ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการทดสอบ bradford และ lowry protein assay คือการทดสอบโปรตีนของ Bradford ขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงของสีย้อม Coomassie ฟ้าสดใส G-250 ในขณะที่การทดสอบโปรตีน Lowry ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของไอออนทองแดง (Cu+) ผลิตโดยการออกซิเดชันของพันธะเปปไทด์ด้วยรีเอเจนต์ Folin–Cioc alteu
การทดสอบเป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่ช่วยระบุลักษณะส่วนประกอบการทำงานหลักของตัวอย่าง ดังนั้น การทดสอบอาจเป็นการทดสอบเชิงคุณภาพหรือเชิงปริมาณก็ได้ หลายสาขารวมถึงเวชศาสตร์ในห้องปฏิบัติการ เภสัชวิทยา ชีววิทยาสิ่งแวดล้อม อณูชีววิทยา ชีวเคมี และภูมิคุ้มกันวิทยาใช้การทดสอบประเภทนี้เป็นประจำการทดสอบโปรตีนของ Bradford และ Lowry เป็นการสอบวิเคราะห์ทางชีวเคมีสองแบบที่กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลายตัวอย่าง การทดสอบทั้งสองใช้เทคนิคการวัดสีเพื่อให้ได้ผลลัพธ์
Bradford Protein Assay คืออะไร
การทดสอบโปรตีนของแบรดฟอร์ดเป็นขั้นตอนการวิเคราะห์ทางสเปกโตรสโกปีอย่างรวดเร็วสำหรับการวิเคราะห์โปรตีน แสดงความแม่นยำสูงเมื่อวัดความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย Marion Bradford แนะนำขั้นตอนนี้ในปี 1976 ในการทดสอบนี้ ปฏิกิริยาทั้งหมดขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของกรดอะมิโนของโปรตีนที่วัดได้ ในอีกแง่หนึ่ง การทดสอบโปรตีนของแบรดฟอร์ดเป็นการทดสอบสี ใช้สีย้อม Coomassie ฟ้าสดใส ดังนั้น การทดสอบโปรตีนตามสีนี้ขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงของสีย้อม Coomassie ฟ้าสดใส G-250 มีสามรูปแบบ: ประจุบวก (สีแดง), ประจุลบ (สีน้ำเงิน) และเป็นกลาง (สีเขียว) ในช่วงที่เป็นกรด สีย้อมสีแดงจะเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงิน มันยืนยันการผูกมัดของโปรตีน หากไม่มีโปรตีน สารละลายอาจยังคงเป็นสีน้ำตาล
รูปที่ 01: การทดสอบโปรตีนแบรดฟอร์ด
การทดสอบโปรตีนแบรดฟอร์ดแตกต่างจากการทดสอบโปรตีนอื่นๆ เนื่องจากมีความอ่อนไหวน้อยกว่าต่อการรบกวนของสารประกอบทางเคมีต่างๆ ที่มีอยู่ในสารละลายโปรตีน สารประกอบเหล่านี้ได้แก่ โซเดียม โพแทสเซียม กลูโคส และซูโครส เป็นต้น
Lowry Protein Assay คืออะไร
Lowry protein assay เป็นการทดสอบทางชีวเคมีที่ใช้ในการกำหนดระดับโปรตีนทั้งหมดในสารละลาย Oliver H. Lowry คือบุคคลที่พัฒนารีเอเจนต์นี้ในปี 1940 ขั้นตอนนี้แสดงให้เห็นความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดในสารละลายโดยการเปลี่ยนสีที่เป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย ดังนั้น นี่จึงเป็นการทดสอบโปรตีนด้วยสี
ปฏิกิริยาระหว่างไอออนของทองแดง (Cu+) ที่เกิดจากการออกซิเดชันของพันธะเปปไทด์และรีเอเจนต์ Folin–Cioc alteu เป็นพื้นฐานของขั้นตอนนี้นอกจากนี้ รีเอเจนต์นี้ยังมีกรดฟอสโฟโมลิบดิกและกรดฟอสเฟอร์-ทังสติก อย่างไรก็ตาม กลไกปฏิกิริยาของการทดสอบโปรตีน Lowry ยังไม่เป็นที่เข้าใจกันดีนัก แต่มันเกี่ยวข้องกับการออกซิเดชันของซิสเทอีน ทริปโตเฟน และไทโรซีนตกค้างโดยการลดรีเอเจนต์ของ Folin–Cioc alteu
