ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการย้อม Coomassie และการย้อมสีเงินคือการย้อม Coomassie เป็นเทคนิคการย้อมโปรตีนที่ใช้คราบสีน้ำเงินที่สดใสของ Coomassie ในขณะที่การย้อมเศษไม้เป็นเทคนิคการย้อมโปรตีนที่ใช้การย้อมสีเงิน
การแยกและระบุโปรตีนเป็นขั้นตอนสำคัญในการวิเคราะห์โปรตีน พวกเขาต้องการลักษณะโปรตีนที่มีความละเอียดสูงหลังจากเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส มีเทคนิคการย้อมสีมากมายซึ่งรวมถึงคราบต่างๆ เช่น สีย้อมประจุลบ (คูแมสซีสีน้ำเงินสดใส) ไอออนของโลหะ (อิมิดาโซล-สังกะสี) คราบเงิน และสีย้อมเรืองแสง เป็นต้น บางครั้งอาจใช้หัววัดกัมมันตภาพรังสีได้เช่นกันการเลือกเทคนิคการย้อมสีขึ้นอยู่กับความเรียบง่าย ความพร้อมของอุปกรณ์ภาพในห้องปฏิบัติการ ฯลฯ
การย้อมสีคูแมสซี่คืออะไร
Coomassie ย้อมเป็นเทคนิคการย้อมโปรตีนที่ใช้คราบสีฟ้าสดใสของคูแมสซี่ โดยทั่วไปเรียกว่าเทคนิคคูแมสซีบลู Coomassie ฟ้าสดใสเป็นสีย้อมโปรตีนประจุลบที่ได้รับความนิยมมากที่สุด โดยปกติคราบนี้จะคราบโปรตีนเกือบทั้งหมดที่มีความเป็นเส้นตรงเชิงปริมาณที่ดีที่ความไวปานกลาง คราบสีน้ำเงินสดใสของ Coomassie จับกับโปรตีนเกือบทั้งหมดโดยไม่จำเพาะเจาะจง คูแมสซี่ไบร์จสเตนบลูสเตนมีให้เลือก 2 แบบ ได้แก่ R-250 และ G-250 R-250 ให้เวลาการย้อมสีที่สั้นกว่า ในขณะที่ G-250 มีจำหน่ายในสูตรที่ละเอียดอ่อนและเป็นมิตรกับสิ่งแวดล้อมมากกว่า
รูปที่ 01: Coomassie Staining
สีย้อม Coomassie เป็นที่นิยมอย่างมากในการศึกษาแมสสเปกโตรเมตรีและการศึกษาการระบุโปรตีน นอกจากนี้ คูแมสซีสเตนที่ปลอดภัยทางชีวภาพยังเป็นสูตรที่ไม่เป็นอันตรายของคูแมสซีบลู G-250 ซึ่งมีจำหน่ายในท้องตลาดในปัจจุบัน ข้อดีของสูตรนี้คือต้องใช้น้ำในการชะล้างและขจัดคราบเท่านั้น คูแมสซี่สเตนที่ปลอดภัยทางชีวภาพให้ความไวเทียบเท่ากับคูแมสซี่บลู G-250 ทั่วไป แต่ดีกว่าคูแมสซี่สเตน R-250 นอกจากนี้ยังมีโปรโตคอลการย้อมสีที่ง่ายและเร็วกว่า Coomassie blue G-250 ทั่วไป ข้อเสียของการย้อมสีคูแมสซีบลูคือมีความละเอียดอ่อนน้อยกว่าเมื่อเทียบกับการย้อมสีเงิน การย้อมสีน้ำเงิน Coomassie มีความไวน้อยกว่าการย้อมสีเงินประมาณ 50 เท่า อย่างไรก็ตาม เนื่องจากความเรียบง่ายในการผูก จึงเป็นที่นิยมในการศึกษาจำนวนมาก
การย้อมสีเงินคืออะไร
การย้อมสีเงินเป็นเทคนิคการย้อมโปรตีนที่ใช้การย้อมสีเงินการย้อมสีเงินใช้เพื่อย้อมทั้งเจลอากาโรสและโพลีอะคริลาไมด์ การย้อมสีเงินของโปรตีนในเจล agarose ได้รับการพัฒนาครั้งแรกในปี 1973 โดย Kerenyi และ Gallyas ต่อมาได้มีการดัดแปลงโปรตีนในเจลโพลีอะคริลาไมด์ที่ใช้ใน SDS-PAGE ปัจจุบันการย้อมสีเงินยังใช้สำหรับการย้อมสี DNA หรือ RNA ในการย้อมเจล เจลจะถูกฟักด้วยสารละลายซิลเวอร์ไนเตรตในวิธีนี้ การย้อมสีเงินทำให้เกิดคราบบริเวณที่มีโปรตีนจากสีน้ำตาลเป็นสีดำ
รูปที่ 02: การย้อมสีเงิน
ความเข้มของการย้อมสีเงินขึ้นอยู่กับโครงสร้างหลักของโปรตีน นอกจากนี้ ความสะอาดของภาชนะที่ใช้และความบริสุทธิ์ของรีเอเจนต์ยังส่งผลต่อคุณภาพของการย้อมสีด้วยเงินอย่างไรก็ตาม ข้อเสียของการย้อมสีเงินคือไม่สามารถตรวจจับโปรตีนได้ทั้งหมด โดยเฉพาะไกลโคโปรตีนและโปรตีนที่มีกลุ่มดัดแปลงขนาดใหญ่ติดอยู่ที่สายด้านข้าง
ความคล้ายคลึงกันระหว่างการย้อมสีคูแมสซี่กับการย้อมสีเงินคืออะไร
- Coomassie และการย้อมสีเงินเป็นสองเทคนิคที่ใช้ในการย้อมโปรตีน
- สามารถเปื้อนได้ทั้งโปรตีนและ DNA
- เทคนิคการย้อมสีทั้งสองมีข้อเสีย
- เทคนิคเหล่านี้มีขั้นตอนที่คล้ายกัน เช่น การซ่อม การย้อมสี และการย้อมสี
คูแมสซี่กับการย้อมสีเงินต่างกันอย่างไร
การย้อม Coomassie เป็นเทคนิคการย้อมโปรตีนที่ใช้คราบสีฟ้าสดใสของคูแมสซี่ ในขณะที่การย้อมเศษไม้เป็นเทคนิคการย้อมโปรตีนที่ใช้การย้อมสีเงิน ดังนั้น นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการย้อมสี Coomassie และการย้อมสีเงิน นอกจากนี้ การย้อมสี Coomassie ยังไวน้อยกว่าการย้อมสีด้วยเงิน
อินโฟกราฟิกด้านล่างแสดงความแตกต่างระหว่างการย้อม Coomassie และสีเงินในรูปแบบตารางสำหรับการเปรียบเทียบแบบเคียงข้างกัน
สรุป – Coomassie vs การย้อมสีเงิน
ในการมองเห็นโปรตีน สามารถทำปฏิกิริยาเคมีย้อมติดเฉพาะโปรตีนหรือสร้างสีได้ สิ่งนี้เรียกว่าการย้อมสีโปรตีน Coomassie และการย้อมสีเงินเป็นสองเทคนิคที่ใช้ในการย้อมโปรตีน เทคนิคการย้อมแบบคูแมสซี่ใช้คราบคูแมสซี่สีน้ำเงินสดใส ในขณะที่การย้อมแบบเศษไม้ใช้การย้อมสีเงิน นี่คือข้อแตกต่างที่สำคัญระหว่างการย้อมสี Coomassie และการย้อมสีเงิน