ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการโฟกัสแบบโครมาโตโฟกัสและการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกคือโครมาโตโฟกัสเป็นวิธีการโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ซึ่งใช้เรซินแลกเปลี่ยนไอออนในขณะที่การโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกเป็นเทคนิคอิเล็กโตรโฟรีซิสชนิดหนึ่งซึ่งใช้เจลไล่ระดับ pH แบบตรึง
การโฟกัสด้วยโครมาโตและการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกเป็นสองเทคนิคที่แยกโปรตีนตามจุดไอโซอิเล็กทริก ทั้งการโฟกัสแบบโครมาโตโฟกัสและการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกมีกำลังการแยกภาพที่ยอดเยี่ยม การโฟกัสด้วยโครมาโตโฟกัสเป็นวิธีการโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ที่มีความละเอียดสูง ในขณะที่การโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกเป็นวิธีการแยกอิเล็กโตรโฟรีติกนอกจากนี้ โครมาโตโฟกัสจะไม่ใช้สนามไฟฟ้าในขณะที่การโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกต้องการสนามไฟฟ้า
Chromatofocusing คืออะไร
Chromatofocusing เป็นโครมาโตกราฟีแบบอิลูชั่นสูงชนิดหนึ่งที่แยกโปรตีนตามความแตกต่างในจุดไอโซอิเล็กทริกของพวกมัน ใช้คอลัมน์เรซินแลกเปลี่ยนไอออนและการไล่ระดับ pH ที่พัฒนาขึ้นภายใน การโฟกัสแบบโครมาโตโฟกัสไม่เกี่ยวข้องกับสนามไฟฟ้าต่างจากโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริก Chromatofocusing เป็นเทคนิคการทำให้บริสุทธิ์ที่ทรงพลัง ซึ่งสามารถแก้ไขโมเลกุลที่คล้ายคลึงกันอย่างมาก แม้จะแตกต่างกันเพียง 0.02 หน่วย pH ดังนั้นโครมาโตโฟกัสจึงเหมาะที่สุดสำหรับขั้นตอนการขัดเงาขั้นสุดท้ายเมื่อต้องการความละเอียดสูงในการแยกส่วนประกอบที่คล้ายกันมาก
ในโครมาโตโฟกัส ตัวอย่างจะถูกนำไปใช้กับคอลัมน์โดยการผสมกับบัฟเฟอร์เริ่มต้น โปรตีนที่ pH เหนือจุดไอโซอิเล็กทริกของพวกมันจะมีประจุเป็นลบและพวกมันจะยังคงอยู่ใกล้ส่วนบนของคอลัมน์ ในขณะที่โปรตีนอื่นๆ ซึ่งอยู่ที่ pH ต่ำกว่าจุดไอโซอิเล็กทริกของพวกมันจะเคลื่อนตัวลงมาตามคอลัมน์โปรตีนที่มีจุดไอโซอิเล็กทริกสูงสุดจะถูกชะออกไปก่อน ในขณะที่โปรตีนที่มีจุดไอโซอิเล็กทริกต่ำที่สุดจะถูกชะออกจากคอลัมน์สุดท้าย เทคนิคนี้ได้รับผลกระทบจากปัจจัยหลายประการ เช่น การตกตะกอนของโปรตีนและความเป็นเส้นตรงของการไล่ระดับ pH
การโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริกคืออะไร
การโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริกเป็นเทคนิคที่แยกโมเลกุลต่างๆ ตามจุดไอโซอิเล็กทริก เป็นที่รู้จักกันว่าอิเล็กโตรโฟกัส เทคนิคนี้มักใช้สำหรับการแยกโปรตีนในเจล ในการโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริก ตัวอย่างจะถูกเติมลงในเจลเกรเดียนต์ pH (IPG) แบบตรึง เจล IPG เป็นเมทริกซ์เจลอะคริลาไมด์โคพอลิเมอร์ที่มีการไล่ระดับ pH โปรตีนจะย้ายไปยังแคโทดจนกระทั่งพบบริเวณ pH ของจุดไอโซอิเล็กทริก เมื่อโปรตีนไปถึง pH ซึ่งไม่มีประจุสุทธิ การอพยพจะหยุดและให้แถบที่อยู่กับที่ ในทำนองเดียวกัน โปรตีนแต่ละตัวจะให้แถบที่จุดหนึ่งในการไล่ระดับ pH ที่สอดคล้องกับจุดไอโซอิเล็กทริก
รูปที่ 01: Isoelectric Focusing
การโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริกเป็นขั้นตอนแรกของเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสแบบสองมิติ ในเทคนิคนั้น ขั้นแรกให้แยกโปรตีนตามจุดไอโซอิเล็กทริกของพวกมันโดยการโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริก จากนั้นแยกด้วยน้ำหนักโมเลกุลของพวกมันผ่าน SDS-PAGE
ความคล้ายคลึงกันระหว่าง Chromatofocusing และ Isoelectric Focusing คืออะไร
- การโฟกัสด้วยโครมาโตและโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกเป็นสองวิธีที่มีความละเอียดสูง
- ทั้งสองอิงตามจุดไอโซอิเล็กทริกของโปรตีน
- เทคนิคเหล่านี้ใช้การไล่ระดับ pH
- ทั้งสองขั้นตอนเป็นข้อมูลสำหรับการกำหนดลักษณะของฮีโมโกลบินของมนุษย์
- พวกเขาสามารถแก้ไขโมเลกุลที่ค่า pI แตกต่างกันเพียง 0.02 หน่วย pH
การโฟกัสด้วยโครมาโตโฟกัสและการโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริกต่างกันอย่างไร
Chromatofocusing เป็นเทคนิคคอลัมน์โครมาโตกราฟีความละเอียดสูงที่แยกโปรตีนตามจุดไอโซอิเล็กทริก ในทางตรงกันข้าม การโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริกเป็นเทคนิคอิเล็กโตรโฟเรติกซึ่งแยกโปรตีนตามจุดไอโซอิเล็กทริกโดยการใช้สนามไฟฟ้าตามระดับ pH ที่เกิดขึ้นในเส้นเลือดฝอย นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการโฟกัสแบบโครมาโตโฟกัสและการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริก
ความแตกต่างอีกประการระหว่างการโฟกัสแบบโครมาโตโฟกัสและการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกคือโครมาโตโฟกัสไม่เกี่ยวข้องกับสนามไฟฟ้าในขณะที่การโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกต้องการสนามไฟฟ้า
สรุป – Chromatofocusing เทียบกับ Isoelectric Focusing
การโฟกัสด้วยโครมาโตและการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริกเป็นสองเทคนิคที่คล้ายคลึงกันซึ่งมีความสามารถในการแยกโมเลกุลสูง โดยเฉพาะอย่างยิ่งโมเลกุลที่คล้ายกันมาก Chromatofocusing เป็นเทคนิคคอลัมน์โครมาโตกราฟีที่มีความละเอียดสูงในขณะที่การโฟกัสด้วยไอโซอิเล็กทริกเป็นวิธีอิเล็กโตรโฟรีซิส การโฟกัสด้วยโครมาโตโฟกัสไม่เกี่ยวข้องกับสนามไฟฟ้า ต่างจากโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริก ดังนั้น สิ่งนี้จะสรุปความแตกต่างระหว่างการโฟกัสด้วยโครมาโตโฟกัสและการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กทริก