รูปที่ 02: การทดสอบโปรตีน Lowry
ซิสเทอีนตกค้างมีส่วนทำให้การดูดกลืนแสงที่สังเกตพบในการทดสอบโปรตีน Lowry และปฏิกิริยาส่งผลให้เกิดโมเลกุลสีน้ำเงินสดใส heteropoly โมลิบดีนัมสีน้ำเงิน การลดลงของโมเลกุลนี้วัดโดยการดูดกลืนแสงที่ 660 นาโนเมตร ดังนั้นความเข้มข้นของซิสเทอีนและทริปโตเฟนตกค้างที่ลดรีเอเจนต์ Folin–Cioc alteu จะสรุปความเข้มข้นทั้งหมดของโปรตีนในสารละลาย
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง Bradford และ Lowry Protein Assay คืออะไร
- การทดสอบโปรตีนของ Bradford และ Lowry กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย
- ทั้งสองวิธีเป็นวิธีการวัดสี
- ความไวของทั้งสองวิธีก็สูงเช่นกัน
การทดสอบโปรตีน Bradford และ Lowry แตกต่างกันอย่างไร
การทดสอบโปรตีนของ Bradford และ Lowry เป็นชุดทดสอบสองประเภทที่กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย การทดสอบโปรตีนในแบรดฟอร์ดอาศัยการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงของสีย้อม Coomassie ฟ้าสดใส G-250 ในขณะที่การทดสอบโปรตีน Lowry ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของไอออนทองแดงที่เกิดจากการออกซิเดชันของพันธะเปปไทด์ด้วยรีเอเจนต์ Folin–Cioc alteu นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการทดสอบโปรตีนของ Bradford และ Lowry การทดสอบโปรตีนแบรดฟอร์ดใช้เวลา 15 นาทีในการสร้างผลลัพธ์ในขณะที่การทดสอบโปรตีนโลเวอรี่ใช้เวลา 40-60 นาทีในการสร้างผลลัพธ์ ดังนั้น นี่เป็นข้อแตกต่างระหว่างการทดสอบโปรตีนของ Bradford และ Lowry นอกจากนี้ การทดสอบโปรตีนของแบรดฟอร์ดยังขึ้นกับองค์ประกอบของกรดอะมิโนในขณะที่การทดสอบโปรตีนโลว์รีนั้นขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของกรดอะมิโนบางส่วนดังนั้น นี่จึงเป็นข้อแตกต่างระหว่างการทดสอบโปรตีนของ Bradford และ Lowry
ด้านล่างอินโฟราฟิคให้รายละเอียดเพิ่มเติมเกี่ยวกับความแตกต่างระหว่างการทดสอบโปรตีนแบรดฟอร์ดและโลว์รี่
สรุป – การทดสอบโปรตีนแบรดฟอร์ดกับ Lowry
การทดสอบเป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่ใช้ในการอธิบายลักษณะส่วนประกอบการทำงานหลักของตัวอย่าง การทดสอบโปรตีนของ Bradford และ Lowry เป็นการทดสอบโปรตีนสองประเภทที่ทำงานภายใต้เทคนิคการวัดสี การทดสอบโปรตีนทั้ง Bradford และ Lowry กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลาย อย่างไรก็ตาม ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Bradford และ Lowry Protein Assay อยู่ที่เทคนิคการวัดสีที่ใช้ การทดสอบโปรตีนในแบรดฟอร์ดใช้ G-250 สีฟ้าสดใสของ Coomassie ในขณะที่การทดสอบโปรตีน Lowry ใช้ไอออนของทองแดง (Cu+) และสารทำปฏิกิริยา Folin–Cioc alteuนอกจากนี้ วิธีแบรดฟอร์ดยังให้ผลลัพธ์ที่รวดเร็วกว่าการทดสอบโปรตีน Lowry อย่างไรก็ตาม ทั้งสองวิธีเป็นวิธีการที่มีความไวสูงและอาจถูกรบกวนจากสารต่างๆ