกตและแยกความแตกต่างจากแบคทีเรียที่เป็นกรดได้อย่างรวดเร็ว เมทิลีนบลูจะมีประโยชน์ที่นี่
แบคทีเรียที่ไม่ต้องการกรดสามารถย้อมได้โดยใช้แกรมสเตนหรือวิธีการย้อมสีอื่นๆ ตัวอย่างของแบคทีเรียอย่างรวดเร็วที่ไม่มีกรด ได้แก่ Escherichia coli, Pseudomonas sp.
แบคทีเรียที่ไม่มีฤทธิ์เป็นกรดเป็นสีน้ำเงิน
แบคทีเรียที่ไวต่อกรดและไม่ใช่กรดอย่างรวดเร็วแตกต่างกันอย่างไร
ความคงทนของกรด:
• แบคทีเรียที่ไวต่อกรดแสดงความคงทนของกรด
• แบคทีเรียที่ไม่ไวต่อกรด ขาดความคงทนของกรด
ผนังเซลล์:
• แบคทีเรียที่เป็นกรดเร็วมีผนังเซลล์หนาพร้อมชั้นกรดไมโคลิก
• แบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดอย่างรวดเร็วขาดชั้นนี้
แกรมสเตน:
• แบคทีเรียที่เป็นกรดเร็วจะย้อมด้วยแกรมสเตนได้ยากกว่า
• แบคทีเรียที่ไม่มีฤทธิ์เป็นกรดสามารถย้อมโดยใช้แกรมสเตน
ก่อโรคหรือไม่ก่อโรค:
• แบคทีเรียที่เป็นกรดส่วนใหญ่ทำให้เกิดโรคได้
• แบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดเร็วสามารถทำให้เกิดโรคหรือไม่ทำให้เกิดโรคได้
Bacilli หรือ Cocci:
• แบคทีเรียที่เป็นกรดส่วนใหญ่เป็นแบคทีเรีย
• แบคทีเรียที่ไม่เป็นกรดเร็วอาจเป็นแบคทีเรียหรือ cocci